Koristeći PCR dijagnostiku

Share Tweet Pin it

Polimeraza lančana reakcija (PCR) u molekularnoj biologiji naziva se eksperimentalna metoda detekcije virusa. Omogućuje značajno povećanje koncentracije određenih fragmenata nukleinske kiseline (DNA) u uzorcima biološkog materijala, što omogućuje određivanje (prepoznavanje) i brojanje njih.

Analiza se provodi kako slijedi. Genetski materijal (uzorak krvi), koji potencijalno može sadržavati željeni gen, uvede se u ispitnu epruvetu. Tu se također stavljaju primeri - kemijski sintetizirane male duljine željenog gena.

DNA ili RNA polimeraza se također dodaje u posudu, ona je u stanju izgraditi lanac nukleinskih kiselina koja je potpuno identična originalnoj. Skup od četiri slobodna nukleotida, posebni građevinski materijal za RNK ili DNA, od kojih jedan sadrži radioaktivne čestice fosfora, također se uvodi u rezultirajuću kompoziciju.

Rezultirajuća smjesa se zagrijava do 95-96 ° C, zbog čega se oba DNA helicama, koji su isprepleteni u uobičajenom stanju, razotkriveni. Zatim se priprema ohladi, u ovom trenutku početnice se pričvrste na željeno područje genoma virusa, bez da RNA (ili DNA) ponovo stvori dvostruku spiralu.

Tijekom hlađenja, polimeraza traži slobodan lanac nukleotida. Za funkcioniranje ovog enzima potreban je jedan lanac nukleotida. Jer polimeraze klizi duž lanca DNA (kao uže prsten), dvostruke spirale se ne može raditi.

Nakon toga se provodi ponovljeni ciklus grijanja, zbog čega se nukleotidni lanci razdvajaju. Za svaki od ovih ciklusa PCR, količina željenog hepatitisa u uzorku povećava se u geometrijskoj progresiji, a ostatak genetskog materijala linearno se proizvodi.

Nakon pročišćavanja otopine nukleotidnih ostataka i razdvajanja DNA lanaca parametrom molekularne težine iz elektroforeze, lako je odrediti da li željeni gen postoji u testnom uzorku ili ne.

Prednosti PCR

Laboratorijska studija koja koristi PCR metodu omogućuje dobivanje još više informacija nego jednostavno prisutnost RNA virusa. Prilikom određivanja parametra razine radioaktivnog zračenja, moguće je utvrditi koja je količina genetskog materijala u početku sadržana u uzorku koji se razmatra. U slučaju hepatitisa, odredite razinu viralnog opterećenja.

Druga prednost ove metode je vrlo visoka osjetljivost CR reakcije. To je puno veće od klasičnih metoda za otkrivanje virusa. U idealnom slučaju, da bi se identificiralo željeni gen, samo jedan virus u uzorku je dovoljan za PCR.

Osim toga, PCR je potpuno specifičan. Njegovi su primeri stvoreni na takav način da u potpunosti odgovaraju jedinim dijelovima željenih gena, koji nijedan drugi slijed nema. Oba otisaka prstiju su jedinstveni, au svakom od gena postoje jedinstveni slijedovi nukleotida.

Kvalitativna PCR analiza

Kvalitativna analiza otkriva samo prisutnost virusa u krvi. Taj bi test trebao biti proveden za sve pacijente za koje je utvrđeno da imaju antitijela na hepatitis C u krvi. Rezultat može biti samo jedna od dvije vrijednosti: "otkrivena" ili "nije otkrivena". U zdravih osoba norma (referentna vrijednost) ne smije biti "otkrivena".

Postoji i posebna interpretacija takvih rezultata provedenih kvalitativnih istraživanja:

  • Rezultat je "otkriven". To znači da je u uzorku biološkog materijala preuzeta je pronašao RNA ulomak koji je specifičan za hepatitis C virusom Prema tome, tu je i činjenica pacijenta s virusom hepatitisa B infekcije C. Ako je rezultat kvalitativne PCR je „otkrio”, to znači da virus replicira i u ovom trenutku inficira nove stanice jetre u tijelu.
  • Rezultat je "ne otkrivena". Kao presudi pokazuje da je u uzorku biološkog materijala dobivenog fragmenta RNA nije otkriven u laboratoriju, koji je specifičan za HCV RNA ili jednakom koncentracijom patogena infekcije u uzorku bio je ispod granice osjetljivosti testa.

U akutnoj fazi virusa hepatitis C virusom, kvalitativne studije primjenom PCR tehnike mogu se otkriti nakon 1-2 tjedna neposredno nakon infekcije tijela, tj. Dugo prije pojave antitijela na hepatitis.

Nepouzdani rezultati analiza takve istrage mogu se dobiti:

  • kontaminirana biomaterijala;
  • prisutnost heparina u krvi pacijenta;
  • prisutnost u uzorku kemijskih ili proteinskih supstanci (inhibitori) koji utječu na različite komponente PCR-a.

Za kvalitativnu analizu PCR, posebna priprema pacijenta za studij nije potrebna. Venska krv koristi se kao materijal.

Procjena rezultata

Kvalitativna PCR testa ima određeni stupanj osjetljivosti, a ovisno o točnosti istraživanja i razini opreme u laboratoriju može varirati između 10 i 500 IU / ml.

To znači da ako je prisutan u vrlo maloj koncentraciji virus uzorak krvi (manje od praga osjetljivosti laboratorija), a zatim bolestan ishod pacijent može definirati kao „ne detektira.” Zbog toga, kada se izvođenje kvalitativne analize PCR s niskim razinama viremije (virus niska koncentracija), na primjer, kod pacijenata koji se liječe antivirusne terapije, važno je znati, a prag osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

Varijante dijagnostičkih sustava

Za kontrolu virološkog odgovora preporuča se antivirusno liječenje za korištenje dijagnostičkih sustava s pragom osjetljivosti od najmanje 50 IU / ml. Tih kriterija, na primjer: analizatore Cobas Ampicolor HCV (c točnosti od 50 IU / ml) i RealBest HCV RNA (s osjetljivošću od 15 IU / ml).

Prema preporukama SZO za uspostavljanje konačne dijagnoze hepatitisa C, mora se temeljiti isključivo na temelju trostrukog detekciju virusa RNA u uzorcima seruma iz pacijenta bez drugih vrsta markera hepatitisa.

Uz PCR metode, TMA ispitivanje (transkripcijska amplifikacijska metoda) također se koristi za otkrivanje HCV RNA kod bolesnika. Ona ima najbolji prag osjetljivosti (5-10 IU / ml), ali u našoj zemlji takva metoda testiranja još nije vrlo česta.

Raspon otkrivenih modifikacija virusa

Ovo kvalitativno određivanje seruma prisutnosti RNA virusa hepatitisa C omogućuje određivanje nekoliko genotipova ovog virusa. Trenutno, znanost zna više od šest genotipova ovog virusa, kao i oko 10 podtipova ove bolesti.

U našoj zemlji česti su virusi 1, 2, 3 genotipova. Laboratoriji mogu identificirati sljedeće genotipove: la i lb, 2a, 2b i 2c i 3, 4, 5a i 6, bez obzira na podtipove. Za sve izmjene virusa specifičnost detekcije je 100%.

