Virus hepatitisa C (HCV), antigeni cor, NS3, NS4, NS5, IgG antitijela

Poraz jetre pomoću tipa C jedan je od akutnih problema zarazne bolesti i hepatologije. Za bolest, karakteristično dugotrajno razdoblje inkubacije tijekom kojega nema kliničkih simptoma. U ovom trenutku, nositelj HCV-a je najopasniji, jer ne zna o svojoj bolesti i može inficirati zdrave ljude.

Po prvi put se govorilo o virusu krajem dvadesetog stoljeća, nakon čega je započeo njezin punopravni studij. Danas znamo od svojih šest oblika i velikog broja podtipova. Ova varijabilnost strukture je zbog sposobnosti uzročnika da mutacija.

U srcu razvoja infektivnog i upalnog procesa u jetri je uništenje hepatocita (njenih stanica). One su uništene pod izravnim utjecajem virusa koji ima citotoksični učinak. Jedina šansa da se identificira patogeni agens na pretkliničkom stupnju je laboratorijska dijagnoza, koja uključuje traženje antitijela i genetički skup virusa.

Što su hepatitis C antitijela u krvi?

Teško je za osobu koja je daleko od medicine razumjeti rezultate laboratorijskih studija bez ideje o protutijelima. Činjenica je da se struktura patogena sastoji od kompleksa proteinskih komponenti. Nakon penetracije u tijelo, oni uzrokuju reakciju imunološkog sustava, kao da ih iritiraju njihovom prisutnošću. Stoga počinje proizvodnja antitijela na hepatitis C antigene.

Mogu biti nekoliko vrsta. Zbog procjene njihove kvalitativne kompozicije, liječnik uspijeva sumnjati u ljudsku infekciju, kao i utvrditi stupanj bolesti (uključujući oporavak).

Primarna metoda za otkrivanje antitijela na hepatitis C je enzimski imunoanaliza. Njegov cilj je pronaći specifični Ig, koji je sintetiziran kao odgovor na infiltraciju infekcije u tijelo. Napominjemo da ELISA dopušta da se sumnja u bolest, nakon čega je potrebna daljnja lančana reakcija polimeraze.

Protutijela čak i nakon potpune pobjede nad virusom ostaju za život u ljudskoj krvi i svjedoče o prošlom kontaktu imuniteta s patogenom.

Faze bolesti

Protutijela na hepatitis C mogu upućivati ​​na stupanj zaraznog upalnog procesa, koji pomaže specijalistu odabrati učinkovite antivirusne lijekove i pratiti dinamiku promjena. Postoje dvije faze bolesti:

• latentna. Osoba nema nikakvih kliničkih simptoma, unatoč činjenici da je on već nositelj virusa. Istovremeno, test antitijela (IgG) za hepatitis C će biti pozitivan. Razina RNA i IgG je mala.
• akutne - karakterizira povećanje titra antitijela, posebno IgG i IgM, što ukazuje da je intenzivan umnožavanje patogenih i izraženu uništavanje hepatocitima. Njihovo uništenje potvrđuje povećanjem jetrenih enzima (ALT, AST) koji je detektiran pomoću biokemije. Pored toga, u visokoj koncentraciji detektira se patogeni agens RNA.

Pozitivna dinamika na pozadini liječenja potvrđuje smanjenje količine virusa. Nakon oporavka, RNA patogena nije otkrivena, ostaju samo imunoglobulini G, koji ukazuju na prenesenu bolest.

Indikacije za procjenu utjecaja na okoliš

U većini slučajeva, imunitet se ne može samostalno nositi s patogenom, jer ne stvara snažan odgovor protiv njega. To je posljedica promjene u strukturi virusa, što rezultira da su proizvedena protutijela nedjelotvorna.

Obično, ELISA se primjenjuje više puta, jer može rezultirati negativnim rezultatom (prvom bolesti) ili lažno pozitivnim (u trudnica, u autoimunim patologijama ili u anti-HIV terapiji).

Da bi potvrdili ili opovrgli ELISA odgovor, nužno je ponovno provesti u mjesec dana, a također donirati krv za PCR i biokemiju.

Ispitivana su protutijela na hepatitis C virus:

1. korisnike droga za ubrizgavanje;
2. u osoba s cirozom jetre;
3. ako je trudnica nosač virusa. U ovom slučaju, i majka i dijete podliježu ispitivanju. Rizik infekcije varira od 5% do 25%, ovisno o količini virusa i aktivnosti bolesti;
4. nakon što je imao nezaštićeni seks. prijenos vjerojatnost manja od 5%, ali s ozljedom sluznici genitalija, homoseksualaca i ljubitelja česte promjene partnera, rizik je puno veći;
5. nakon tetoviranja i piercinga;
6. nakon posjeta kozmetičkom salonu s lošim ugledom, budući da se infekcija može dogoditi putem kontaminiranih alata;
7. prije davanja krvi, ako osoba želi postati donator;
8. na medicinskom osoblju;
9. za zaposlene u internatima;
10. nedavno pušten iz MLS;
11. ako se otkrije povećanje hepatičnih enzima (ALT, AST) - isključivanje oštećenja virusnih organa;
12. u bliskom kontaktu s nosačem virusa;
13. kod osoba s hepatosplenomegalijom (povećani volumen jetre i slezene);
14. u HIV pozitivnim ljudima;
15. u osoba s žuticom kože, hiperpigmentacije dlanova, kroničnog umora i boli u jetri;
16. prije planirane kirurške intervencije;
17. pri planiranju trudnoće;
18. u ljudi s strukturnim promjenama u jetri, identificirani s ultrazvukom.

Analiza imunoenzima koristi se kao screening za masovnu analizu ljudi i potragu za prijenosnicima virusa. To sprječava izbijanje zarazne bolesti. Liječenje koje je započelo u početnoj fazi hepatitisa mnogo je učinkovitije od terapije cirozom.

