Kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C: negativna, pozitivna, dekodiranje

Hepatitis C - virusne bolesti jetre uzrokovane HCV flavivirus, u kojoj je struktura sadrži molekulu od ribonukleinske kiseline (RNA) (od engleskog virusa hepatitisa C,). RNA nosi genetski kod virusa. Njegova prisutnost omogućuje analizu PCR-a za hepatitis C.

HCV je opasnost za ljude i da tzv serološki prozor (vrijeme između infekcije i pojave reakcije imunološkog sustava) može biti dovoljno dugo - od nekoliko tjedana do šest mjeseci.

To ne otkriva infekcije i započinje liječenje na vrijeme.

Ovisno o individualnim karakteristikama tijela domaćina, HCV se može očitovati u akutnom obliku, a može se razviti i kao kronična bolest koja će zahtijevati dugotrajno i skupo liječenje. Kada se detektiraju antitijela na HCV, provode se brojni laboratorijski testovi, uključujući PCR za hepatitis C. Ovaj test se provodi za sve ljude čija je krv pronađena protutijela na HCV.

Što je PCR analiza?

Laboratorijska analiza PCR-a za hepatitis C - studija biološkog materijala za prepoznavanje prisutnosti flavavirusa.

Lančana reakcija polimeraze (kao što je kratica dešifrirana) pokazuje kvantitativnu vrijednost virusne štete organizma, njegove kvalitativne karakteristike, kao i genotip RNA koji sadrži virus.

Na temelju njih, kao i na temelju dodatnih analiza, određuje se metoda i trajanje terapije, kao i epidemiološki čimbenik (rizik od prijenosa na drugog prijevoznika).

Što je RNA analiza za hepatitis C?

PCR hepatitis C također se naziva RNA analiza (HCV RNA), jer nije poznat. Flavavirus sadrži RNA česticu s veličinom viriona od 30-60 nm. Jedna od karakteristika ovog mikroorganizma je velika sklonost mutacijama.

Svaka od podvrsta (genotipova) virusa ima različitu otpornost, što uzrokuje različite metode liječenja i prirodu daljnje prognoze za pacijenta.

Biološki materijal (venska krv) dobiva post i obično testiran u realnom vremenu PCR (visoko osjetljivim realnom vremenu dijagnostika za određivanje donju granicu 15 IU / ml pomoću automatizirani način zatvorenog sustava).

Postoje i drugi testovi, na primjer COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU / ml. Za svaku laboratorijsku studiju, prag osjetljivosti je važan, tj. sposobnost reagenta da detektira minimalnu koncentraciju virusa u biološkom materijalu.

Vrste analize za hepatitis C korištenjem PCR metode

PCR za hepatitis C uključuje tri važne komponente:

• kvalitativna analiza;
• kvantitativna analiza;
• genotipizacija.

Ovi testovi mogu odrediti prirodu virusa, kao i genetske znakove patogena. Ovisno o osjetljivosti dijagnostičkog sustava, test se provodi jednom, a ponekad se provodi i drugi test s osjetljivijim reagensom kako bi se potvrdili ili pročistili rezultati.

Visokokvalitetni hepatitis C PCR

PCR analiza za hepatitis C je još jedno zajedničko ime za lančanu reakciju polimerazne analize. Standardna osjetljivost testa, koja omogućuje otkrivanje prisutnosti virusne lezije, je u rasponu od 10-500 IU / ml.

Negativna analiza PCR-a za hepatitis C pokazuje da je koncentracija virusa u krvi pacijenta ispod prag osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

Ako je kvalitativno PCR dao "neotkriven" odgovor, tada je za daljnje liječenje važno znati prag osjetljivosti reagensa.

Proteinske frakcije s flavavirusom pojavljuju se mnogo kasnije.

Kvantitativni hepatitis C PCR

Kvantitativni PCR hepatitis C je pokazatelj virusnog opterećenja koji odražava razinu koncentracije flavavirus RNA u tijelu. Ovo je pokazatelj koji pokazuje koliko ulomaka virusne RNA sadrži po jednom kubičnom centimetru krvi. PCR hepatitis C RNA rezultata kvantitativna ispitivanja u konvencionalnom sustavu navedeni su u međunarodnim jedinicama po mL (IU / ml), i može se snimiti na različite načine, na primjer - 1,7 ppm ili 1,700,000 IU / ml.

Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C je dana pacijentima prije početka antivirusne terapije, a 12. tjedna liječenja kako bi se procijenili rezultati odabrane metode borbe protiv HCV. Virusna opterećenja omogućuju prepoznavanje tri važna pokazatelja bolesti:

• infektivnost, tj. stupanj rizika prijenosa virusa iz jednog nosača u drugu (što je veća koncentracija flavavirus RNA, to je veća vjerojatnost zaraze druge osobe, na primjer, tijekom seksualnog kontakta);
• metoda i učinkovitost liječenja;
• trajanje i prognozu antivirusne terapije (što je veći virusni opseg, to traje dulji tretman).

Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C ovisi o vrsti laboratorijskog testa i pragu njegove osjetljivosti. Donja granica norme obično se smatra do 600.000 IU / ml, prosječna vrijednost je u rasponu od 600.000-700.000 IU / ml. Rezultati od 800,000 IU / mL i više smatraju se visokom razinom virusa koji sadrži RNA.

genotipizacija

S obzirom na visoku mutacijsku aktivnost HCV-a u prirodi, važno je odrediti u fazi ispitivanja koja genotip virusa je u pacijentovoj krvi. Ukupno je zabilježeno 11 genotipova virusa hepatitisa C na planeti, koje uključuju mnoge podvrste. Na području Ruske Federacije, uobičajene su 1,2 i 3.

PCR RNA hepatitisa C zajedno s genotipizacijom vrlo je važna komponenta analize, jer omogućuje liječniku određivanje otpora (otpornosti) virusa, odabir prikladnih lijekova i propisivanje tijeka liječenja.

Genotipizacija također omogućuje neizravno određivanje stanja jetre. Na primjer, 3 genotip HCV-a često prati steatosis, u kojem se nakuplja masno tkivo u stanicama tijela.

Test krvi za PCR u hepatitisu C trebao bi dati brojku koja određuje genotip. U laboratorijskim odgovorima može se pisati "nije upisano" - a to znači da u ljudskoj krvi postoji virus koji nije određen testnim sustavom. To može ukazivati ​​da genotip nije karakterističan za određeno zemljopisno područje. U tom slučaju potrebno je ponovno analizirati analizu s većom osjetljivošću dijagnostičkog sustava.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

Test za hepatitis C PCR može se kvantificirati na temelju gore navedenih podataka. Pri primanju rezultata laboratorijskih ispitivanja obično se pišu sljedeći podaci:

• "Pronađeno" / "nije pronađeno" (visoko kvalitetno PCR za hepatitis C);
• količina frakcija koje sadrže RNA, na primjer 831.680 IU / ml (kvantitativno PCR test);
• brojka koja određuje genotip HCV-a, na primjer - 1, 2, 3, 4;
• naziv testa najčešće je u stvarnom vremenu.