Kvantitativna analiza PCR-a

Korištenjem kvantitativnog PCR testa određuje se razina koncentracije virusa hepatitisa u uzorcima krvi (viralni opterećenje). Ovaj test za viremiju (koncentraciju virusa) omogućuje određivanje broja jedinica specifičnog genetskog materijala (najviše viralne RNA), koji se detektira u određenoj količini. U tom slučaju, odredite njegovu koncentraciju u 1 ml, što odgovara 1 cu. cm.

Kvantitativni parametri analize su izraženi u brojkama, za ovu uporabu kao mjerne jedinice međunarodnih jedinica (IU) po mililitru (ml), označene kao ME / ml. Sada se u nekim laboratorijima količina virusa može odrediti u drugim jedinicama: broj kopija po ml, označen je kao kopija / ml.

  • Za hepatitis C, takva kvantitativna analiza PCR-a se obavlja neposredno prije početka terapije. Zatim na 1., 4., 12. i 24. tjedna. Procjena na 12. tjednu je indikativna, omogućuje određivanje učinkovitosti terapije.
  • Priprema za analizu. Za kvantitativnu analizu PCR-a nije potrebna posebna priprema pacijenta za ispitivanje. Pola sata prije uzorkovanja, ne smijete pušiti. Venska krv koristi se kao laboratorijski materijal.

Procjena rezultata

Za različite laboratorijske testne sustave, za ovaj pokazatelj postoje različiti faktori konverzije u IU / ml. U prosjeku se koristi parametar pretvorbe u kojem je 4 kopija / ml = 1 IU / ml. To je, na primjer, ako laboratorij daje rezultat PCR analize 2,4 x 10 6 kopija / ml, tada bi taj parametar trebao biti podijeljen s 4, a dobivamo 6 x 10 5 IU / ml.

Visoka razina opterećenja od 800.000 IU / ml smatra se visoka, što je približno jednako indeksu od 3.000.000 kopija / ml. Niža viremija, prema nekim autorima, odgovara parametrima kvantitativnog PCR ispod 400,000 IU / ml.

Kao rezultat kvantitativnog testa, konačni rezultati mogu biti isporučeni ne u obliku digitalne vrijednosti, već: "ispod mjernog raspona" ili "nije detektirano".

  • Procjena: "ispod mjernog raspona". To ukazuje da kvantitativni test nije uspio otkriti viralnu RN hepatitis C, ali sam virus prisutan je u tijelu u vrlo malim koncentracijama. Ovo je indicirano dodatnim kvalitativnim testom, koji potvrđuje činjenicu prisutnosti virusa.
  • Procjena: "nije otkrivena". Ovaj rezultat pokazuje da kvantitativni test nije detektiran virus u uzorku RNA.

Parametar viralnog opterećenja, prije svega, određuje stupanj infektivnosti bolesti, razinu "infektivnosti" pacijenta. Što je koncentracija virusa veća, to je veća vjerojatnost prijenosa podataka na druge ljude. Na primjer, kada se seksate s bolesnom osobom ili vertikalnom stazom. Takav kvantitativni pokazatelj također pomaže u određivanju učinkovitosti pacijentovog liječenja.

Provođenje kvantitativne analize PCC-a važno je za antivirusnu terapiju, vrednovanje njegovog uspjeha i raspoređivanje trajanja tečaja. Dakle, s brzim odzivom tijela na liječenje i niskim stupnjem viremije, trajanje terapije može se smanjiti.

S polaganim smanjenjem kvantitativnog parametra PCR, antivirusna terapija treba biti proširena ili modificirana. Ako je razina viralnog opterećenja niska, onda je to povoljan faktor terapije, ako je visok, onda je primijenjena metoda liječenja nedjelotvorna, a lijekove ili metode njihove upotrebe treba mijenjati.

№ 321 ˛, Virus hepatitisa Σ, definicija RNA od. (HCV-RNA, kvalitativno) u serumu

Određivanje HCV RNA u serumu lančana reakcija polimeraze (PCR) s otkrivanjem u stvarnom vremenu.

Detektirajući fragment je specifično područje RNA virusa hepatitisa C. Identificirani genotipi: la, lb, 2a, 2b, 2c, 2i, 3, 4, 5a, 6, bez obzira na podtip. Specifičnost određivanja je 100%. Osjetljivost određivanja iznosi 60 IU / ml.

  • Klinički znakovi hepatitisa.
  • Prophylactic screening studies (hepatitis C virus RNA - najraniji marker za akutnu infekciju).
  • Istraživanja kontakt osoba.
  • Dijagnoza hepatitisa mješovita etiologija - identifikacija vodećeg virusa.
  • Identifikacija stupnja aktivne replikacije virusa u kroničnom stanju.
  • Kontrola učinkovitosti terapije.
  • Ciroza jetre.

Tumačenje rezultata istraživanja sadrži informacije liječniku koji posjećuju pa nije dijagnoza. Informacije iz ovog odjeljka ne mogu se koristiti za samodijagnostiku i samooblikovanje. Točna dijagnoza daje liječnik, koristeći rezultate istraživanja i potrebne informacije iz drugih izvora: anamneza, rezultati drugih istraživanja, itd.

Dijagnoza s PCR-om za hepatitis C

Svi ne zna koji koriste PCR dijagnostičku metodu za hepatitis C. Jedan od najčešćih grupa oboljenja su zarazne bolesti gastrointestinalnog trakta. Najčešće pate od želuca (ulkusi), crijeva (kolitis, enteritis) i jetre (hepatitis).

Na jetri među svim navedenim organima dodjeljuje se najveći teret. U tijelu je važna uloga jetre:

  1. Gotovo sve metaboličke reakcije pojavljuju se u jetri (ovdje su stvorene sve vitalne komponente koje omogućuju tijelu da funkcionira potpuno).
  2. Jetra je glavni organ koji obavlja detoksikaciju. Uz pomoć (posebice kroz žuči) uklanjaju se mnogi podlozi koji mogu prouzročiti opijenost i dovesti do ozbiljnih posljedica.

Nažalost, mnogi ljudi ne slijede svoje zdravlje zbog onoga što jetra počinje trpjeti. Obično se razvija hepatitis raznih etiologija (virusni, toksični).

Definicija hepatitisa

Virusni hepatitis zauzima važno mjesto među bolesti jetre. Ozbiljnost tijeka bolesti, složenost liječenja, čine ih prvom među patologijama druge prirode ovog organa.

Svi hepatitis su podijeljeni na akutne i kronične. Za akutni prijenos hepatitisa A i B. Među kroničnim na prvom mjestu je hepatitis C.

Ova bolest je uzrokovana virusom hepatitisa C. Karakteristična je značajka da bolest može dugo trajati bez ikakvih kliničkih manifestacija.

Prenosi se uglavnom kroz krv. Uz protok krvi, virus ulazi u jetru, gdje se počinje množiti u svojim stanicama. Kao rezultat akumulacije viriona dolazi do uništavanja zaraženog hepatocita. Kao odgovor, počinju se proizvoditi antitijela koja počinju napadati ostatke hepatocita. Zbog toga, tijekom vremena, bazen je izgrađen protiv jetrenih stanica, što otežava tijek bolesti.

S obzirom na činjenicu da je bolest malosimptomno ili asimptomatske, a klinički simptomi pojavljuju se samo kada je značajno oštećenje stanica, ova bolest zahtijeva stvaranje dijagnostičkih metoda za otkrivanje svoju prisutnost i poduzeti odgovarajuće mjere.