Vrste antitijela

Da bi ispravno protumačili rezultate laboratorijske dijagnoze, trebate znati koja su protutijela i što oni mogu značiti:

1. anti-HCV IgG je glavna vrsta antigena predstavljenih imunoglobulinima G. Oni se mogu otkriti tijekom primarnog humanog pregleda, tako da se može sumnjati u bolest. S pozitivnim odgovorom, vrijedno je razmotriti spor zarazni proces ili kontakt imuniteta s virusima u prošlosti. Pacijentu je potrebna daljnja dijagnoza PCR-om;
2. anti-HCVcoreIgM. Ova vrsta markera znači "protutijela nuklearnim strukturama" patogenog agensa. Oni se pojavljuju u bliskoj budućnosti nakon infekcije i ukazuju na akutnu bolest. Povećanje titra zabilježeno je smanjenjem snage imunološke obrane i aktivacije virusa u kroničnom tijeku bolesti. Kada je remisija, marker je slabo pozitivan;
3. ukupni anti-HCV - ukupni indeks antitijela na strukturne proteinske spojeve patogena. Često je upravo to omogućuje vam točno dijagnosticiranje stadija patologije. Laboratorijsko testiranje postaje informativno nakon 1-1,5 mjeseci od trenutka prodiranja HCV u tijelo. Ukupna protutijela na virus hepatitisa C su imunoglobulin M i G. Tijek rasta promatra se prosječno 8 tjedana nakon infekcije. Oni ustraju za život i ukazuju na bolest koja je prenesena ili na kronični tijek;
4. anti-HCVNS. Pokazatelj je protutijelo ne-strukturnih pobudnih proteina. To uključuje NS3, NS4 i NS5. Prvi tip se nalazi na početku bolesti i ukazuje na kontakt imunosti s HCV. To je pokazatelj zaraze. Dugotrajno očuvanje njegove visoke razine neizravni je znak kronične infekcije virusnog upalnog procesa u jetri. Protutijela na preostale dvije vrste proteinskih struktura otkrivena su u kasnoj fazi hepatitisa. NS4 - pokazatelj stupnja oštećenja organa i NS5 - ukazuje na kronični tijek bolesti. Smanjenje njihovih titara može se smatrati početkom remisije. S obzirom na visoke troškove laboratorijskih testiranja, rijetko se koristi u praksi.

Postoji još jedan marker - HCV-RNA, koja uključuje traženje genetskog skupa patogena u krvi. Ovisno o količini virusa, nosač infekcije može biti više ili manje zarazan. Za ispitivanje koriste se sustavi za ispitivanje osjetljivosti na visoki stupanj osjetljivosti, što omogućuje otkrivanje patogenog uzročnika u pretkliničkoj fazi. Osim toga, PCR može otkriti infekciju u fazi gdje antitijela još nisu dostupna.

Vrijeme nastanka protutijela u krvi

Važno je razumjeti da se antitijela pojavljuju u različitim vremenima, što vam omogućuje da preciznije ustanovite stadij zarazno-upalnog procesa, procjenjujete rizik od komplikacija, a također sumnjate na hepatitis na početku razvoja.

Ukupno imunoglobulini počinju se registrirati u krvi u drugom mjesecu infekcije. U prvih 6 tjedana, razina IgM se brzo povećava. To ukazuje na akutni tijek bolesti i visoku aktivnost virusa. Nakon pojave vrha njihove koncentracije, opaža se smanjenje, što upućuje na početak sljedeće faze bolesti.

Ako se hepatitis C otkrije antitijela klase G, valja sumnjati na kraj akutne faze i prijelaz patologije u kronični. Otkrivaju se nakon tri mjeseca od trenutka infekcije u tijelu.

Ponekad se ukupno antitijela mogu izolirati već u drugom mjesecu bolesti.

Što se tiče anti-NS3, oni se otkrivaju u ranoj fazi serokonverzije, a anti-NS4 i -NS5 - u kasnijoj fazi.

Objašnjenje studija

Za detekciju imunoglobulina koristi se ELISA metoda. Temelji se na reakciji antigena i antitijela, koja se javlja pod djelovanjem posebnih enzima.

Obično ukupni rezultat nije zabilježen u krvi. Kvantificirati protutijela koristi se pozitivni faktor "R". Označava gustoću ispitnog markera u biološkom materijalu. Njegove referentne vrijednosti su od nula do 0,8. Raspon od 0,8-1 označava sumnjivi odgovor dijagnoze i zahtijeva daljnje ispitivanje pacijenta. Pozitivan rezultat se uzima u obzir kada se prekorači R jedinica.

Antigeni hepatitisa s

Danas znamo najmanje 10 strukturnih i nestrukturnih proteina, koji su kodirani pomoću HCV genoma. Strukturni proteini uključuju jezgru, omotač 1 i omotač 2. ​​Jezgra proteina je nukleokapsidni protein, dok su envelop 1 i envelop 2 glikoproteini vanjske ovojnice virusa. Protein p7 također je kodiran u strukturnom području, čija funkcija nije jasna, ali analogija s drugim predstavnicima obitelji Flaviviridae upućuje na to da se njegova funkcija odnosi na oslobađanje viriona iz zaražene stanice.
Ovaj protein se cijepa putem stanice peptidaza iz obujma 2, ali ne u svim slučajevima, što uzrokuje postojanje oblika 2 u obliku dva oblika koji su sve više i manje produženi.

nestrukturirani genomskom području HCV 6 kodira proteine ​​- NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A i NS5B. NS2 protein je virusna metalna ovisna proteinaza. NS4A protein djeluje kao kofaktor za efektor ili NSZ-proteolitičke aktivnosti u NS4A / NS4B, NS4B / NS5A i NS5A / NS5B rezanje virusa poliproteina.

trenutno, fragmenti strukturni i nestrukturni proteini dobiveni genetskim inženjeringom (rekombinantnim proteinima) ili kemijskom sintezom, koriste se kao antigeni u dizajnu enzimski povezanih imunoloških sustava. Prva generacija imunoenzimskih testnih sustava pojavila se na tržištu 1989. godine i bila je zasnovana na izravnoj ELISA. Kao imunosorbens korišteni su fragmenti dvaju proteina NS3 i NS4, označeni kao 5-1-1 i C100-3.