Najvažnije za dešifriranje PCR analize za hepatitis C je druga točka, koja pokazuje virusno opterećenje koje određuje prognozu, metodu i trajanje liječenja.

Ako je PCR analiza za hepatitis C negativna i ELISA pozitivna - što to znači?

Za dešifriranje laboratorija važan za kontakt hepatologist ili infekcijskih bolesti, koja objasniti informacije prema vrsti dijagnostičkog sustava i njegove praga osjetljivosti. U medicinskoj praksi postoje mnogi podaci o krvi koji mogu dovesti do zbunjenosti osobe bez medicinskog obrazovanja.

Na primjer, ako je test za HCV PCR negativnog i pozitivnog ELISA, što može značiti da u tom trenutku u pacijentovoj krvi nije HCV, a prije nego što je doživio akutni oblik hepatitisa C. Smatra se da pozitivno imunosorbent testa (ELISA) pokazuje da je u krvi postoje protutijela proizvedena poslije invazije virusa u prošlosti. No, u modernoj medicinskoj praksi ELISA analiza nije dovoljno pouzdana i često daje neobične rezultate, tako da liječnici ga koristiti kao primarni screening. Kada dijagnosticira bolest, stručnjaci su vođeni precizno PCR testovima.

Korisni videozapis

U sljedećem videu vrlo je detaljno i zanimljivo reći što je bit PCR metode, kako se analiza radi:

zaključak

Venska krv je obično uzeta za analizu hepatitis C PCR. Najčešće se radi o dvostrukom uzorku biološkog materijala - za ELISA i izravno za PCR test. Za točne rezultate ispitivanja potrebno je poštivati ​​glavna pravila laboratorijskog uzorkovanja biološkog materijala:

• krv za analizu se daje ujutro na prazan želudac;
• između jedenja i uzimanja krvi trebalo bi trajati najmanje 8 sati;
• Prije nego što uzmete test, također biste trebali isključiti alkohol i prženu hranu;
• Tijekom dana prije davanja krvi, morate izbjegavati visoki fizički napor.

Rezultati testiranja krvi obično su spremni sljedeći dan.

Dijagnoza virusa hepatitisa C

Virus hepatitisa C (HCV) je virus koji sadrži RNA iz obitelji Flaviviridae. Ova infekcija može reproducirati u krvnim stanicama (monocitima, neutrofilima, B-limfocitima i makrofagima), a također i ozlijediti stanice jetre - hepatocite. Zbog visokog stupnja mutacijske aktivnosti, ova vrsta hepatitisa može izbjeći utjecaj ljudskog imunološkog sustava.

Postoji 11 genotipova i masa podtipova takvog virusa koji se razlikuju u stupnju oštećenja jetre i utječu na vrijeme liječenja hepatitisa. Takav niz hepatitisa C zahtijeva različite metode antivirusne terapije. Na primjer, hepatitis prvog i četvrtog genotipa trebao bi biti tretiran 48 tjedana, a tijekom terapije virusima druge i treće vrste može trajati samo 24 tjedna.

Nakon brzog testa hepatitisa C dao je pozitivan rezultat, PCR analiza je provedena kako bi se identificirala RNA virusa u uzorcima krvi.

PCR dijagnostika

Lančana reakcija polimeraze (PCR) je eksperimentalna tehnika za otkrivanje virusa. Takva analiza za hepatitis C dopušta značajno povećanje koncentracije nekih fragmenata DNA ili RNA virusa u dostavljenim uzorcima. To omogućuje njihovo prepoznavanje, pa čak i brojanje brojeva.

Ovaj test za hepatitis C provodi se prema sljedećem postupku:

1. Uzorak krvi (genetskog materijala), koji može sadržavati željeni gen hepatitisa, unosi se u epruvetu. Na njeno mjesto posebne supstance - primeri, oni su segmenti kratke duljine od željenog gena, koji su kemijski sintetizirani. U ovom posudi se također dodaje DNA ili RNA polimeraza, sposobna je izgraditi lanac nukleinske kiseline, potpuno identičan originalnom. U dobivenu kompoziciju dodaju se slobodni nukleotidi koji su posebni građevinski materijal za DNA i RNA, od kojih jedan sadrži sitne čestice radioaktivnog fosfora.
2. Dobivena smjesa se prvo zagrijava na 95 stupnjeva, zbog čega se isprepliću u normalnom stanju, oba DNA helixa su oslabljena zbog tog učinka.
3. Za nastavak analize, droga se hladi, u ovom trenutku početnice su pričvršćene na željenu regiju genoma virusa hepatitisa, ne dopuštajući da se DNA oblikuje u dvostruku spiralu. Kada se smjesa hladi, polimeraza traži pojedinačne niti nukleotida. Tijekom vezivanja ovog enzima, klizi se uzduž DNK lancu (poput blokova uže), a na dvostrukom spiralu ne može "raditi", u tu svrhu smjesa se zagrijava.
4. Kako bi se produljila analiza, provodi se reheatiranje, što opet dovodi do razdvajanja nukleotidnih lanaca. Prilikom izvođenja takvih PCR ciklusa u uzorku, broj hepatitisa tražio je porast u geometrijskom omjeru, a preostali genetički materijali su proizvedeni (formirani) samo u linearnoj regularnosti.
5. Za završetak studije, otopina je pročišćena od ostataka čestica nukleotida. Odvojeni su elektroforezom, pri čemu se odvajaju molekularni lanci DNA pomoću parametara molekulske mase. Takvi testovi za hepatitis uz pomoć PCR omogućuju određivanje jesu li željeni geni virusa prisutni u testnom uzorku ili ne.

Prednost ovog testa je vrlo visok prag osjetljivosti PCR reakcije. Takva tehnika za provođenje dijagnostike idealno zahtijeva samo jedan genom virusa za cijeli uzorak.

Osim toga, takvo PCR potpuno je specifično. U svakom od gena postoji jedinstvena sekvenca nukleotida, koja se, poput otiska prsta, ne može ponoviti nigdje. Za ovu hepatitis C analizu, početnice se sintetiziraju na takav način da odgovaraju apsolutno jedinim dijelovima željenih gena koje nijedna druga sekvenca nema.

Ova tehnika također omogućava analizu i određivanje hepatitisa u c, pomažući u uspostavljanju konačne dijagnoze.

Takva laboratorijska analiza omogućuje dobivanje informacija više od prisutnosti ili odsutnosti HCV RNA ili druge vrste u uzorcima krvi. Određivanjem parametra radioaktivnog zračenja, postoji i mogućnost otkrivanja koliko je željeni genetički materijal izvorno pronađen u ispitivanom uzorku. To nam omogućuje da odredimo parametar tzv. Viralnog opterećenja - koncentraciju hepatitis RNA čestica u određenom volumenu.

Kvalitativna PCR analiza

Ova analiza omogućuje određivanje prisutnosti virusa hepatitisa u uzorcima krvi. Mora biti učinjeno za sve ljude za koje je utvrđeno da imaju protutijela na hepatitis.