Dijagnoza hepatitisa C: kvalitativne i kvantitativne analize

Trenutno, metode kao što su hepatička biopsija, imunogram upotrebljavaju se za dijagnosticiranje hepatitisa C.

Oni omogućuju izravno određivanje prisutnosti pogođenih hepatocita (biopsija jetre) ili specifičnih antitijela protiv zaraženih stanica (imunogram). Međutim, postoji metoda koja može pouzdano utvrditi prisutnost samog virusa. Ovo PCR je lančana reakcija polimeraze.

Bit ove metode leži u činjenici da se pod određenim uvjetima razvija RNA lanci. To je zbog činjenice da postoje fragmenti virusne čestice u krvi ili uzorak biopsije. Kada se kombiniraju s nekim molekulama u mediju, javlja se sinteza lanaca komplementarnih virusnoj RNA. U naknadne analize i usporedbe sa poznatim nukleotidnog slijeda HCV se može utvrditi da li je virus u tijelu, a da li je oštećenje jetre je prisutna.

PCR se provodi nakon otkrivanja specifičnih antitijela protiv virusa hepatitisa u krvi. Nakon testa, rezultat je izveden - RNA "otkrivena" ili "nije otkrivena". Povremeno, on može reći "nedovoljno materijala" - u ovom slučaju, ponavljanu analizu hepatitisa C.

Ako je broj virusnih čestica manja od potrebne minimalne količine, onda možemo govoriti o tome da hepatitis B nije prisutan, a minimalni iznos od genetskog materijala može biti „zbunjen” zbog mimikrije genetskog materijala, ili neke sekvence nukleotida koji slučajno mogu podudarati s onim virusom.

  1. PCR negativni rezultati mogu se pojaviti kada je u činjenici što su virusne čestice u krvi, ali oni su tako mali (infekcija dogodila u zadnje vrijeme ili analiza je prethodio dug i intenzivan antivirusnu terapiju) da je test sustav jednostavno nije bio u stanju pravilno odrediti njihovu koncentraciju. RNA - "nije otkrivena".
  2. Ako PCR ima pozitivan rezultat, u krvi ima toliko mnogo virusnih čestica da njihov broj prelazi niži prag osjetljivosti ispitnog sustava. U tom slučaju, rizik razvoja zaraznog procesa je visok (ili je već prisutan u prilično zanemarenoj fazi). Obično je visoka količina virusa već pokazatelj za liječenje i kasnije presađivanje jetre.

Ponekad test može postati lažno pozitivan ili lažno negativan.

Neželjeni negativni rezultat hepatitisa PCR je opažen kada postoje neke komponente u reakcijskom mediju koji inhibiraju formiranje kopija čestice virusa. Zbog toga nije moguće dobiti pravu sliku stanja krvi koja doprinosi prolasku virusa i progresiji bolesti. Na reakciju može utjecati prisutnost heparina u krvi (zbog smanjenja relativne viskoznosti krvi). Neispravno tumačenje analize je također moguće kada uvjeti za transport i skladištenje ispitnog materijala nisu zadovoljeni.

Lažni pozitivni rezultati, kada se dijagnosticira hepatitis C, PCR se najčešće daje kada je ispitna cijev ili radni medij kontaminiran. Osim toga, pozitivni rezultati mogu se promatrati u prisutnosti i virusa hepatitisa drugih skupina (zbog križnog reagiranja).

Kvalitativna analiza PCR-a za otkrivanje hepatitisa C

Prisutnost u krvi velikog broja krioglobulina također izravno utječe na ponašanje PCR-a. Zbog toga, prije analize hepatitisa C, potrebno je utvrditi njihovu koncentraciju u krvi kako bi se unaprijed otkrio iskrivljenost rezultata i spriječili.

Nakon provedbe navedenih ispitivanja postaje jasno, postoje li u česticama krvi virusa. Kada su definirani, preporučuje se odmah započinjati antivirusnu terapiju kako bi se usporilo napredovanje procesa. Za razliku od hepatitisa B, nema kompletnog lijeka za hepatitis C; bolest prelazi samo u latentnu fazu i polako počinje teći. Poraz jetre je neizbježan. U posljednjoj fazi postupka, kada se jetra više ne može nositi sa svojom funkcijom, možda će trebati presaditi.

Liječenje se provodi uglavnom s dva lijeka - interferonom i ribavirinom.

Dokazana je njihova učinkovitost u usporavanju procesa lezija hepatocita. U međuvremenu, potrebno je davati infuzijsku terapiju kako bi se olakšalo rad jetre.

Svi bolesnici koji su vidjeli porast broja virusnih čestica u krvi nužno su na računu hepatologa. Nekoliko puta godišnje preporučuje se preventivno ispitivanje kako bi se utvrdilo napredovanje procesa i pravodobno otkrivanje indikacija za transplantaciju. Osim toga, možete koristiti i hepatoprotectors, iako mišljenja liječnika su nešto divergentna. Neki vjeruju da ti lijekovi mogu zaustaviti proces i zaštititi neizbrisane hepatocite; Drugi su uvjereni da nema smisla uzimati ih i da treba provesti intenzivnu antivirusnu terapiju.

Stoga, hepatitis C spada u kategoriju bolesti čije otkrivanje predstavlja neke poteškoće. Poboljšanje dijagnostičkih metoda, kao i pravovremeni preventivni pregledi, smanjuju učestalost ove bolesti. Također je važno spriječiti ovu bolest. Pažljivo izbjegavajte kontakt sa krvlju, odbijajte uzimati lijekove, tek tada će ta bolest biti iskorijenjena. Glavna stvar u sprječavanju i liječenju je pacijentov svjesni stav prema njegovom zdravlju.

Analiza PCR-a za hepatitis

PCR NA HEPATITIS C

  1. RNA hepatitisa C ( „PCR kvalitete”) - otkrivanje u analizi krvi je dokaz o postojanju akutne ili kroničnog hepatitisa C se određuje od 2. tjedna infekcije, prije nego što se prikazuje anti-HCV, što za dijagnosticiranje bolesti u ranim fazama. Određivanje RNA obavlja se kod osoba s klinikom akutnog hepatitisa i osoba s pozitivnim rezultatima analize hepatitisa.
  2. RNA hepatitisa C ("PCR quantitative") - virusni opterećenje - jedan od pokazatelja učinkovitosti antivirusne terapije i njegove procjene (promjenom razine početne vrijednosti). Kvantitativna karakterizacija sadržaja hepatitis C RNA je važna za procjenu učinkovitosti antivirusne terapije i ima prognostičku važnost za određivanje kroničnosti. Pacijenti s visokim količinama viralnog opterećenja (velike količine RNA) prije liječenja reagiraju na lošiji način liječenja.
  3. RNA hepatitisa C (genotipovi 1, 2, 3) - Vrsta liječenja ovisi o vrsti i njegovoj učinkovitosti. Bolest uzrokovana virusom genotipa 1 je najnepovoljnija u odnosu na prognozu učinkovitosti terapije. Prema aktualnim preporukama, prije početka antivirusne terapije treba obaviti krvni test za nas genotipizaciju hepatitisa C.
  4. RNA hepatitisa C (prošireni genotipizacija la, lb, 2, 3a, 4, 5, 6) - na području Rusije kruže 1a, 1b, 2a, 2c, 2k, 3a podtipove. Hepatitis C, uzrokovan virusom genotipova 1 i 4, najnepovoljniji je u odnosu na prognozu.
  5. Ultrasensivni PCR za hepatitis C (kvalitativna metoda) - analiza se koristi za dijagnosticiranje bolesti u ranim fazama infekcije, optimalna je za testiranje davanja krvi i procjenu odgovora na antivirusno liječenje. Ova studija, čak i u odsutnosti antitijela na virus hepatitisa C, preporučuje se za bolesnike s jetrenom bolesti neodređenog uzroka, s stečenim imunodemogućenjem ili primanjem imunosupresivne terapije.
  6. Ultrasensivni PCR za hepatitis C (kvantitativna metoda) - jedinstvena analiza s visokom osjetljivošću (10 IU / ml) za određivanje virusa hepatitisa C u kvantitativnom smislu. Studija se koristi za praćenje učinkovitosti terapije.