Istodobno, potvrđuje testovi bazirani na imunoblotu s rekombinantnim proteinima (RIBA). Osjetljivost ovih prvih generacija ispitnih sustava bila je samo 64% za ELISA i 55% za imunoblot. Testni sustavi druge generacije pojavili su se na tržištu 1991. godine. Kao antigen adsorbiran na čvrstoj fazi u tim testnim sustavima koji se koriste kapsulirani proteini (fragment s22-3) i ne-strukturnog područja NS3 antigeni (fragmenti C200 i sZZs) i NS4, čime se poboljšava studije osjetljivosti i specifičnosti. Budući da je humoralni imuni odgovor na kapsidni antigen (strukturni proteini) naginaetsya brži dragulj na ne-strukturnih proteina, razdoblje od infekcije do odredive serokonverzije smanjena je na dva mjeseca.

Sustavi za potvrđivanje na temelju imunoblot dopušteno je identificirati antigene uključene u reakciju. Rezultati dobiveni ovim testnim sustavima interpretirani su kao pozitivni samo reakcijom antitijela na ispitivanom supstratu s najmanje dva antigena, dok je u prisutnosti reakcije sa samo jednim od antigena, rezultat se smatrao neizvjesnim. Utvrđeno je da specifičnost druge generacije ispitnih sustava ovisi o izvoru antigena. 1993. godine pojavila se treća generacija ispitnih sustava na tržištu. Pored navedenih antigena, ovi test sustavi također koriste antigene čija aminokiselinska sekvenca odgovara imunodominantnim područjima NS5 proteina.

U prvom, drugom i trećoj generaciji test sustava, kao antigeni Koristi se rekombinantni ili sintetički peptidi. U današnje vrijeme, također je moguće identificirati četvrte generacije testnih sustava u kojima se kombinacije rekombinantnih i sintetičkih peptida koriste kao imunosorbent.

Iskustvo primjene ispitni sustavi različite generacije na svijetu vrlo su velike. Nađeno je da kada se koristi test sustava prve ili druge generacije u bolesnika s akutnim virusnim hepatitisom antitijela detektirano je na 10-16, a u nekim slučajevima 25-30 tjedan od početka, a treća generacija diagnosticums ostavljena ovog razdoblja kako bi se smanjila 2-3 tjedna. Prema općim test osjetljivosti podataka sustava prve, druge i treće generacije su redom 70-80%, 92-95% i 97%.

Istodobno, prema S. Colin, 2001, osjetljivost ispitni sustavi treće generacije bio je 98,9% u bolesnika s kroničnom bolešću jetre i 97,2% u posebnim kontrolnim pločama sera. Postizanje visoke osjetljivosti sustava ispitivanja imunološkog testa treće i četvrte generacije uključuje neke probleme u osiguravanju specifičnosti studija, što u nekim slučajevima može dovesti do lažnih pozitivnih rezultata. U literaturi postoje podaci o mogućim pogreškama u specifičnosti ELISA 3 test sustava. Zajedni su u svim ELISA test sustavima, uključujući testne sustave za dijagnozu AIDS-a.

Lažni pozitivni rezultati mogu biti posljedica povećan Sadržaj u uzorcima gama-globulina (seruma afričke rase bolesnika, multipli mijelom, reumatoidni faktora), bolesti jetre (ciroze, rak), autoimunih bolesti (bolest kolagena, autoimuni hepatitis), druge virusne infekcije (HIV, hepatitis B), i dugoročno skladištenje serumu mijenjanje uvjeta temperature. Provođenje bilo koje imunizacije može također biti popraćeno povećanjem učestalosti lažnih pozitivnih. Trenutno preporučene mjere za uklanjanje ovog problema su sljedeće: a) ponovno postavljanje uzorka u istom IFTS-u; b) ponavljanje otkrivanja anti-HCV u nekom drugom IFNT; c) korištenje potvrđenih testova na temelju ELISA i imunoblota.

Međutim, pomoću predloženih metoda potvrde rezultati često dovode do odstupanja u njihovom konačnom tumačenju, što je pokazalo istraživanje ruskih i inozemnih istraživača.

Trenutno proizvođača IFTS za otkrivanje anti-HCV postići visoku osjetljivost, ili zbog potpunije detekciju antitijela na NS3 antigena ili antitijela na jezgri. Komparativne studije provedene u različitim rizičnim skupinama i posebne kontrolne ploče otkrilo je da test sustav, bolje je da se identificiraju antitijela na NS3, bili su nešto osjetljiviji od ispitnog sustava, bolje je da se identificiraju antitijela na jezgru. Njihova osjetljivost bila je 99,9% i 98,6%.

Ukupni biljezi i transkripti analize antitijela na hepatitis C

Virusna oštećenja jetre danas se često manifestiraju u praksi gastroenterologa. I voditelj će, naravno, biti među tim hepatitisom C. Kretanje u kroničnu fazu uzrokuje značajnu štetu stanicama jetre, ometajući njezine probavne i barijere.

Hepatitis C karakterizira spor protok, dugo razdoblje bez očitovanja glavnih simptoma bolesti i visokog rizika od komplikacija. Bolest se dugo vremena ne izdaje i može se otkriti jedino testom za antitijela na hepatitis C i druge markere.

Hepatociti (stanice jetre) podliježu virusu, uzrokuju njihovu disfunkciju i uništavanje. Postupno, nakon prolaska kroz fazu kroničnosti, bolest dovodi do smrti neke osobe. Pravovremena dijagnoza pacijenta za hepatitis C protutijela može zaustaviti razvoj bolesti, poboljšati kvalitetu i očekivano trajanje života pacijenta.