Kao rezultat takve studije mogu postojati samo dvije vrijednosti:

• „Otkriveno”. Takav pozitivan testni rezultat tumačen je kako slijedi: fragmenti virusa hepatitisa RNA su pronađeni u analiziranom uzorku iz biološkog materijala. Iz toga proizlazi da je došlo do činjenice infekcije pacijenta s tim virusom. To može ukazivati ​​na to da uzročnik hepatitisa umnožava u tijelu i inficira nove stanice, uništavajući jetru.
• "Nije otkriven". Ovaj rezultat pokazuje da je u uzorku koji se analizira u laboratoriju, pronađeni su ulomci RNA, koja je specifična za virus hepatitisa C Postoji i mogućnost da je koncentracija RNA virus-patogena u uzorku bio je toliko mali da test nije bio u stanju prepoznati, U takvim slučajevima, rečeno je da je razina koncentracije ispod prag osjetljivosti testa.

Takav test može biti lažno pozitivni ili lažno negativnih zbog kontaminacije biološkog materijala ili prisutnosti određenih tvari u uzorcima, koji reagira s kemijskim komponentama potrebnim za analizu.

Treba naglasiti da u akutnim fazama hepatitisa C kvalitativna studija primjenom PCR metode može otkriti svoju RNK nakon samo 1-2 tjedna od trenutka infekcije tijela. To znači da se bolest može identificirati dugo prije pojave vanjskih simptoma ili pojave protutijela na hepatitis u tijelu.

Uzorak krvi (iz vena) se poželjno izvodi na prazan želudac.

Kvantitativna analiza PCR-a

Pomoću ove analize, odredite razinu koncentracije virusa hepatitisa u bolesnika (virusni opterećenje). Takav se test mora podnijeti kako bi se procijenila količina RNA virusa u jedinici određenog volumena.

Analiza testova za hepatitis c, provedena pomoću ove tehnike, može imati sljedeće rezultate:

• Kvantitativni pokazatelj (u slikama)

Koncentracija virusa (broj) dana je numerički. Da biste to učinili, koriste se različite jedinice: ME / ml (međunarodna jedinica po mililitru) ili kopije / ml (broj kopija RNA virusa u mililitrima). U prosjeku, 1 IU / mL odgovara 4 kopije / ml, s obzirom da različiti testni sustavi imaju različite pretvorbene čimbenike za takve jedinice.

Smatra se da je nisko virusno opterećenje manje od 400,000 IU / ml za ovaj test, a visoka je 8000000 IU / ml.

Ova kvantitativna procjena omogućuje određivanje razine infektivnosti bolesti ("infektivnost") pacijenta. Što je ovaj pokazatelj analize, to je veći rizik prijenosa patogena na druge ljude (s seksualnim kontaktom ili okomitom rutom).

Ova presuda znači da kvantitativna metoda nije mogla otkriti hepatitis RNA, ali sam virus je prisutan u tijelu, samo u vrlo niskoj koncentraciji. To je potvrđeno provođenjem dodatne kvalitativne analize PCR-a, a njegov pozitivan rezultat ukazuje na prisutnost hepatitisa.

Kvantitativna PCR analiza provedena u različitim fazama antivirusnu terapiju (1., 4., 12. i 24. tjedna) daje naznaku djelotvornosti liječenja i napraviti potrebne korekcije.

Specifičnost analize

Ovaj test se mora podnijeti kako bi se odredili različiti genotipovi hepatitisa C. Trenutno su poznati 11 genotipova tog patogena i mnoge podvrste. Genotipovi hepatitisa C prvih, 2. i 3. vrsta su česti u našoj zemlji. U laboratorijima može otkriti razne podtipova tih vrsta: 1a, 1b, 2a, 2b, 3, 4 ili 5, 6, genotipa s različitim modifikacijama podtipova. Za sve ove hepatitis specifičnost detekcije je 100%.

Pojašnjenje modifikacije genotipa omogućuje odabir prikladnog tretmana. Prisutnost određene vrste genotipa u pacijentu ne ukazuje na to da je bolest jednostavnija ili teža, samo su vrste virusa hepatitisa, a ne više.

U slučajevima kada laboratorij ne može izolirati genotip virusa, može se izdati rezultat: "Nije upisano. Genotipovi su proučavani: takvi i takvi (na primjer 1a, 2b, 3av). Ovaj prijepis ukazuje da u ovom laboratoriju nije bilo odgovarajućih reagensa koji bi mogli odrediti genotip hepatitis virusa. U istraživanju je provedena provjera virusa navedenih na popisu, ali njihova korespondencija s uzorcima RNA nije otkrivena.

Da bi se završila dijagnoza, samo jedna vrsta analize nije dovoljna. Svaki od testova može dati lažno pozitivan rezultat. Složena studija se provodi kako bi se odredila točna vrsta hepatitisa i stupanj infekcije s tom infekcijom tijela. U isto vrijeme, napravljena je biopsija jetre i testiranje njegovih enzima: ALAT, ASAT, kao i alkalna fosfataza i LDH. Također se može provesti bilirubin test i protrombinski indeks analize.

Samo kompleks takvih testova i laboratorijskih testova, s općom analizom stanja bolesnika, pomoći će utvrditi prisutnost hepatitisa u tijelu, njegovom obliku i stupnju ozbiljnosti. Na temelju njih liječnik može utvrditi daljnje liječenje i napraviti prognozu za pacijenta.

HCV, RNA kvantitativno [real-time PCR]

Studija identificirati uzročnika hepatitisa C (HCV), u kojem je metodom realnom vremenu lančanom reakcijom polimeraze (RT-PCR) se određuje prisustvo genetskog materijala (RNA), virus i njegov volumen (virusna učitavanja) u uzorku krvi.

HCV RNA se može detektirati pri koncentraciji ispod donje granice linearnog raspona koncentracija. Linearni koncentracijski raspon je raspon u kojem se broj kopija patogena može točno izračunati. Za ovu analizu, linearni raspon koncentracija HCV DNA određen pomoću detekcijskog pojačala iznosi 7,5 × 10 2 - 1,0 x 10 8 kopija / ml uzorka.

Ruski sinonimi

Hepatitis C virus (HCV), kvantitativno određivanje RNA.

sinonimi engleski

Hepatitis C Virus RNA Kvantitativna, Real-Time PCR, Blood, HCV virusa u krvi, hepatitis C virus RNA Quant.

Metoda istraživanja

Lančana reakcija polimeraze s reverznom transkripcijom u stvarnom vremenu.

Koja biomaterija se može koristiti za istraživanje?

Kako se pravilno pripremiti za studij?

Ne pušite 30 minuta prije nego donirate krv.

Opće informacije o studiji

Virus hepatitisa C (HCV) je virus koji sadrži RNA iz obitelji Flaviviridae koji utječe na jetru. To može umnožiti u krvnim stanicama (neutrofili, monociti i makrofagi, B limfociti) i inducira krioglobulinemija, Sjogren-ove bolesti, i B stanice limfoproliferativnu bolest. HCV zbog visoke mutacijske aktivnosti može izbjeći učinke zaštitnih mehanizama imunološkog sustava. Postoje 6 genotipova i mnogi podtipovi virusa koji imaju različite vrijednosti za prognozu razvoja bolesti i učinkovitosti antivirusne terapije.