PCR NA HEPATITIS B

  1. Hepatitis B DNA (kvalitativna analiza) - indeks reprodukcije hepatitisa B. Prvi se pojavljuje u krvi, prosječno 1 mjesec nakon infekcije. U nekim slučajevima, to je jedini marker latentne infekcije HBV. Određivanje DNA virusa omogućuje dijagnosticiranje hepatitisa B izazvanog mutantnim sojevima, u kojima se ne otkrivaju drugi markeri infekcije.
  2. Hepatitis B DNA (kvantitativna analiza) - Koncentracija DNA (virusni opterećenje) jedan je od testova koji se koriste za određivanje stadija kroničnog hepatitisa B i učinkovitost antivirusne terapije. Analiza se provodi prije i tijekom liječenja.
  3. Genotipizacija hepatitisa B - bolesti uzrokovane različitim genotipima virusa mogu se razlikovati u kliničkom tijeku i ishodu. Hepatitis B, uzrokovan virusom genotipa C, često ima kronični tijek i ima visok rizik od preobrazbe u cirozu jetre ili hepatocelularnog karcinoma. Pacijenti zaraženi virusom genotipa A reagiraju bolje na liječenje.
  4. Ultrasensivni DNA-PCR za hepatitis B (kvalitativna metoda) - preda ih za rano otkrivanje bolesti. Vrlo informativan u proučavanju krvi donora. Može se koristiti za potvrdu spontanog ili liječenja induciranog uklanjanja virusa iz ljudskog tijela.
  5. Ultrasensivni PCR za hepatitis C (kvantitativna metoda) - dijagnosticiranje DNA virusa hepatitisa B u kvantitativnom smislu. Analiza je provedena kako bi se ocijenila učinkovitost terapije.
  6. Određivanje mutacija otpornosti na antivirusne lijekove lamivudin, telbivudin, entekavir, adefovir, tenofovir (dan zajedno s analizom "hepatitisa B kvantitativne DNA"). Provođenje analize nužno je za pacijente s kroničnim hepatitisom B prije početka antivirusne terapije i tijekom primjene lijekova. Rezultat sadrži informacije o dostupnosti otpornosti virusa hepatitisa B na antivirusne lijekove:
    • R - virus je otporan na antivirusni lijek (otkrivene su mutacije rezistencije na ovaj lijek);
    • S - hepatitis B virus je osjetljiv na lijek (noralna vrijednost, mutacije otpornosti nisu otkrivene);
    • I - uzročnik infekcije može uzrokovati otpornost na ovaj lijek.

PCR-studija za hepatitis C: tipovi, indikacije, transkripta

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja se javlja kod oštećenja jetre. U osamdeset posto pacijenata prolazi u kronični oblik. Virus se umnožava u jetrenim stanicama - hepatocitima - i uzrokuje njihovu smrt. Mrtvo tkivo je zamijenjeno žarištima vezivnog tkiva, razvija se fibroza.

S razvojem fibroze jetre ne može obavljati svoju funkciju, počinje cirozu, koja je opasna za njene komplikacije: sve veći pritisak u portalnu venu, gastrointestinalnog krvarenja, oslabljen zgrušavanje krvi, mentalne promjene uslijed oštećenja jezgre mozga otrovne proizvode.

Uzrok bolesti je infekcija virusom iz obitelji Flaviviridae, koja je vrsta RNA virusa. To znači da se genetički materijal kojim se sintetiziraju proteini patogena kodira u molekuli ribonukleinske kiseline. Infekcija se javlja kroz krv, seksualno, i od trudnice do fetusa. Nažalost, između infekcije i početka proizvodnje antitijela može proći prilično veliku količinu vremena - od dva tjedna do šest mjeseci. To ne dopušta odrediti infekciju pomoću metode enzimskog imunološkog pregleda i započeti liječenje u ranoj fazi.

Što je PCR analiza?

PCR je metoda molekularne analize koja omogućuje otkrivanje genetskog materijala patogena već u prvom tjednu nakon infekcije koristeći lančanu reakciju polimeraze. Studija ima visoku specifičnost, točnost i omogućuje ne samo određivanje prisutnosti ili odsutnosti virusa, već i njegovu koncentraciju i genotip.

Za studiju, uzmite krv pacijenta u kojoj se RNA virusa može naći. U krvi se dodaju primeri - umjetno sintetizirani dijelovi željenog gena male duljine, a RNA polimeraza je poseban enzim koji množi količinu genetskog materijala patogena. Uz pomoć posebnog aparata provode se nekoliko ciklusa grijanja i hlađenja. Materijal se zatim analizira i uspoređuje s poznatim virusnim genima, na temelju kojih se donosi zaključak o prisutnosti ili odsutnosti infekcije.

Vrste PCR analize za hepatitis C

Postoje tri vrste PCR analize:

  1. Kvalitativna PCR analiza. Prva faza studije. Omogućuje identificiranje genetskog materijala virusa u krvi.

  • Kvantitativna analiza PCR-a. Omogućuje određivanje količine virusa - koncentraciju genetskog materijala patogena u jednom mililitru krvi. Ova studija se provodi prije početka terapije, a potom na prvom, četvrtom, dvanaestom i (ako je tečaj dug) dvadeset četvrtog tjedna liječenja kako bi se procijenila njezina učinkovitost.

  • genotipizacija. Uzročnik hepatitisa C često i brzo mutira. Na planetu pronađeno je sedam varijanti genotipa tog virusa. U Rusiji su prva, druga i treća vrsta uobičajene. Svaki od genotipova ima različitu otpornost na terapiju, na primjer, učinkovitost liječenja prvog tipa je šezdeset posto, a drugi i treći dosežu osamdeset pet. Stoga, kako bi se odabrali prikladni lijekovi i propisali tijek liječenja dovoljnog trajanja, potrebno je točno utvrditi koja vrsta virusa je zaražena pacijentom.
  • Indikacije za PCR analizu za hepatitis C

    PCR-studija propisana je u sljedećim slučajevima:

    • kontakt s bolesnom osobom, što može dovesti do infekcije;
    • pozitivno enzimski vezani imunotest;
    • znakovi ciroze jetre: promjene veličine jetre, povećana slezena, pojava potkožnog venskog pleksusa na abdomenu;
    • pojava simptoma oštećenja jetre: bol u desnom dijelu trbuha, žućkanje kože;
    • povećana aktivnost ALT i AST u biokemijskoj analizi krvi;
    • prije početka tretmana kako bi se utvrdilo količinu virusa;
    • za praćenje učinkovitosti antivirusne terapije;
    • nakon završetka liječenja za praćenje recidiva;
    • u prisutnosti dijagnoze hepatitisa B, da se isključi mješovita oštećenja jetre.