Virus hepatitisa C prvi put je izoliran krajem 20. stoljeća. Medicina danas razlikuje šest varijacija virusa i više od stotinu njegovih podtipova. Definicija raznih mikroba i njegovog podtipa u osobi vrlo je važna jer određuju tijek bolesti i, prema tome, pristupe njegovom liječenju.

Budući da je početni unos virusa u ljudsku krv, prije pojave prvih simptoma, potrebno je 2 do 20 tjedana. Više od četiri petine svih slučajeva akutne infekcije razvija se bez ikakvih simptoma. I samo u jednom od pet slučajeva moguće je razviti akutni proces s karakterističnom svijetlom kliničkom slikom prema svim pravilima prijenosa žutice. Kronični tijek infekcije stiče više od polovice oboljelih, a zatim prolazi do ciroze jetre.

Identificirani u vremenu antitijela na virus hepatitisa C mogu dijagnosticirati infekciju u svom najprikladnijem stadiju i dati pacijentu šansu za potpuno liječenje.

Što su antitijela na hepatitis C?

Ljudi koji nisu vezani za lijekove mogu imati prirodno pitanje - protutijela na hepatitis C, što je to?

Virus ove bolesti u svojoj strukturi sadrži niz proteinskih komponenti. Kada se progutaju, ti proteini uzrokuju reakciju imunološkog sustava i oblikuje im protutijela na hepatitis C. Različite vrste antitijela su izolirane, ovisno o vrsti originalnog proteina. Određeni su laboratoriji u različitim vremenima i dijagnosticiraju različite faze bolesti.

Kako se provodi hepatitis C protutijela?

Za otkrivanje protutijela na hepatitis C, čovjek u laboratoriju proizvodi ogradu venske krvi. Ova studija je pogodna jer ne zahtijeva nikakvu preliminarnu pripremu, osim apstinencije od prehrane 8 sati prije postupka. U sterilnoj epruveti, krv subjekta je sačuvana, nakon imunoenzimske analize (ELISA) temeljeno na vezanju antigena i antitijela, detektirani odgovarajući imunoglobulini.

Oznaka za dijagnozu:

• poremećaji u radu jetre, pritužbe pacijenta;
• povećani pokazatelji funkcije jetre u biokemijskoj analizi - transaminaze i frakcije bilirubina;
• preoperativni pregled;
• planiranje trudnoće;
• sumnjive podatke o ultrazvučnoj dijagnostici abdominalne šupljine, osobito jetre.

Ali često hepatitis C antitijela se prilično slučajno nalaze u krvi, pri ispitivanju trudne ili planirane operacije. Za osobu je ta informacija u mnogim slučajevima šok. Ali nemoj paničariti.

Postoji niz slučajeva gdje su moguće i lažno negativne i lažno pozitivne rezultate dijagnoze. Stoga, nakon savjetovanja sa specijalistom, preporučujemo ponoviti upitnu analizu.

Ako se otkriju antitijela na hepatitis C, ne vrijedi prilagoditi najgore. Trebali biste zatražiti savjet stručnjaka i provesti dodatne pretrage.

Vrste antitijela na hepatitis C

Ovisno o antigenu na koji su formirani, antitijela za hepatitis C dijele se u skupine.

Anti-HCV IgG - Klasa G protutijela na hepatitis C virus

Ovo je glavna vrsta antitijela utvrđena za dijagnozu infekcije tijekom početnog pregleda u bolesnika. "Ove hepatitis C markere, što je to?" - svaki pacijent će zatražiti liječnika.

Ako ti antitijela na hepatitis C pozitivan, to znači da je imunološki sustav suočen s virusom prije, može biti prisutna indolentni oblik bolesti bez svijetle kliničke slike. U vrijeme uzorkovanja nema aktivne replikacije virusa.

Detekcija imunoglobulinskih podataka u krvi osobe je razlog dodatnog pregleda (detekcija RNA uzročnika hepatitisa C).

Anti-HCV jezgrena IgM - antitijela klase M nuklearnim proteinima HCV

Ova vrsta markera počinje se isticati odmah nakon što patogeni mikroorganizam udara u ljudsko tijelo. Laboratorij se može pratiti mjesec dana nakon infekcije. Ako se otkriju antitijela na hepatitis C klase M, dijagnosticira se akutna faza. Broj tih antitijela povećava se u trenutku slabljenja imuniteta i aktivacije virusa u kroničnom procesu bolesti.

S smanjenjem aktivnosti patogena i prijelazom bolesti u kronični oblik, ovu vrstu antitijela može prestati biti dijagnosticirana u krvi tijekom istraživanja.

Ukupno anti-HCV - ukupna antitijela na hepatitis C (IgG i IgM)

U praktičnim situacijama često se upućuje na ovu vrstu studija. Antitijela na virus hepatitisa C ukupno predstavlja detekciju markera klase su M i G. To postaje informativni analizom nakon pohranjivanja prve klase antitijela, tj 3-6 tjedana nakon infekcije činjenicu. Dva mjeseca kasnije, u prosjeku, nakon tog datuma aktivni su imunoglobulini razreda G. Određeni su u krvi bolesne osobe za život ili dok se virus ne ukloni.

Ukupna protutijela na hepatitis C su univerzalni način primarnog pregleda bolesti mjesec dana nakon ljudske infekcije.

Anti-HCV NS-antitijela na ne-strukturne proteine ​​HCV

Gore spomenuti markeri pripadali su strukturnim proteinskim spojevima uzročnika hepatitisa C. Ali postoji skupina proteina koji se nazivaju nestrukturni proteini. Također se mogu koristiti za dijagnosticiranje pacijentove bolesti. To su NS3, NS4, NS5 grupe.

Protutijela NS3 elementima otkrivena su u prvoj fazi. Karakterizira primarnu interakciju s patogenom i služi kao neovisni pokazatelj prisutnosti infekcije. Dugotrajno zadržavanje ovih titara u velikim količinama može biti pokazatelj povećanog rizika od prijelaza infekcije u kronični oblik.