Glavni način prijenosa infekcije je kroz krv (preparati za transfuziju krvnih i plazma elemenata, donorske organe, ne sterilne šprice, igle, alate za tetoviranje, piercing). Vjerojatno infekcija tijekom spolnog odnosa i dijete od majke tijekom porođaja, ali to se rijetko događa.

Akutni virusni hepatitis, u pravilu, karakterizira asimptomatski tečaj i ostaje nedijagnosticiran u većini slučajeva. Samo 15% zaraženih ima akutnu bolest - s mučninom, bolovima u tijelu, nedostatkom apetita i gubitkom težine (rijetko praćen žuticom). Kod 60-85% zaraženih razvija se kronična infekcija koja je 15 puta veća od učestalosti kroničnog hepatitisa B. Kronični virusni hepatitis C javlja se s povećanim hepatičnim enzimima i slabijom manifestacijom simptoma. U 20-30% pacijenata, bolest dovodi do ciroze jetre, povećavajući rizik od zatajenja jetre i hepatocelularnog karcinoma.

Otkrivanje HCV RNA označava reprodukciju virusa u tijelu, te je postupak za dijagnosticiranje bolesti. Genetski materijal virusa se mogu detektirati PCR u 10-12 dana nakon infekcije - u tom periodu, specifična antitijela koji se proizvode u nekoliko mjeseci nakon infekcije, i bez funkcija jetre su unutar referentnih vrijednosti.

Pomoću PCR, virusna RNA se detektira kvalitativno ili kvantitativno. Zbog kvalitativne metode potvrđena je prisutnost virusa hepatitisa C i njegovu aktivnu reprodukciju. Kvantitativno određivanje virusnog opterećenja uzimajući u obzir genotip HCV omogućuje kontrolu tekuće terapije i predviđa tijek bolesti.

Učinkovitost liječenja procjenjuje se količinom RNA prije i tijekom terapije. Tipično, virusni opterećenje krvi smanjuje se nekoliko puta u prva tri mjeseca uspješnog liječenja. Kada učinkovita terapija viremija se smanjuje za dva reda veličine tijekom prvih 4-12 tjedana liječenja i nakon završetka virusa terapija genetskog materijala nije pronađen u krvi. Odsutnost smanjenja viremije nakon 12 tjedana od početka liječenja ukazuje na njegovu neučinkovitost. Preporuča se izvršiti analizu prije početka terapije, 4., 12. i 24. tjedna liječenja i 24 tjedna nakon završetka tečaja. Trajanje terapije i učestalost kvantitativnog određivanja virusa hepatitisa C RNA ovise o genotipu virusa i stupnju oštećenja jetre.

Za što se koristi istraživanje?

• Potvrditi dijagnozu "virusnog hepatitisa C".
• Predvidjeti tijek virusnog hepatitisa C.
• Za praćenje antivirusne terapije i rješavanje pitanja taktike daljnjeg liječenja.

Kada se studija dodjeljuje?

• Kvalitativnom detekcijom RNA virusa hepatitisa C.
• U akutnom i kroničnom virusnom hepatitisu C.
• S mješovitim hepatitisom.
• Pri planiranju, tijekom i nakon završetka antivirusne terapije.

Što znače rezultati?

• Nije pronađena - hepatitis C virus RNA nije otkrivena ili je vrijednost ispod granice osjetljivosti metode (200 kopija / ml = 400 IU / ml).
• kopija / ml (IU / ml) - otkriveno je hepatitis C virus RNA. Niska viremija (najpovoljnija prognoza tijeka bolesti i učinkovitost terapije).
• > 2 x 10 ^ 6 kopija / ml (> 4 x 10 ^ 6 IU / ml) - otkrivena je RNA virusa hepatitisa C. Visoka viremija.
• > 1,0 x 10 x 8 kopija / ml (> 2 x 10 ^ 8 IU / ml) - RNA virus hepatitisa C detektirana je u koncentracijama iznad linearne koncentracije.

Linearni raspon koncentracije HCV RNA određene C otkrivanje termocikleru, 7,5 × 10 2 - 1,0 x 10 8 kopija / ml (1.5 x 10 3 - 2 x 10 8 IU / ml).

Što može utjecati na rezultat?

Nepouzdani rezultat može se postići s:

• kontaminacija biomaterijala;
• prisutnost u uzorku inhibitora - kemijskih i bjelančevinskih tvari koje utječu na različite komponente PCR-a;
• prisutnost u krvi heparina.

Važne napomene

• Razina virusnog opterećenja krvi ne pokazuje stupanj oštećenja jetre i težinu bolesti. Za njihovu evaluaciju potrebno je istražiti biokemijske pokazatelje i biopsiju.
• Pri planiranju liječenja vrlo je važno utvrditi genotip virusa hepatitisa C.

Također se preporučuje

Tko određuje studiju?

književnost

• Vozianova Zh.I. Infektivne i parazitske bolesti: u 3 t - K.: Health, 2000. - T.1: 600-690.
• Kishkun AA Imunološke i serološke studije u kliničkoj praksi. - M.: MIA LLC, 2006. - 471-476 str.
• Harrisonova načela unutarnje medicine. 16. izd. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

• Lerat H, Rumin S, Habersetzer F i drugi. In vivo tropizam genomskih sekvenci virusa hepatitisa C u hematopoetskim stanicama: utjecaj virusnog opterećenja, virusnog genotipa i staničnog fenotipa. Krv. 1998. 15. svibnja, 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
• Revie D, Salahuddin SZ. Ljudske stanice važne za replikaciju virusa hepatitisa C in vivo i in vitro: stare tvrdnje i trenutni dokazi. Virol J. 2011 11. srpnja; 8: 346. doi: 10,1186 / 1743-422X-8-346. PMID: 21745397.

PCR-studija za hepatitis C: tipovi, indikacije, transkripta

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja se javlja kod oštećenja jetre. U osamdeset posto pacijenata prolazi u kronični oblik. Virus se umnožava u jetrenim stanicama - hepatocitima - i uzrokuje njihovu smrt. Mrtvo tkivo je zamijenjeno žarištima vezivnog tkiva, razvija se fibroza.

S razvojem fibroze jetre ne može obavljati svoju funkciju, počinje cirozu, koja je opasna za njene komplikacije: sve veći pritisak u portalnu venu, gastrointestinalnog krvarenja, oslabljen zgrušavanje krvi, mentalne promjene uslijed oštećenja jezgre mozga otrovne proizvode.

Uzrok bolesti je infekcija virusom iz obitelji Flaviviridae, koja je vrsta RNA virusa. To znači da se genetički materijal kojim se sintetiziraju proteini patogena kodira u molekuli ribonukleinske kiseline. Infekcija se javlja kroz krv, seksualno, i od trudnice do fetusa. Nažalost, između infekcije i početka proizvodnje antitijela može proći prilično veliku količinu vremena - od dva tjedna do šest mjeseci. To ne dopušta odrediti infekciju pomoću metode enzimskog imunološkog pregleda i započeti liječenje u ranoj fazi.