    Dekodiranje PCR studije za hepatitis C

    Dekodiranje PCR analize i enzimskog imunološkog testa za hepatitis C treba obratiti stručnjak za hepatologu ili zaraznu bolest. Analizirati rezultate PCR je potrebno u kombinaciji s biokemijskim krvnim testom, biopsijom i ultrazvukom. Samo kvalificirani liječnik će moći analizirati rezultate studija i na temelju njih propisati pravu terapiju.

    Dekodiranje kvalitativne analize.

    Genetski materijal patogena pronađen je u analiziranom biološkom materijalu. Potvrđena je infekcija.

    Nema infekcije, ili je količina RNA patogena ispod granice osjetljivosti.

    Dekodiranje kvantitativne analize.

    Normalan lik za zdrave ljude. To znači da ne postoji hepatitis C RNA u ispitnom materijalu, ili je njegova koncentracija ispod prag osjetljivosti studije.

    Koncentracija RNA je ispod raspona kvantitativnosti. Takvi se rezultati tumače vrlo oprezno, povezuju ih s podacima drugih studija, često provode drugu studiju.

    Razina viralnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se niska. Obično smanjenje količine virusa znači da je terapija uspješna.

    Više od 8 x 10 ^ 5 IU / ml

    Razina virusnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se visokom.

    Više od 2,4 x 10 ^ 7 IU / ml

    Količina RNA je iznad gornje granice raspona kvantifikacije. Zaključivanje o stupnju virusnog opterećenja s ovim rezultatom nije moguće. Obično u takvim slučajevima, test se ponavlja s razrjeđivanjem uzorka krvi.

    Dekodiranje genotipizacije.

    Otkriveno je RNA specifičnog genotipa

    U biomateričnom virusu hepatitisa C detektira se specifični genotip i podtip. Rezultat je kodiran rimskim brojevima i latinskim slovima, na primjer - la, 2b. Postoji sedam genotipova i šezdeset sedam podtipova, ali u Rusiji postoje samo tri prve vrste.

    Otkriveno je RNA virus hepatitisa C

    U krvi, RNA se nalazi rijedak genotip za Rusiju, koji se ne može pripisati prvom, drugom ili trećem tipu. Potrebno je više istraživanja.

    Ovaj rezultat pokazuje da je pacijent zdrav, ili da je razina RNA patogena premalena.

    Situacija je moguća kada je PCR analiza za hepatitis C negativna, a enzimski imunosni test detektira protutijela protiv virusa. To znači da je pacijent imao akutni oblik hepatitisa C i izliječio se. Približno dvadesetak slučajeva infekcije rezultira spontanom liječenjem ako tijelo pacijenta ima dovoljno otpornosti na infekciju.

    Unatoč činjenici da je PCR vrlo precizna analiza, njegovi rezultati mogu biti iskrivljeni u sljedećim situacijama:

    • krv je prevezena u laboratorij pod neadekvatnim uvjetima, temperaturni režim je povrijeđen;
    • uzorak biomaterijala je kontaminiran;
    • u krvi su ostali tragovi heparina i drugih antikoagulanata;
    • U ispitivanoj tvari bili su inhibitori - tvari koje usporavaju ili zaustavljaju lančanu reakciju polimeraze.

    Prednosti PCR-a u odnosu na druge metode

    1. Dijagnoza u ranim fazama. PCR detektira genetički materijal uzročnika bolesti. Pomoću imunofluorescentne analize moguće je odrediti samo imunoglobuline - tvari koje tijelo proizvodi kao odgovor na infekciju. U slučaju infekcije hepatitisom C, interval između infekcije i nastupa imunološkog odgovora može biti nekoliko tjedana i mjeseci, a tada ELISA neće biti učinkovit. PCR će dati odgovor već u prvom tjednu nakon infekcije.

  • Niska vjerojatnost pogreške. U istraživanom materijalu određuje se genetički materijal koji je karakterističan samo za jednu vrstu patogena. To vam omogućuje izuzimanje netočnih rezultata. Kod ELISA-e moguće su pogreške jer se istovrsna vrsta protutijela može izdati protiv različitih virusa - takva antitijela nazivaju se križnim reaktivnostima.

  • Visoka osjetljivost. PCR može otkriti RNA patogena čak iu minimalnim količinama. To omogućuje identificiranje skrivenih infekcija.
  • Kako se pripremiti za isporuku krvi za PCR istraživanje

    Za PCR analizu, venska krv je prikupljena za hepatitis C. Obično se dva dijela krvi odvede iz pacijentove vene istodobno: prvi se šalje za PCR, a drugi za ELISA. To je učinjeno kako bi se preciznije procijenilo koliko je pacijent zaražen virusom i kako imunitet bori protiv njega.

    Obično su potrebna sljedeća pravila pacijenta:

    • Ispitivanje krvi uzima se ujutro;
    • prekid između posljednjeg obroka i isporuke krvi trebao bi biti osam do deset sati;
    • dva ili tri dana prije analize morate odustati od pržene i masne hrane i alkohola;
    • za dvadesetčetiri sata prije analize, pacijent treba izbjegavati tjelesno naprezanje: nemojte nositi težine, ne dolazite u teretanu ili bazen.

    Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

    Posebna laboratorijska studija - analiza hepatitis C ptsr - značajno pojednostavljuje dijagnozu ove virusne bolesti. Iznimka nije i hepatitis C. Mali uzorak krvi može se provjeriti za sadržaj RNA i drugog genetskog materijala virusnog agensa. Analiza s PCR-om provodi sve osobe s antitijelima na hepatitis C koji cirkuliraju u krvnoj plazmi čija je prisutnost potvrdila kvalitativnu detekciju.

    Tumačenje rezultata tumači se u grafikonu istraživačkog forme kao "pozitivnu" ili "negativnu" analizu. Osim toga, uz pomoć PCR-a moguće je ne samo kvalitativno odrediti minimalni sadržaj virusa, već i brojanje čestica. Dakle, moguće je odrediti procijenjenu količinu virusa i odrediti što je točnije moguće medicinsku taktiku liječenja.

    Virusna oštećenja jetre

    Jetra kao element probavnog trakta zauzima veliko opterećenje. U svojim stanicama se odvija većina metaboličkih reakcija svih vrsta metabolizma, što osigurava optimalno funkcioniranje svih organa i sustava. Istodobno, njegova vrijednost detoksifikacije je velika za uklanjanje troske i proizvoda metabolizma s fermentativnim žučom.

    Poraz jetre od virusa različite prirode izuzetno je opasno za organ. Različita klinička slika i nepoštivanje liječenja hepatitisa dovodi do prvog mjesta u smislu zdravstvenih opasnosti. Hepatitis C je kroničan i može dugo vremena dati negativan rezultat ispitivanja, polagano parazitizirati ljudsko tijelo. Virus se prenosi putem bioloških tekućina: krvi i rjeđe kroz spermu. zlouporaba droga ne-sterilne šprice, vaginalni rođenja zaraženih žena, slučajne ozljede ili posjekotine medicinsko osoblje može uzrokovati prijenos virusa sa zdravim ljudima.