Protutijela NS4 i NS5 elemenata otkrivena su u kasnim razdobljima bolesti. Prva od njih ukazuje na razinu oštećenja jetre, drugi - o pokretanju kroničnih infekcijskih mehanizama. Smanjenje titra oba indikatora bit će pozitivan znak početka remisije.

U praksi se prisutnost nestrukturiranih hepatitisa C protutijela u krvi rijetko provjerava, jer to značajno povećava troškove studije. Češće za proučavanje stanja jetre koriste se antitijela jezgre hepatitisa C.

Ostali markeri hepatitisa C

U medicinskoj praksi postoji nekoliko drugih pokazatelja koji ocjenjuju prisutnost bolesnika s virusom hepatitisa C.

HCV-RNA - hepatitis C virus RNA

Uzročnik hepatitisa C - sadrže RNA, stoga mogu biti PCR postupak provesti reverzne transkripcije gena otkrivanje patogena u krvi ili biomaterial, uzet na biopsiji jetre.

Ovi testni sustavi su vrlo osjetljivi i mogu detektirati čak jednu jedinu česticu virusa u materijalu.

Na taj način moguće je ne samo dijagnosticirati bolest, već i odrediti njegov tip koji pomaže u izradi plana za buduće liječenje.

Antitijela na hepatitis C: tumačenje analize

Ako je pacijent dobio rezultate analize za otkrivanje hepatitisa C enzimskim imunološkim testom (ELISA), možda se pitaju - hepatitis C protutijela, što je to? A što oni pokazuju?

Kada se proučava biomaterija za hepatitis C, ukupna protutijela nisu otkrivena.

Razmotrimo primjere IFA analiza za hepatitis C i njihovu interpretaciju:

„Virus hepatitisa C: virusnih antigena i odgovor na njih, imunološki sustav informacijske domaćin priručnika Novosibirsk UDC 616.36-002.14: 578891] -078,33 Virus hepatitisa C :. "

VIRUS HEPATITIS C:

antigena virusa i reakcije

na njima imunološki sustav

Virus hepatitisa C: antigeni virusa i odgovor na imunološki sustav makroorganizma:

informacijsko-metodički priručnik / L.I. Nikolaev.

- Novosibirsk: Vector-Best, 2009. 78 str.

Priručnik opisuje trenutno razumijevanje molekularne biologije s virusom hepatitisa C (HCV) antigen i imunih obrana domaćina kada zaraženih s ovim virusom. Ispitati razlike u specifičnoj humoralnog imuniteta kod ljudi s akutnim i kroničnim hepatitisom C, obrascima promjena u sadržaju anti-virus antitijela s trenutnom toku akutnih i kroničnih infekcija, kao i specifična obilježja humoralnog imuniteta u djece s markeri HCV infekcije.

Priručnik je namijenjen zaposlenicima bioloških i medicinskih istraživačkih instituta, za radnike medicinskih centara za dijagnostiku i studenti fakulteta poslijediplomskog obrazovanja liječnika.

LI Nikolaeva - doktor bioloških znanosti, vodeći istraživač VI Lenin Research Institute of Virology. DI Ivanovskiy Ruska akademija medicinskih znanosti.

Objavljen je u autorskom izdanju.

© Nikolaeva LI, 2009. © ZAO Vector-Best, 2009

POPIS AKRONIJE

ako - aminokiselina (th) ostatak (-tki) ALT - alanin aminotransferaza APC - stanica za predočavanje antigena AST - aspartat aminotransferaza HCV - hepatitis C virus TOS - hepatitis C HIV - humani virus imunodeficijencije HPV - virus kao čestice HWR - hipervarijabilno područje IL - interleukin IFN - interferon kD - kilodaltona LDL - lipoproteina niske gustoće VLDL lipoproteini vrlo niske - gustoće mab - monoklonalno protutijelo MHC - glavnog sustava tkivne kompatibilnosti (glavnog sustava tkivne kompatibilnosti) NTR - netranslatirano područje AHO - ost Prvi hepatitis C RT-PCR - reverzne transkripcije lančanom reakcijom polimeraze HPV - psevdovirusnye čestica PCR - lančana reakcija polimeraze HHO - kroničnog hepatitisa C TCL - T-limfocita pomagača CTL - citotoksični T limfociti EPR - endoplazmatski retirulum

SADRŽAJ

Poglavlje 1. Virus hepatitisa C

1.1. Organizacija genoma virusa

1.2. Struktura viriona

Poglavlje 2. Glavni antigeni virusa hepatitisa.

2.1. Struktura, funkcije i epitopi obloženih glikoproteina

2.2. Nukleokapsidni antigen

2.3. Karakteristike proteina NS2

2.4. Struktura, funkcije i epitope NS3 proteina.

2.5. NS4a i NS4b polipeptida i njihovih determinanti. 35

2.6. Biološki značaj i epitopi proteina NS5a i NS5b

Poglavlje 3. Uloga imunološkog sustava u ograničavanju infekcije HCV-om

3.1. Glavni čimbenici imunološkog sustava koji utječu na uklanjanje virusa u akutnoj fazi infekcije. _

3.2. Uloga reakcije T-stanica u hepatitisu C

3.3. Humoralni odgovor na antigene virusa hepatitisa C. 49 3.3.1. Specifična antitijela u akutnoj fazi infekcije. 3.3.2. Specifični humoralni imunitet u prirodnom tijeku kroničnog hepatitisa C. 55 3.3.3. HCV-specifični humoralni imunitet kod ljudi koji su podvrgnuti akutnoj infekciji s oporavkom

3.3.4. Specifični humoralni imunitet kod djece s markerima HCV infekcije

UVOD

Trenutno u Ruskoj Federaciji, kao u većini zemalja, postoji nepovoljna epidemiološka situacija u parenteralnom virusnom hepatitisu [1-3]. Očekuje se da će do 2015-2020. broj zaraženih ljudi diljem svijeta će udvostručiti [2, 3]. Od 2001. godine incidencija akutnog hepatitisa C (OCS) opada u našoj zemlji [1, 4]. Nakon 2004, incidencija otkrivanja osoba s kroničnim hepatitisom C (CHC) počeo se smanjivati ​​[5, 6].