Što je PCR analiza?

PCR je metoda molekularne analize koja omogućuje otkrivanje genetskog materijala patogena već u prvom tjednu nakon infekcije koristeći lančanu reakciju polimeraze. Studija ima visoku specifičnost, točnost i omogućuje ne samo određivanje prisutnosti ili odsutnosti virusa, već i njegovu koncentraciju i genotip.

Za studiju, uzmite krv pacijenta u kojoj se RNA virusa može naći. U krvi se dodaju primeri - umjetno sintetizirani dijelovi željenog gena male duljine, a RNA polimeraza je poseban enzim koji množi količinu genetskog materijala patogena. Uz pomoć posebnog aparata provode se nekoliko ciklusa grijanja i hlađenja. Materijal se zatim analizira i uspoređuje s poznatim virusnim genima, na temelju kojih se donosi zaključak o prisutnosti ili odsutnosti infekcije.

Vrste PCR analize za hepatitis C

Postoje tri vrste PCR analize:

1. Kvalitativna PCR analiza. Prva faza studije. Omogućuje identificiranje genetskog materijala virusa u krvi.

Indikacije za PCR analizu za hepatitis C

PCR-studija propisana je u sljedećim slučajevima:

• kontakt s bolesnom osobom, što može dovesti do infekcije;
• pozitivno enzimski vezani imunotest;
• znakovi ciroze jetre: promjene veličine jetre, povećana slezena, pojava potkožnog venskog pleksusa na abdomenu;
• pojava simptoma oštećenja jetre: bol u desnom dijelu trbuha, žućkanje kože;
• povećana aktivnost ALT i AST u biokemijskoj analizi krvi;
• prije početka tretmana kako bi se utvrdilo količinu virusa;
• za praćenje učinkovitosti antivirusne terapije;
• nakon završetka liječenja za praćenje recidiva;
• u prisutnosti dijagnoze hepatitisa B, da se isključi mješovita oštećenja jetre.

Dekodiranje PCR studije za hepatitis C

Dekodiranje PCR analize i enzimskog imunološkog testa za hepatitis C treba obratiti stručnjak za hepatologu ili zaraznu bolest. Analizirati rezultate PCR je potrebno u kombinaciji s biokemijskim krvnim testom, biopsijom i ultrazvukom. Samo kvalificirani liječnik će moći analizirati rezultate studija i na temelju njih propisati pravu terapiju.

Dekodiranje kvalitativne analize.

Genetski materijal patogena pronađen je u analiziranom biološkom materijalu. Potvrđena je infekcija.

Nema infekcije, ili je količina RNA patogena ispod granice osjetljivosti.

Dekodiranje kvantitativne analize.

Normalan lik za zdrave ljude. To znači da ne postoji hepatitis C RNA u ispitnom materijalu, ili je njegova koncentracija ispod prag osjetljivosti studije.

Koncentracija RNA je ispod raspona kvantitativnosti. Takvi se rezultati tumače vrlo oprezno, povezuju ih s podacima drugih studija, često provode drugu studiju.

Razina viralnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se niska. Obično smanjenje količine virusa znači da je terapija uspješna.

Više od 8 x 10 ^ 5 IU / ml

Razina virusnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se visokom.

Više od 2,4 x 10 ^ 7 IU / ml

Količina RNA je iznad gornje granice raspona kvantifikacije. Zaključivanje o stupnju virusnog opterećenja s ovim rezultatom nije moguće. Obično u takvim slučajevima, test se ponavlja s razrjeđivanjem uzorka krvi.

Dekodiranje genotipizacije.

Otkriveno je RNA specifičnog genotipa

U biomateričnom virusu hepatitisa C detektira se specifični genotip i podtip. Rezultat je kodiran rimskim brojevima i latinskim slovima, na primjer - la, 2b. Postoji sedam genotipova i šezdeset sedam podtipova, ali u Rusiji postoje samo tri prve vrste.

Otkriveno je RNA virus hepatitisa C

U krvi, RNA se nalazi rijedak genotip za Rusiju, koji se ne može pripisati prvom, drugom ili trećem tipu. Potrebno je više istraživanja.

Ovaj rezultat pokazuje da je pacijent zdrav, ili da je razina RNA patogena premalena.

Situacija je moguća kada je PCR analiza za hepatitis C negativna, a enzimski imunosni test detektira protutijela protiv virusa. To znači da je pacijent imao akutni oblik hepatitisa C i izliječio se. Približno dvadesetak slučajeva infekcije rezultira spontanom liječenjem ako tijelo pacijenta ima dovoljno otpornosti na infekciju.

Unatoč činjenici da je PCR vrlo precizna analiza, njegovi rezultati mogu biti iskrivljeni u sljedećim situacijama:

• krv je prevezena u laboratorij pod neadekvatnim uvjetima, temperaturni režim je povrijeđen;
• uzorak biomaterijala je kontaminiran;
• u krvi su ostali tragovi heparina i drugih antikoagulanata;
• U ispitivanoj tvari bili su inhibitori - tvari koje usporavaju ili zaustavljaju lančanu reakciju polimeraze.

Prednosti PCR-a u odnosu na druge metode

1. Dijagnoza u ranim fazama. PCR detektira genetički materijal uzročnika bolesti. Pomoću imunofluorescentne analize moguće je odrediti samo imunoglobuline - tvari koje tijelo proizvodi kao odgovor na infekciju. U slučaju infekcije hepatitisom C, interval između infekcije i nastupa imunološkog odgovora može biti nekoliko tjedana i mjeseci, a tada ELISA neće biti učinkovit. PCR će dati odgovor već u prvom tjednu nakon infekcije.

Kako se pripremiti za isporuku krvi za PCR istraživanje

Za PCR analizu, venska krv je prikupljena za hepatitis C. Obično se dva dijela krvi odvede iz pacijentove vene istodobno: prvi se šalje za PCR, a drugi za ELISA. To je učinjeno kako bi se preciznije procijenilo koliko je pacijent zaražen virusom i kako imunitet bori protiv njega.

Obično su potrebna sljedeća pravila pacijenta:

• Ispitivanje krvi uzima se ujutro;
• prekid između posljednjeg obroka i isporuke krvi trebao bi biti osam do deset sati;
• dva ili tri dana prije analize morate odustati od pržene i masne hrane i alkohola;
• za dvadesetčetiri sata prije analize, pacijent treba izbjegavati tjelesno naprezanje: nemojte nositi težine, ne dolazite u teretanu ili bazen.

Što je hepatitis C virusna RNA?

Istraživanje RNA virusa hepatitisa C je najvažniji postupak, koji omogućuje postavljanje trajanja i metode liječenja pacijenata s velikom točnošću. Dijagnoza bolesti se sastoji od nekoliko različitih krvnih testova, kao što su:

• markeri hepatitisa C (anti-HCV);
• otkrivanje hepatitisa C virusa RNA (HCV RNA).

Prva studija je učinjena s prvom sumnjom na hepatitis. Druga mogućnost je najznačajnija u liječenju HCV RNA, pa je detaljnije razmotrite.