    Pravodobnu dijagnozu bolesti ometaju skrivena klinička slika i nesustavna patologija. Pozitivan rezultat jednostavno se može propustiti zbog loših ispitivanja kakvoće. Samo značajna lezija jetrenih stanica uzrokuje određenu simptomatologiju, međutim, negativan učinak viremije do tog vremena ne ostavlja nikakve šanse za vraćanje organa.

    Suvremena medicina razvila je posebne metode za prepoznavanje najmanjih tragova virusa. PCR, ifa, biopsija jetre može otkriti najmanje oštećenje jetre i minimalnu razinu protutijela protiv virusa. Analiza uz pomoć PCR-a je najjednostavniji i pouzdaniji u dijagnostičkoj praksi.

    Kvalitativna analiza

    Bit reakcije polimeraze je razvoj slijeda RNA. Reakcija se izvodi kada u krvnoj plazmi postoje isti viralni proteini.

    Posebni katalizatori omogućuju sintetizaciju slične sekvence virusnog lanca, koja se uspoređuje s poznatim nukleotidima viralne RNA. Na temelju toga utvrđuju se virusna opterećenja i oštećenja jetre.

    PCR je u mogućnosti otkriti čak i jednu prisutnost željenog gena u uzimanju krvi. Ova dijagnostička lančana reakcija je također vrlo specifična. Sekvencija nukleotidnih lanaca je jedinstvena za svako biće, tako da enzimski primeri stvaraju identične sekvence željene genetske informacije. Dakle, bilo koji virus se može otkriti s najmanjom točnošću, čak i ako je njegov kvantitativni indeks izuzetno mali.

    Pacijenti u čijoj krvi su pronađeni razvijeni antitijela protiv viralnog hepatitisa provode kvalitativno istraživanje ptsr ili ifa. Rezultat analize može biti pozitivan ili negativan, što u oba slučaja zahtijeva tretman.

    Dešifriranje pozitivnog odgovora lančane reakcije slijedi kao prisutnost fragmenata RNA virusa hepatitisa ili kao fenomen infekcije.

    U krvnoj plazmi u trenutku virusa aktivno množi i parazitizira stanice jetre. PCR dijagnostika može dati negativni odgovor ako su čestice viralne RNK prisutne u plazmi malo, ispod razine osjetljivosti testa, ili ništa uopće. Nakon izravne infekcije, količina virusa raste relativno polako, a tek nakon 1-2 tjedna može se razlikovati ih ifa ili druga kvalitativna istraživanja.

    Negativna analiza može se dobiti u sljedećim slučajevima:

    1. Prilikom uzimanja materijala u nepravilnim uvjetima, dobivanje uzorka krvi s onečišćenjem;
    2. S ranijim injekcijama pacijenta heparinom.
    3. Kada su uzeti uzorci prisutni drugi enzimi i supstrati, što narušava tijek lančane reakcije.

    Kvantitativna analiza

    Kvantitativni test kao mikrobiološka dijagnoza dizajniran je za određivanje virusnog opterećenja. Potvrđena kvalitativna analiza viremije temelj je za određivanje količine genetskog materijala i njegove koncentracije. Broj detektirane virusne RNA određuje se u jedinici volumena krvi, obično u mililitru. Potrebni materijali su izraženi u međunarodnim jedinicama, neki laboratoriji u analizi ifa koriste broj kopija.

    Obično, prije bilo kojeg terapeutskog režima, provodi se kvantitativna analiza PCR-a. Virusne RNA se broje dovoljno često: nakon jednog, četiri, dvanaest i dvadeset četiri tjedna. Dvanaesti tjedan smatra se indikativnim, jer se na temelju analize u tom razdoblju provodi dekodiranje učinkovitosti medicinskih mjera.

    Kvantitativna analiza pomoću PCR ili ifa uključuje uzimanje uzoraka iz vena.

    Tumačenje rezultata kao visokog viralnog opterećenja započinje s likom od 800.000 IU / mL. Takav pozitivan rezultat za hepatitis C odražava prisutnost najmanje 3.000.000 primjeraka u jednom mililitru krvi. Niska razina viremije zaustavlja se na razini od 400,000 IU / mL. Rezultati studije mogu biti vrijednosti kao negativni odgovor, kao i "ispod mjernog raspona".

    Kvantitativni test s procjenom "ispod mjernog raspona" kaže da reakcija nije uspjela izračunati RNA. Virus cirkulira u tijelu, kao što pokazuje pozitivan kvalitativni test. Negativni pokazatelj kvantitativne analize ptsr ili ifa ukazuje na odsutnost RNA u ovom uzorku krvi.

    Unatoč ograničenim načinima prijenosa virusa kroz krv, povećava se rizik prijenosa virusa kroz tajne gonada, od majke do djeteta.

    Kvantitativna analiza pruža značajnu pomoć u procjeni terapijskih intervencija. Ifa i ptsr odražavaju učinak antivirusnih lijekova, pomažu u određivanju vremena terapije i procjenjuju formiranje imuniteta kod bolesnika. Rani negativni odgovor laboratorijskih testova ukazuje na uspješan tretman i potrebu skraćenja trajanja terapije. Sporo smanjenje viremije može se dešifrirati kao potreba za modificiranjem terapijskog tečaja. Razina virusnog opterećenja određuje prognozu bolesti. Hepatitis s niskom stopom vjerojatno će se jednostavno liječiti i potpuno ukloniti virus iz tijela. Visoke stope viralne prisutnosti u krvi zahtijevaju pažljivo liječenje i svestran tretman.

    Kvalitativna analiza za hepatitis C

    Ostavite odgovor

    Kvalitativna analiza lančane reakcije polimeraze - PCR za hepatitis C određuje prisutnost ili odsutnost HCV u tijelu. U laboratoriju se proučava struktura RNA, u kojoj će se virus locirati. Ako se otkrije virus C, potrebno je podvrgnuti tijeku liječenja, budući da zanemareno stanje jetre ima ozbiljne posljedice. Kvalitativno PCR se provodi nakon oporavka kako bi se potvrdilo odsutnost protutijela. Imenovan i za preventivni pregled. Uz nisku koncentraciju patogena u krvi, PCR (kvalitativni) ne može otkriti ništa, jer dijagnostički sustav ima prag osjetljivosti. U slučaju početne faze bolesti ili blagog oblika, PCR se u konačnici dijagnosticira s ultrazvučnom opremom.

    Što je RNA virus?

    Pojam RNA virusa hepatitisa C (ili virusa hepatitisa C virusa RNA) naziva se sam jetrena bolest. Virus C se veže na zdravu ćeliju tijela, prodirući unutra. Tijekom vremena, širenje po cijelom tijelu, to je samo doći u krv. Kao rezultat, patogen prodire u jetru, osigurava svoje stanice i naporno radi. Jetrene stanice (hepatociti) rade pod njegovim utjecajem, podvrgavaju se promjenama i od toga propadaju. Što duže virus C bude u jetri, više stanica umre. Tijekom vremena nastaju opasne bolesti koje dovode do maligne degeneracije i smrti.