Međutim, među djecom do 2006. godine došlo je do povećanja broja pacijenata s CHC [1, 5, 6]. Stručnjaci procjenjuju da 4.1.-4.2.% ruskih građana su inficirani s virusom hepatitisa C (HCV), a većina tih ljudi imaju kronične infekcije [7, 8]. Za CHC tipično progresivno naravno vodi do formiranja ciroze jetre (30%), primarni hepatocelularni karcinom (15%) i ekstrahepatičkom manifestacijama (74%) do [9, 10].

Unatoč intenzivnom istraživanju HCV infekcije, što je još uvijek ne može utvrditi uzrok učestalih oblika kronične infekcije, za identifikaciju određenog imunološkog odgovora, što uzrokuje prirodni uklanjanje virusa u akutnoj fazi infekcije, kao i za stvaranje preventivno cjepivo. Poznato je da je HCV antigeni sposobni proizvesti B i T stanica, odgovor koji je u 15-25% osoba s hepatitisom C akutnog dovoljna za otklanjanje virusa [2, 11]. Ali najčešće akutna faza infekcije prolazi u kronični oblik na pozadini više ili manje naglašenog adaptivnog imunog odgovora [12, 13].

Virus hepatitisa C - jedinstveni patogen koji je u stanju da se izbjegne imuni nadzor, stvaranje novih genetske i antigenske varijacije, usporava stvaranje T-pomagača i odgovorom T-stanica ubojica u akutne infekcije hepatitisom C i uzrokovati ponovno vraćen u ljudi. Intenzivno istraživanje HCV infekcije počela nakon identifikacije uzročnika u 1989. i to prvenstveno provode glavni cilj - uspostavu preventivne vakcine [14, 15]. Do kraja 1990-ih, nakon neuspjelih pokušaja da se razvije vakcina baziranih na rekombinantne HCV proteina ovojnice fokusu proučavanja antivirusni imunitet je nacrtana na određeni odgovor T stanica.

Treba napomenuti da je istraživanje zaštitnih imunoloških mehanizama u hepatitisu C uglavnom ograničeno nedostatkom dostupnog laboratorijskog modela infekcije, virus utječe samo na ljude i čimpanze. No, kao što su A. Basset i koautori pokazali, u čimpanzama zaraženim virusom, tijek infekcije ima lakši oblik, a oporavak se javlja češće nego kod ljudi [16].

Ovaj priručnik sažima trenutne podatke o HCV antigensima i ispituje mogućnosti imunološke zaštite ljudskog organizma u ovoj infekciji. Posebna pažnja posvećuje se specifičnom humoralnom odgovoru, budući da je pao iz područja intenzivne studije. Kao što je istaknuto od strane inozemnih istraživača, ovo je uglavnom zbog nedostatka dostupnih metoda za analizu antitijela na odvojenih (pojedinačnih) antigena HCV-a [17]. Od 1998. godine u našoj su zemlji proizvedeni imunoenzimni testni sustavi za analizu imunoglobulina za pojedine HCV antigene, što je omogućilo domaćim stručnjacima dobivanje vrijednih informacija o svojstvima humoralnog odgovora na virusne proteine.

6 Poglavlje 1. Virus hepatitisa C

1.1. Organizacija virusnog genoma u 1989-1990., Zahvaljujući razvoju molekularnih tehnika genetskog moguće kloniranje i izolaciju HCV genoma, a zatim i sam virus, čije postojanje je ranije predvidio [14, 15, 18, 19]. Značajke organizaciji genoma HCV dopušteno da se uključi u obitelji Flaviviridae u novom rodu Hepacivirus, čiji su članovi kasnije čelika i drugih virusa [15, 20, 21]. HCV genom je jednolančana RNA koja ima pozitivnu polarnost i sadrži oko 9400 do 9600 nukleotidnih ostataka. Je karakteriziran pomoću jedinstvenog otvorenog okvira čitanja, kratko 5 i 3-terminal netranslatirano područje (UTR) i dijelovi s visokom učestalošću mutacija [21, 22].

Otvoreni okvir za čitanje kodira jedan prekursor proteina, nazvan poliprotein, koji se sastoji od 3008-3037 aminokiselinskih ostataka (ako) [23]. Kao rezultat ko-i post-translacijskog proteolitičkog cijepanja poliproteina i prerade proizvoda nastaju strukturni i ne-strukturni proteini. Raspored virusnih antigena u poliproteinu, mjesta djelovanja proteaza i stupanj homologije između različitih izolata virusa prikazan je na slici. 1 [24].

Zbog genetske raznolikosti HCV-a početkom 1990-ih, bilo je teško klasificirati svoje izolate. 1994. godine, na II Međunarodnoj konferenciji o virusu hepatitisa C i srodnim virusima, dogovoreno je da se virusna klasifikacija temelji na regiji genoma koja kodira NS5b protein [25]. Kao rezultat toga, izolirano je 6 genotipova i oko 80 podtipova HCV-a.

(5-NTO) * (3-STO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% 1. Shema lokacije virusnih antigena u poliproteinu [24]. Mjesta djelovanja staničnih proteaza označena su strelicama s vrha, za serinsku proteazu HCV - odozdo. Mjesto cijepane NS2 / NS3 virusnom proteazom je označeno zvjezdicom.

Ispod je postotak homologije između izolata virusa s obzirom na HTO.

Glavni genotipovi su homologni za 65-70%, podtipovi (podtipovi) - za 77-80%, i genetske varijante unutar jednog izolata - za 95-97%. Kasnije, 2005. godine, stručna skupina razjasnila je klasifikaciju HCV-a [26]. Preporuča se zadržati pojam "genotip" umjesto "clayd" koji su predložili neki istraživači. Prilikom tipizacije virusnih izolata treba analizirati jezgru jezgre / E1, NS5b genom i odrediti nukleotidni slijed cijele virusne RNA ako postoji sumnja na rekombinaciju [27]. Svi poznati izolati HCV sada su razvrstani u šest genotipova, a genotipovi 7-10 koji su uveli neki istraživači smatraju se podtipovima.