Što je virusni hepatitis C?

Virusni hepatitis C ili HCV je zarazna bolest koja utječe na jetru. Infekcija virusom javlja se kroz krv. Možete dobiti zaraženo provođenjem transfuzije krvi, kada pravila o sterilizaciji medicinskih instrumenata ne poštuju. Postoji manje slučajeva kada se bolest dobiva seksualno ili od trudne majke do fetusa. Hepatitis C je od 2 vrste.

Kronični hepatitis C je najopasniji. To je oblik bolesti koja može trajati cijeli život. To dovodi do ozbiljnih problema u funkcioniranju jetre, poput ciroze ili raka. U 70-90% zaraženih osoba bolest prolazi u kroničnu fazu.

Najvažnija opasnost od hepatitisa C jest taj da nastaje potajno bez ikterijskih znakova. U tom slučaju najčešće se žale na groznicu, mučninu i povraćanje, fizičku slabost, povećanu umor, gubitak apetita i težinu. U tom slučaju, protiv malih zbijenosti tkiva jetre, često se odvija maligna degeneracija. Zbog toga se virusni hepatitis C često naziva "vremenska bomba" ili "ljubavni ubojica".

Druga osobitost bolesti leži u njegovu vrlo usporenom razvoju, procijenjenom u desecima godina.

U pravilu, zaraženi ne osjećaju nikakve simptome i ne sumnjaju u njihovo stvarno stanje. Često, bolest se može identificirati samo kada se odnosi na liječnika na drugom pitanju.

Rizična skupina uključuje:

• djeca koja su primila virus hepatitisa C od majki;
• ovisnici o drogama;
• ljudi koji su probušili dijelove tijela ili napravili tetovaže ne sterilnim alatima;
• primljena krvna doza ili organi (do 1992, kada nije izvršena hemodijaliza);
• osobe zaražene HIV-om;
• Medicinski radnici u kontaktu s zaraženim pacijentima.

Određivanje hepatitis C RNA

Definicija HCV RNA, također poznatog kao hepatitis C PCR, je proučavanje biološkog materijala (krvi) kojim se može odrediti prisutnost vrlo genoma hepatitisa u tijelu (svaki pojedini virus je jedan komad RNA).

Glavna metoda ispitivanja je PCR ili metoda lančane reakcije polimeraze.

Postoje dvije vrste krvnih testova za određivanje HCV RNA:

Ispitivanje kvalitete

Provodeći kvalitativnu analizu moguće je utvrditi je li virus u krvi. Svi bolesnici koji imaju C-hepatitis antitijela trebaju proći ovaj test. Prema svojim rezultatima možete dobiti 2 odgovora: "prisutno" ili "nedostaje" virus. Na pozitivan rezultat ispitivanja (pronađen), moguće je procijeniti aktivnu umnožavanje virusa koji inficira zdrave stanice u jetri.

Ispitivanje, provedeno za visoko kvalitetno PCR, prilagođeno je specifičnoj osjetljivosti, od 10 do 500 IU / ml. Ako je virus hepatitisa pronađen u krvi s specifičnim sadržajem manjim od 10 IU / ml, tada otkrivanje virusa može postati nemoguće. Vrlo niska vrijednost specifičnog sadržaja virusa se opaža kod pacijenata kojima je propisana antivirusna terapija. Stoga je važno da je osjetljivost medicinskog sustava visoka za dijagnosticiranje i postavljanje kvalitativnog rezultata u lančanu reakciju polimeraze.

Često, lančana reakcija polimeraze C-hepatitisa provodi se odmah nakon pronalaženja odgovarajućih protutijela. Naknadni testovi, kada prolazi antivirusna terapija, provode se na 4., 12. i 24. tjednu. A druga analiza nakon prestanka PVT-a obavlja se nakon 24 tjedna. Tada - jednom godišnje.

Kvantitativni test

Kvantitativna analiza PCR RNA, ponekad nazvana virusnim opterećenjem, određuje koncentraciju (specifični sadržaj) virusa u krvi. Drugim riječima, virusno opterećenje definira se kao određena količina virusne RNA, koja može biti u određenoj količini krvi (uobičajeno je koristiti 1 ml, jednako 1 cm u kocki). Jedinice za rezultate ispitivanja su međunarodne (standardne) jedinice, podijeljene za jedan mililitar (IU / mL). Sadržaj virusa ponekad se pojavljuje drugačije, ovisno o laboratorijima na kojima se istraživanje provodi. Za hepatitis C, kvantifikacija ponekad koristi vrijednosti kao što su kopije / ml.

Treba shvatiti da nema posebnih ovisnosti u ozbiljnosti hepatitis C-koncentracije naprezanja u krvi.

Provjera "virusnog opterećenja" omogućuje određivanje stupnja infektivnosti bolesti. Tako se rizik od ugovaranja virusa druge osobe povećava s povećanjem koncentracije hepatitisa u krvi. Osim toga, visok sadržaj virusa smanjuje učinak liječenja. Stoga je mali virusni opseg vrlo povoljan čimbenik uspješnog liječenja.

Osim toga, test za hepatitis C, a njegova je definicija pomoću PCR igraju važnu ulogu u primjeni terapiji bolesti i određivanje uspjeha liječenja. Na temelju rezultata ispitivanja planira se rehabilitacijski tečaj. Na primjer, ako također trom smanjenja određenih koncentracija virusa hepatitisa antivirusne terapije je produžen, i obrnuto.

U modernoj medicini se vjeruje da je opterećenje veće od 800000 ME / ml. Opterećenje je više od 10000000 ME / ml smatra kritičnim. Ali stručnjaci iz različitih zemalja i do danas nisu imali isto mišljenje o granicama virusnog opterećenja.

Frekvencija kvantitativnog testa

Općenito, kvantitativna analiza za hepatitis se obavlja prije antivirusne terapije i 3 mjeseca nakon završetka postupaka liječenja kako bi se odredila kvaliteta terapije.

Kao rezultat kvantitativnog testa smatra se kvantitativna procjena rezultata gore navedenog uzorka. Kao rezultat toga, donijet će se presuda "ispod mjerenog raspona" ili "u krvi neće biti otkrivena".

Parametar osjetljivosti kvalitativnog testa obično je manji od osjetljivosti kvantitativne analize. "Nestalo" transkript pokazuje da obje vrste analiza nisu pronađene RNA virusa. S testom "ispod mjerenog raspona", kvantitativna analiza vjerojatno nije pronašla hepatitis RNA, iako to potvrđuje prisutnost virusa s vrlo malim specifičnim sadržajem.

Hepatitis C i njegovi genotipi

Genotipizacija hepatitis C virus RNA dijagnosticirati prisutnost različitih genetskih tipova hepatitisa C Znanost zna više od 10 vrsta genoma virusa, ali za medicinske prakse dovoljno razlikovati nekoliko genotipova imaju najveći udio u regiji. Određivanje genetskog tipa igra ključnu ulogu u odabiru vremena liječenja, što je vrlo potrebno ako se uzme u obzir širok raspon nuspojava hepatitisa.