    Infekcija jetre s tom vrstom virusa ne može se na bilo koji način manifestirati izvana. Dugi niz godina ili desetljeća zaražena osoba osjeća se sasvim zdravo, a samo slučajni pregled najčešće otkriva patologiju. Kada donosi krv za hepatitis, ispituje se dio lanca RNA (ribonukleinske kiseline) koji je dio ljudskog gena (DNA). Rezultati laboratorijskih istraživanja ne bi trebali biti korišteni za samo-liječenje, jer to je samo indikator. Liječnik će odrediti točnu sliku i daljnju dijagnozu.

    Kada završite: svjedočanstvo studije

    Za potvrdu HCV je dodijeljena PCR analiza (lančana reakcija polimeraze). PCR studije pomažu pronaći patogeni materijal u strukturi RNA i propisati učinkovitu terapiju. Imenovan u sljedećim slučajevima:

    • identifikacija znakova upale jetre;
    • probira za prevenciju;
    • ispitivanje osoba u kontaktu;
    • dijagnoza hepatitisa mješovitog porijekla (definicija glavnog uzročnika);
    • Određivanje razine aktivnosti reprodukcije virusa u kroničnom obliku;
    • ciroza jetre;
    • kako bi se odredila učinkovitost propisane terapije.
    PCR studije određuje liječnik kako bi se utvrdilo učinkovitost tijeka liječenja hepatitisa.

    Postoji kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a. Kvantitativno PCR pokazuje postotak RNA s nosačima virusa u krvi, a kvalitativno PCR upućuje na virusnu prisutnost ili odsutnost. Pozitivan pokazatelj kvalitete (prisutnost hepatitis C RNA) također zahtijeva kvantitativno istraživanje. Visoka razina koncentracije patogena hepatitisa C povezana je s rizikom prijenosa, tj. Kontaminacije drugih. Niska količina se bolje liječi. Količina RNA virusa u krvi nije povezana s intenzitetom bolesti. PCR analiza se također obavlja u slučaju interferonske terapije, kako bi se propisala trajanje i složenost liječenja.

    Značajke kvalitativne PCR analize za hepatitis C

    Imenuje kvalitativnu analizu s indeksom lančane reakcije polimeraze, svi pacijenti koji su imali antitijela u krvi za hepatitis C koji je bio bolestan i oporavio, treba ponovo uzeti test. Preporučljivo je da se testira na hepatitis B, a zatim, u slučaju pozitivnog zaključka, i hepatitis D. i kvalitativno analizirani reakatsiya treba provoditi u suradnji s drugim krvnim testovima. Analize će pokazati kompletnu sliku širenja virusa.

    Iz rezultata ispitivanja vidjet će se samo pozitivan test za hepatitis C ili negativan, tj. Prisutnost ili odsutnost virusa. Ako se zaključak "detektira", virus je i nastavlja djelovati aktivno. Oznaka "nije pronađena" ukazuje na odsutnost virusa ili malu količinu virusa. Uz ovaj pokazatelj treba uzeti u obzir činjenicu da je analitička osjetljivost dijagnostičkih sustava različita, a RNA hepatitis C još uvijek može biti u krvi, ali se ne očituje u analizi.

    Posebno osjetljiva metoda PCR ultra-hepatitisa C otkriva čak iu manjoj količini. Koristi se hibridizacijsko-fluorescentna studija koja je mnogo puta veća od standardnih PCR sustava. Metoda se koristi u nekoliko slučajeva:

    • sumnja na skrivene oblike hepatitisa C;
    • Pacijent nije potvrdio dijagnozu PCR, ali postoje antitijela;
    • u slučaju oporavka;
    • identificirati ranu fazu infekcije.
    Povratak na sadržaj

    Objašnjenje analize

    Konačnu odluku u dijagnozi utječe PCR dekodiranje HCV-a, posebice, s ultrametodom. Glavni nedostatak ovog istraživanja je strog pridržavanje sterilnih uvjeta za uzorak i materijale. Malo odstupanje ponekad pokazuje netočne zaključke analitičara, komplicira dijagnozu i naknadnu terapiju. Analiza PCR-a za određivanje RNA virusa hepatitisa ne pokazuje uvijek sliku bolesti s povjerenjem, a ponekad se priznaju netočnosti, oba načina.

    Dijagnosticiranje virusa hepatitisa preporuča se primjenjivanje sveobuhvatnog pregleda.

    Norma indikatora

    Odsutnost JgM antitijela na RNA u virusnom hepatitisu C smatra se normom u analizi lančane reakcije polimeraze. Istodobno, nalaz serološke analize ukazuje na prisutnost antitijela na virus C i to je također unutar granica norme. Kvalitativna definicija ne pokazuje intenzitet bolesti, samo otkriva uzročnik hepatitisa C u RNA. Takva analiza se ponavlja nakon tretmana kako bi se potvrdio stvarni oporavak.

    odstupanja

    Ako su JgM antitijela na HCV RNA prisutna, to ukazuje na razvoj infekcije. Bolest je akutna ili kronična, manifestira se u različitim fazama. Ako se bilježi smanjenje broja antitijela, analiza će pokazati postizanje rezultata liječenja tijekom oporavka. Postoje vrlo rijetki slučajevi lažnih pozitivnih nalaza u dijagnozi. Nalaze se kod žena tijekom trudnoće i kod osoba s drugim zaraznim bolestima.

    Kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C: negativna, pozitivna, dekodiranje

    Hepatitis C - virusne bolesti jetre uzrokovane HCV flavivirus, u kojoj je struktura sadrži molekulu od ribonukleinske kiseline (RNA) (od engleskog virusa hepatitisa C,). RNA nosi genetski kod virusa. Njegova prisutnost omogućuje analizu PCR-a za hepatitis C.

    HCV je opasnost za ljude i da tzv serološki prozor (vrijeme između infekcije i pojave reakcije imunološkog sustava) može biti dovoljno dugo - od nekoliko tjedana do šest mjeseci.

    To ne otkriva infekcije i započinje liječenje na vrijeme.

    Ovisno o individualnim karakteristikama tijela domaćina, HCV se može očitovati u akutnom obliku, a može se razviti i kao kronična bolest koja će zahtijevati dugotrajno i skupo liječenje. Kada se detektiraju antitijela na HCV, provode se brojni laboratorijski testovi, uključujući PCR za hepatitis C. Ovaj test se provodi za sve ljude čija je krv pronađena protutijela na HCV.

    Što je PCR analiza?

    Laboratorijska analiza PCR-a za hepatitis C - studija biološkog materijala za prepoznavanje prisutnosti flavavirusa.

    Lančana reakcija polimeraze (kao što je kratica dešifrirana) pokazuje kvantitativnu vrijednost virusne štete organizma, njegove kvalitativne karakteristike, kao i genotip RNA koji sadrži virus.

    Na temelju njih, kao i na temelju dodatnih analiza, određuje se metoda i trajanje terapije, kao i epidemiološki čimbenik (rizik od prijenosa na drugog prijevoznika).

    Što je RNA analiza za hepatitis C?

    PCR hepatitis C također se naziva RNA analiza (HCV RNA), jer nije poznat. Flavavirus sadrži RNA česticu s veličinom viriona od 30-60 nm. Jedna od karakteristika ovog mikroorganizma je velika sklonost mutacijama.