Najočuvaniji dio HCV RNA je 5-terminalni HTO-oko 92% homologije [22]. Zbog ovog konzervativnog mjesta, bilo je moguće detektirati virusnu RNK u različitim izolatima pomoću RT-PCR (reverzno transkripcija lančane reakcije polimeraze) [28, 29]. U zaraženom organizmu, HCV postoji kao skup genetski različitih, ali blisko povezanih varijanti nazvanih kvasnim vrstama, razlike u nukleotidnoj sekvenci od kojih je nekoliko posto [30].

Tijekom infektivnog procesa virus se podvrgava imunološkom prešanju: neke varijante HCV uklanja imunološki sustav domaćina, dok se drugi pojavljuju [31, 32]. Nove varijante virusa pojavljuju se zbog nepostojanja RNA-ovisne RNA polimeraze HCV, ispravljajući 3-5-eksonukleaznu aktivnost [33]. Stoga, pogreške koje se javljaju tijekom replikacije virusne RNA nisu uklonjene.

Većina promjena u nukleotidnoj sekvenciji HCV RNA nalazi se u takozvanim sinonimnim mjestima, mutacije u kojima ne utječu na biološki važna svojstva virusa. Usporedba sinonimnih mjesta omogućuje vam da ustanovite razliku varijacija virusa koje se uspoređuju. Stoga, pri proučavanju izolata izoliranog HCV-a na različitim teritorijama, otkriveno je da je prodiranje virusa u ljudsku populaciju vjerojatno došlo prije otprilike tisuću godina [34, 35].

Prvi element HCV genoma, 5-terminalni HTO, sastoji se od 341 nukleotidnog ostatka i obavlja važne biološke funkcije. Ova regija osigurava interakciju virusne RNA s podskupinom ribolova 40S, stvarajući strukturno kompleksno vezno mjesto, nazvanu internu skraćenicu IRES (unutarnji ulazni položaj ribosoma) [36]. IRES HCV ima složenu prostornu strukturu (slika 2) [37, 38].

- 480 60- 140-440-5500

Sl. 2. Shema sekundarne strukture IRES-a s četiri glavne domene (I-IV), pseudo-čvorom, glavnim (1) i dodatnim (2) kodonom daje se s malim promjenama iz članka D.M. Forton i koautori [38].

Nakon vezanja IRES-a HCV-a podskupini ribosoma 40S, započinje stvaranje aktivnog translacijskog kompleksa i prijenos viralnog genoma započinje mehanizmom koji neovisan o kapi [37, 39]. Za pokretanje prevođenja, AUG kodon se koristi na poziciji 342 (Slika 2). Utvrđeno je da tijekom međudjelovanja RNA virusa i podskupine 40S ribosoma u posljednjoj, dolazi do kompleksnih konformacijskih promjena, što je jedinstveni proces [40].

Za prijevod genoma HCV potrebni su uobičajeni (kanonski) stanični faktori inicijacije eIF2 i eIF3. Budući da se aktivni kompleks nastaje translacijskom polako, početna brzina prevođenje je niska, a to povećava interakciju plus RNA nekanonskim aktivator stanične proteine, kao što je antigen La, heterogena nuklearne ribonukleoproteinskog L, i ribosomsko proteina rpS5 nekoliko neidentificiranih staničnih proteina [41-44 ].

Sposobnost IRES vezanja HCV-a na ribosom može inhibirati određene stanične proteine, peptide i vitamin B12 [45-49].

Kratke RNA, koje nazivaju kratke interferirajuće RNA, koje su komplementarne IRES mjestima, vežu se na njega, zaustavljaju prijenos genoma virusa [50]. Pokazano je da se antivirusni učinak alfa, beta i gama interferona također očituje na razini IRES-posredovanog prijevoda [51]. Utvrđeno je da HCV ima razlike u tkivu u strukturi IRES [38, 52, 53]. Moguće je da je ovo jedan od načina koji osigurava postojanost virusa u stanicama mnogih tkiva.

U replikaciji HCV genoma, RNA se stvara uz negativnu polarnost, nazvanu negativni RNA lanac. Nestabilna, cijepana staničnim enzimima (za 30 minuta gotovo 60%) [54]. U zaraženim stanicama omjer plus i minus lanaca RNA je 10: 1 [55]. Za učinkovito replikaciju virusnog genoma zahtijeva staničnog proteina PTB (polypyrimidine trakta-vezujući protein), polypyrimidine trakta za vezanje RNA [56]. U modelnim pokusima ustanovljeno je da se po zaraženim stanicama dnevno stvara oko 1000 kopija RNA plus lanaca i oko 100 kopija RNA minus lanaca [57].

Konačni element genoma - 3-terminalni HTO - sudjeluje u inicijaciji replikacije (mjesto inicijacije je u RNA minus), u regulaciji translacije i stabilizacije genomske RNA [41, 59-61]. U strukturi 3-terminalne NTO razlikuju se tri elementa:

1) kratki presjek promjenjive sekvence koja se sastoji od 40 nukleotidnih ostataka, 2) koji sadrži 36 poliuridinovy ​​trakta ili više ostataka uridina i 3) jedinstveni očuvanih regija X, koji se sastoji od 98 nukleotida [60]. Regija X ima kompleksnu sekundarnu strukturu u kojoj su izdvojene jedna duga i dva kratka oštrica [61]. Pronađeno je da je ovo područje izravno uključeni u tvorbu kompleksa, replikativni regulaciju inicijaciju translacije i replikacije [41, 62, 63].