Metode liječenja virusnog hepatitisa C

Jedini učinkovit način liječenja virusa hepatitisa, u pravilu, je kombinacija 2 lijekova: interferon-alfa zajedno s ribavirinom. Osim toga, ti lijekovi nisu tako učinkoviti. Preporučena doza lijekova i vrijeme primjene treba propisati samo liječnik i pojedinačno svakom pacijentu. Liječenje ovim lijekovima može trajati 6 do 12 mjeseci.

Danas se ne izmišljaju lijekovi koji jamče 100% oporavak od virusa. Međutim, s pravilno odabranim tretmanom, liječenje bolesnika može doseći do 90% broja slučajeva.

Kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C

Hepatitis je ozbiljna bolest koja ima mnogo uzroka za napad. U srcu svog razvoja izravno ili neizravno oštećenje jetre. S obzirom na njegovu važnost za cijeli organizam, možemo samo pogoditi koliko je loša patologija. U ovom članku ćemo detaljnije raspravljati o obilježjima tečaja i laboratorijskoj dijagnozi hepatitisa C.

Uzrok bolesti je virusni agens koji se odnosi na patogene koji sadrže RNA. Ima prepoznatljivu osobinu - sposobnost mutacije, tj. Promjene strukture. Zbog ove infekcije bježi od napada imunološkog sustava i u većini slučajeva dovodi do kronične upale jetre.

S obzirom na postojanje različitih podtipova virusa, odabir lijekova treba provesti uzimajući u obzir rezultate genotipizacije. Unatoč dugoj studiji bolesti i osobitosti strukture HCV, nije bilo moguće razviti specifično cjepivo protiv bolesti.

Teškoće rane dijagnoze nalaze se u asimptomatskom tijeku hepatitisa, što rezultira osobom koja se okreće liječniku u fazi ciroze. Kako bi se bolest otkrila na vrijeme, potrebni su redoviti fizički pregled. Samo laboratorijskim testiranjem krvi može identificirati HCV i spriječiti infekciju drugih. Činjenica da nositelj infekcije dugo može ne znati o patologiji i nastaviti prenositi virus zdravih ljudi.

Putevi prijenosa

Virus se u većini slučajeva širi kroz krv jer sadrži najveću koncentraciju patogenih uzročnika. Tako se prenosi infekcija:

• s hemodijalizom;
• kada se trlja iglom;
• tijekom borbe, kada je koža ozlijeđena, a pojavljuje se hemocontact;
• s transfuzija krvi (transfuzija krvi).

Vjerojatnost infekcije s intimnom intimnošću je beznačajna, jer sjeme i vaginalni iscjedak sadrže mali broj patogena. Rizik infekcije se značajno povećava ako je ugrožena cjelovitost genitalne sluznice. To se promatra s agresivnim i analnim seksom.

Što se tiče vertikalnog načina prijenosa infekcije, ona se provodi tijekom rada. U razdoblju trudnoće, patogen ne može prodrijeti u posteljicu do embrija. Kod prirodnih vrsta, patogeno sredstvo prenosi se na dijete u traumi kože kad se opaža kontakt s krvlju majke.

Nakon prodora patogena u zdrav organizam započinje sinteza protutijela koja su zaštita od infekcije i pripadaju imunološkim strukturama. Pronađeni su tijekom početne studije osobe uz pomoć ELISA.

Da bi se potvrdila dijagnoza, pacijent prolazi kroz lančanu reakciju polimeraze. Analiza je identificirati genetskog materijala patogenog agensa i odrediti virusni opterećenje.

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C

Laboratorijska dijagnostika započinje enzimskim imunoanalizom. Njegov glavni zadatak je otkrivanje protutijela proizvedenih protiv patogena. Njegova je učinkovitost gotovo 95%. Zahvaljujući ovom istraživanju na pretkliničkoj fazi moguće je identificirati nosač virusa i poslati ga za daljnje ispitivanje.

Kvalitativna analiza ELISA ukazuje na prisutnost ili odsutnost imunoglobulina u pacijentovoj krvi. Njegov rezultat može biti "pozitivan" ili "negativan". Nakon što je primila prvu varijantu odgovora, osoba odlazi na sljedeći ispit - PCR. Njena cijena ovisi o kvaliteti reagensa i laboratorija. Trošak lančane reakcije polimeraze može doseći 4,000 rubalja.

Značajke PCR-a

Lančana reakcija polimeraze, čak i mala količina biološkog materijala omogućava procjenu količine virusa u krvi, odnosno za izračunavanje koncentracije patogena u mililitru tekućine.

S pojavom PCR, dijagnoza hepatitisa bila je mnogo jednostavnija. Analiza omogućuje identificiranje HCV RNA, uspostavljanje stadija infektivnog procesa i infektivnost nosača virusa.

Postoji nekoliko vrsta genetske dijagnoze:

1. kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C - potvrđuje prisutnost ili odsutnost HCV-a u krvi ispitanika:
2. kvantitativno, zbog koje je moguće izračunati koncentraciju virusa i uspostaviti stupanj bolesti. Rezultat se daje u IU / ml ili kopijama / ml (ovisno o laboratoriju);
3. genotipizacija je neophodna za određivanje genotipa HCV. To je potrebno za točan izbor lijekova koji će biti najučinkovitiji u ovom slučaju. Analiza posredno ukazuje na ozbiljnost patološkog procesa u jetri. Dakle, s trećim genotipom patogena najčešće se opaža steatosis, čiji razvoj je akumulacija masti u hepatocitima (njenim stanicama). Osim toga, vrsta virusa utječe na rezultat i trajanje terapijskog tečaja.

Kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis C

Prvi korak u laboratoriju je proučavanje biološkog materijala za prisutnost HCV RNA. Važno je zapamtiti da kvalitativna analiza za hepatitis C ima određenu razinu osjetljivosti i stoga ne može uvijek dati pravi odgovor. U tom slučaju, preporuča se ponoviti laboratorijsku dijagnozu pomoću drugih reagensa.

Da bi se postigli pouzdani rezultati, treba koristiti sustav ispitivanja s osjetljivošću najmanje 50 IU / ml.

Rezultat dijagnoze može biti "pozitivan" ili "negativan". Ako patogeni nisu pronađeni u krvi, studija završava. Kada se u uzorku detektira patogeno sredstvo, zatim se provodi kvantitativni broj virusnog opterećenja.

Lazni negativni odgovor dobiva se kada je tehnološki proces poremećen, na primjer, aktivne komponente koje ugnjetavaju gradnju kopija patogena u okoliš. Dakle, nije moguće prikazati pravu sliku krvi, zbog čega se ljudska infekcija ne dijagnosticira.

Lažni pozitivni rezultat može se dobiti ako je cjevčica za prikupljanje biološkog materijala, kao i okoliš za ispitivanje, kontaminirana. Osim toga, takav odgovor analize moguć je kod mješovite infekcije, kada je jetra pod utjecajem nekoliko virusa, na primjer, hepatitisa C i D.