    Svaka od podvrsta (genotipova) virusa ima različitu otpornost, što uzrokuje različite metode liječenja i prirodu daljnje prognoze za pacijenta.

    Biološki materijal (venska krv) dobiva post i obično testiran u realnom vremenu PCR (visoko osjetljivim realnom vremenu dijagnostika za određivanje donju granicu 15 IU / ml pomoću automatizirani način zatvorenog sustava).

    Postoje i drugi testovi, na primjer COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU / ml. Za svaku laboratorijsku studiju, prag osjetljivosti je važan, tj. sposobnost reagenta da detektira minimalnu koncentraciju virusa u biološkom materijalu.

    Vrste analize za hepatitis C korištenjem PCR metode

    PCR za hepatitis C uključuje tri važne komponente:

    • kvalitativna analiza;
    • kvantitativna analiza;
    • genotipizacija.

    Ovi testovi mogu odrediti prirodu virusa, kao i genetske znakove patogena. Ovisno o osjetljivosti dijagnostičkog sustava, test se provodi jednom, a ponekad se provodi i drugi test s osjetljivijim reagensom kako bi se potvrdili ili pročistili rezultati.

    Visokokvalitetni hepatitis C PCR

    PCR analiza za hepatitis C je još jedno zajedničko ime za lančanu reakciju polimerazne analize. Standardna osjetljivost testa, koja omogućuje otkrivanje prisutnosti virusne lezije, je u rasponu od 10-500 IU / ml.

    Negativna analiza PCR-a za hepatitis C pokazuje da je koncentracija virusa u krvi pacijenta ispod prag osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

    Ako je kvalitativno PCR dao "neotkriven" odgovor, tada je za daljnje liječenje važno znati prag osjetljivosti reagensa.

    Proteinske frakcije s flavavirusom pojavljuju se mnogo kasnije.

    Kvantitativni hepatitis C PCR

    Kvantitativni PCR hepatitis C je pokazatelj virusnog opterećenja koji odražava razinu koncentracije flavavirus RNA u tijelu. Ovo je pokazatelj koji pokazuje koliko ulomaka virusne RNA sadrži po jednom kubičnom centimetru krvi. PCR hepatitis C RNA rezultata kvantitativna ispitivanja u konvencionalnom sustavu navedeni su u međunarodnim jedinicama po mL (IU / ml), i može se snimiti na različite načine, na primjer - 1,7 ppm ili 1,700,000 IU / ml.

    Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C je dana pacijentima prije početka antivirusne terapije, a 12. tjedna liječenja kako bi se procijenili rezultati odabrane metode borbe protiv HCV. Virusna opterećenja omogućuju prepoznavanje tri važna pokazatelja bolesti:

    • infektivnost, tj. stupanj rizika prijenosa virusa iz jednog nosača u drugu (što je veća koncentracija flavavirus RNA, to je veća vjerojatnost zaraze druge osobe, na primjer, tijekom seksualnog kontakta);
    • metoda i učinkovitost liječenja;
    • trajanje i prognozu antivirusne terapije (što je veći virusni opseg, to traje dulji tretman).

    Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C ovisi o vrsti laboratorijskog testa i pragu njegove osjetljivosti. Donja granica norme obično se smatra do 600.000 IU / ml, prosječna vrijednost je u rasponu od 600.000-700.000 IU / ml. Rezultati od 800,000 IU / mL i više smatraju se visokom razinom virusa koji sadrži RNA.

    genotipizacija

    S obzirom na visoku mutacijsku aktivnost HCV-a u prirodi, važno je odrediti u fazi ispitivanja koja genotip virusa je u pacijentovoj krvi. Ukupno je zabilježeno 11 genotipova virusa hepatitisa C na planeti, koje uključuju mnoge podvrste. Na području Ruske Federacije, uobičajene su 1,2 i 3.

    PCR RNA hepatitisa C zajedno s genotipizacijom vrlo je važna komponenta analize, jer omogućuje liječniku određivanje otpora (otpornosti) virusa, odabir prikladnih lijekova i propisivanje tijeka liječenja.

    Genotipizacija također omogućuje neizravno određivanje stanja jetre. Na primjer, 3 genotip HCV-a često prati steatosis, u kojem se nakuplja masno tkivo u stanicama tijela.

    Test krvi za PCR u hepatitisu C trebao bi dati brojku koja određuje genotip. U laboratorijskim odgovorima može se pisati "nije upisano" - a to znači da u ljudskoj krvi postoji virus koji nije određen testnim sustavom. To može ukazivati ​​da genotip nije karakterističan za određeno zemljopisno područje. U tom slučaju potrebno je ponovno analizirati analizu s većom osjetljivošću dijagnostičkog sustava.

    Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

    Test za hepatitis C PCR može se kvantificirati na temelju gore navedenih podataka. Pri primanju rezultata laboratorijskih ispitivanja obično se pišu sljedeći podaci:

    • "Pronađeno" / "nije pronađeno" (visoko kvalitetno PCR za hepatitis C);
    • količina frakcija koje sadrže RNA, na primjer 831.680 IU / ml (kvantitativno PCR test);
    • brojka koja određuje genotip HCV-a, na primjer - 1, 2, 3, 4;
    • naziv testa najčešće je u stvarnom vremenu.

    Najvažnije za dešifriranje PCR analize za hepatitis C je druga točka, koja pokazuje virusno opterećenje koje određuje prognozu, metodu i trajanje liječenja.

    Ako je PCR analiza za hepatitis C negativna i ELISA pozitivna - što to znači?

    Za dešifriranje laboratorija važan za kontakt hepatologist ili infekcijskih bolesti, koja objasniti informacije prema vrsti dijagnostičkog sustava i njegove praga osjetljivosti. U medicinskoj praksi postoje mnogi podaci o krvi koji mogu dovesti do zbunjenosti osobe bez medicinskog obrazovanja.

    Na primjer, ako je test za HCV PCR negativnog i pozitivnog ELISA, što može značiti da u tom trenutku u pacijentovoj krvi nije HCV, a prije nego što je doživio akutni oblik hepatitisa C. Smatra se da pozitivno imunosorbent testa (ELISA) pokazuje da je u krvi postoje protutijela proizvedena poslije invazije virusa u prošlosti. No, u modernoj medicinskoj praksi ELISA analiza nije dovoljno pouzdana i često daje neobične rezultate, tako da liječnici ga koristiti kao primarni screening. Kada dijagnosticira bolest, stručnjaci su vođeni precizno PCR testovima.

    Korisni videozapis

    U sljedećem videu vrlo je detaljno i zanimljivo reći što je bit PCR metode, kako se analiza radi:

    zaključak

    Venska krv je obično uzeta za analizu hepatitis C PCR. Najčešće se radi o dvostrukom uzorku biološkog materijala - za ELISA i izravno za PCR test. Za točne rezultate ispitivanja potrebno je poštivati ​​glavna pravila laboratorijskog uzorkovanja biološkog materijala:

    • krv za analizu se daje ujutro na prazan želudac;
    • između jedenja i uzimanja krvi trebalo bi trajati najmanje 8 sati;
    • Prije nego što uzmete test, također biste trebali isključiti alkohol i prženu hranu;
    • Tijekom dana prije davanja krvi, morate izbjegavati visoki fizički napor.

    Rezultati testiranja krvi obično su spremni sljedeći dan.


    Vezani Članci Hepatitis