Indikacije za kvalitativno istraživanje

Liječnik može odrediti kvalitativnu studiju pacijentu za otkrivanje virusa hepatitisa C:

• pri primanju pozitivnog ili upitnog odgovora na enzimski imunoanalizu;
• za provjeru dijagnoze;
• određivanje količine virusa;
• postavljanje stadija bolesti;
• dijagnoza mješovite infekcije. Često, hepatitis C utječe na jetru istodobno s virusom "D";
• određivanje terapeutske taktike uzimajući u obzir genotip patogena;
• procjena dinamike promjena u pozadini liječenja antivirusnim lijekovima.

Prednosti lančane reakcije polimeraze uključuju:

1. visoka osjetljivost tehnike koja omogućava utvrđivanje činjenice infekcije na preklinickoj pozornici;
2. identifikacija genetskog materijala patogena, a ne protutijela na njega;
3. mogućnost uspostavljanja podtipa patogenog agensa;
4. velika brzina dijagnostike, budući da nije potrebno sijati materijal na hranjivi medij, ali dovoljno je koristiti specifične sustave ispitivanja. Osoba dobiva rezultat nakon 5 sati;
5. svestranost. Analiza omogućuje identificiranje bilo kojeg genetskog materijala (RNA, DNA). Zbog toga liječnik može potvrditi hepatitis C i druge vrste bolesti (B);
6. mogućnost otkrivanja latentne infekcije.

Kvantitativno istraživanje

U proučavanju krvi s lančanu reakciju polimeraze, moguće je izračunati broj patogena u fiksnom volumenu biološkog materijala. Pokazatelj je prikazan u IU / ml. Zbog analize moguće je utvrditi stupanj infektivnosti pacijenta, odrediti stupanj infektivnog procesa, kao i procjenu učinkovitosti terapije lijekovima.

Na temelju PCR, stručnjak odluči koje doze lijekova mogu blokirati širenje patogena. Osim toga, određuje se trajanje antivirusnog liječenja i prognozu za život. Važno je zapamtiti da su sustavi za ispitivanje vrlo osjetljivi, stoga je metoda omogućila potvrdivanje ljudske infekcije čak i na pretkliničkom stupnju.

genotipizacija

S obzirom na sposobnost uzročnika da mutira, kako bi se odredila taktika liječenja i izbor antivirusnih lijekova, njegov genotip je potreban. Na primjer, liječenje hepatitisa HCV 1 traje 48 tjedana, s pozitivnim trendom koji se promatra samo u 60% slučajeva. Genotipovi 2 i 3 imaju povoljniju prognozu. Antivirusni lijekovi propisuju se 8 mjeseci, a njihova učinkovitost doseže 85%.

Prema statističkim podacima, u većini slučajeva HCV 1, 2 i 3 registrirani su na području Ruske Federacije.

Kada dešifrirati laboratorijsku studiju, takav se odgovor može naznačiti - "nije upisano". To znači da virus cirkulira u krvožilnom sustavu pacijenta, što testni sustav ne može prepoznati. Rezultat analize u ovom slučaju ukazuje na infekciju osobe atipične za određeno zemljopisno područje uzročnika.

Kako dobiti pouzdane rezultate?

Za kvalitativno istraživanje PCR-a na otkrivanju RNA uzročnika hepatitisa C pokazalo je točne rezultate, potrebno je udovoljiti zahtjevima za pripremu za laboratorijsku dijagnostiku:

1. uzimanje krvi izvodi se na prazan želudac, a "gladni" jaz ne smije biti kraći od 8 sati;
2. dva dana prije studije preporuča se prestati konzumirati alkohol i odbiti od oštrih, masnih i pušenih jela;
3. ukloniti uvođenje lijekova koji smanjuju zgrušavanje krvi, kao što je heparin. Ako se ovi lijekovi propisuju iz životnih razloga, o tome obavijestite svog liječnika. Pored toga, stručnjak treba biti svjestan primanja drugih lijekova koji mogu utjecati na rezultat laboratorijskog testa;
4. Uoči prikupljanja biološkog materijala, fizioterapeutski postupci ne smiju se izvoditi i podvrgnuti teškom tjelesnom naporu.

Na rezultate analize može utjecati ne samo osoba koja donosi krv, nego i drugi čimbenici, i to:

• loše prikupljanje krvi;
• nepoštivanje preporuka za transport biološkog materijala;
• nedovoljna obuka laboratorija;
• nepoštivanje istraživačkih tehnika;
• uvođenje antikoagulanata (heparina) uoči uzorkovanja krvi. Ova skupina lijekova smanjuje koagulabilnost, čime se usporava rad reagensa.

U različitim laboratorijima, dijagnostički odgovor može biti malo drugačiji, ali ove pogreške ne utječu na konačni rezultat studije.

Posebna se pozornost posvećuje vrstama ispitnih sustava koji se koriste u laboratoriju. Često, prednost se daje reaktantima s visokom osjetljivošću. Ovo je važno za pacijente s niskim količinama virusa, jer je teško otkriti.

Koliko se često provodi laboratorijski test?

Primarno, lančana reakcija polimeraze provodi se u ljudi koji su testirani na antitijela na hepatitis virus u imunološkoj analizi. U tom je slučaju imenovan za potvrdu činjenice infekcije osobe i utvrđivanje stupnja bolesti. Osim toga, analiza omogućuje određivanje podtipa virusa, što je posebno važno za odabir lijekova.

Sljedeće razdoblje za obavezno laboratorijsko testiranje je 3 mjeseca od početka antivirusne terapije. Dijagnoza pruža mogućnost procjene učinkovitosti lijekova, prilagodbe ili zamjene doze.

Osim osnovnih analiza, PCR se može izvesti dodatno 4 i 24 tjedna od početka liječenja. Pozitivna prognoza bolesti potvrđena je smanjenjem količine virusa nakon tri mjeseca terapije. Tako, na primjer, treba smanjiti od 1 milijuna IU / ml do nekoliko stotina tisuća.

Ako koncentracija patogenih agenasa u krvi ostaje na istoj razini ili malo povećava, to ukazuje na neučinkovitost antivirusnih sredstava i zahtijeva njihovu zamjenu. Uz pomoć PCR-a na kraju liječenja moguće je potvrditi oporavak pacijenta.

Za pravilno tumačenje rezultata laboratorijske dijagnoze potrebno je konzultirati stručnjaka hepatologa ili zaraznih bolesti. S obzirom na visoku učestalost lažnih odgovora za ELISA, analiza se koristi isključivo za primarnu probir. Za temeljitije ispitivanje pacijenta koristi se lančana reakcija polimeraze.

Može li se izliječiti od hepatitisa C bez nuspojava?

Danas moderni lijekovi i nova generacija sofosbuvir Daklatasvir sa 97-100% vjerojatno zauvijek će vas izliječiti od hepatitisa C. Najnoviji lijek je dostupan na ruskom na službeni predstavnik indijskog farmgiganta Zydus Heptiza. Naručeni proizvodi će biti dostavljeni od strane dostavljača u roku od 4 dana, plaćanje nakon primitka. Dobijte besplatnu konzultaciju o korištenju modernih lijekova, kao i saznajte o načinima kupnje možete na službenim stranicama dobavljača Zydus u Rusiji.