1.2. Struktura viriona U prvim pokusima s HCV filtracijom kroz filtere s različitim promjerom pora pokazalo se da je veličina virion od 30 do 60 nm, što se poklapa s podacima o elektronske mikroskopije analizu virusa u biološkim uzorcima [64, 65]. U ranim 1990 iz seruma osoba s hepatitisom C su izolirani RNA čestica koji sadrže, kada je gradijent ultracentrifugiranje koncentrirane u pet područja u rasponu od gustoće 0,95-1,21 g / ml [66-68]. Svaka od tih zona je korištena za zarazu čimpanza [68]. I pokazalo se da je zona s gustoćom od 0,95-1,10 g / ml imala najveću infektivnost. To neuobičajeno male gustoće čestice virusa se objašnjava s HCV povezanost serumske lipoproteine ​​niske gustoće (LDL), i vrlo niske gustoće (VLDL) [19, 66].

Lipoproteini su sferne čestice formirana monosloj fosfolipida s kolesterola i apolipoproteina uklju B i E, unutarnja šupljina je ispunjena s trigliceridima čestica [69]. Glavna funkcija lipoproteina je isporuka triglicerida i kolesterola u različite stanice. Sinteza lipoproteina odvija u endoplazmatski retirulume (EPR), hepatocitima gdje su vjerojatno stupaju u interakciju s belkovolipidnoy HCV omotača, tvoreći kompleks [70]. Mnogo HCV ovojnice virusa odgovornog za stvaranje kompleksa s LDL / VLDL, još nije uspostavljena. Ovaj kompleks naziva se lipovirusne čestice. Virusi u kompleksu su zaštićeni od antitijela koja neutraliziraju virus i može prodrijeti u hepatocitima pomoću receptora za LDL [68]. Oko 75% lipoproteina koji cirkuliraju u krvi vraća se u hepatocite kroz poseban receptor za LDL; ostatak pada u hepatocite inače. Utvrđeno je da oko 20% viriona nije povezano s serumskim lipoproteinima [71].

Ispitivanje rezistencije HCV na organska otapala, A.M. Princ i suradnici su pokazali da je virus je lipid-protein ljuske koji se sastoji od stanice domaćina i lipida virusne površine proteina [72]. U slijedećim godinama HCV struktura oplemenjena visoke rezolucije mikroskopske analize jetre biopsijama bolesnika s hepatitisom C i sintetskih čestice nalik virusima (HPV). HPV se formira nakon ekspresije fragmenta HCV genoma (nazvanog replikon) u različitim vektorima. Vektori vezikularnog stomatitisa, vakcine i bakulovirus korišteni su kao vektori [73-75]. Kada je ugrađen u genom retrovirusa (HIV ili leukemija virus miševa) nukleotidne sekvence koja kodira s omotačem proteine ​​HCV, u stanju za primanje čestica psevdovirusnye (HPV), u ljusci koja sadrži E1 i E2 proteina HCV-a, i sve ostale elemente čestica retrovirusne [76, 77 ]. Uporaba HPV olakšana proučavanje morfologije i HCV montaže, kao i proučavanje svojstava njegovih proteina. Posebno, dimenzije su navedeni promjer od 50 nm viriona, što odgovara aktualnim podacima dobivenim u studiji nativnog virusa izoliranog iz pacijenata sa hepatitisom C [78, 79].

Na sl. Slika 3 je elektronski mikroskop HPV-a koji je dobiven prijenosnim elektronskim mikroskopom [79].

Sl. 3. Elektronska mikrofotografija s negativnim kontrastom HPV-a [79].

Ispod lijevo, s jačim povećanjem, prikazan je jedini virion s površinskim proteinima T-oblika.

Pod omotnicom HCV je nukleokapsid, koji je formiran s jezgrom proteina i sadrži virusnu RNA (Slika 4). Dimenzije nukleokapsida, određene elektronskom mikroskopskom analizom virusnih čestica s nepformiranom ljuskom, su 33-40 nm [74].

Do sada nije bilo moguće izolirati HCV u količini dovoljnoj za detaljnu studiju, bilo od bolesnih ljudi ili od čimpanza. To je zbog niskog sadržaja virusa, njegove heterogenosti, kao i sposobnosti stvaranja kompleksa s protutijelima i lipoproteinima u krvi. Prvo izvješće o kultiviranju HCV na transplantabilnim kulturama stanica je napravljeno od P.G. Deryabin i koautori 1997. [81]. Godine 2005. četiri skupine istraživača objavile su eksperimentalne podatke o ekspresiji virusa u transplantacijskim kulturama stanica uz proizvodnju infektivnih virusnih čestica [82-85].

Morfogeneza HCV javlja se u membranama endoplazmatskog retitula, vakuola Golgijevog aparata i citoplazme stanice. Strukturni proteini virusa su cijepani od poliproteina pomoću staničnih enzima (signal peptidaze i peptidptidaze). Jezgra proteina ostaje na citoplazmatskoj površini EPR i lipidnih vakuula citoplazme, a proteini omotnice djelomično prodiru u unutarnju šupljinu EPR-a.

U endoplazmatskom retikulu E1 i E2 bjelančevine tvore kompleks i prolaze kroz proces koji vjerojatno završava u sekrecijskim vakulama Golgi aparata. Nukleokapsid nakon pakiranja RNA je obložena, a virus se pere u EPR cisterne. Na temelju rezultata analize jetre biopsija HCV pacijenata V. Sokol i sur predložio da krajnji stadiji morfogeneze virusa pojaviti u EPR-poput citoplazmatske mjehurića struktura [86]. Formirane virusne čestice napuštaju stanicu u sekrecijskim vakuumima [87].

Stopa formiranja viriona u bolesnika s kroničnom HCV infekcijom može doseći 1012 čestica dnevno, a poluživot viriona u krvi je oko 3 sata [88].

Poglavlje 2. virus hepatitisa C antigen plutajuća ovojnice su proteini HCV E1 i E2 proteina, nukleokapsid i ne-strukturnih proteina NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5b.

Osim toga, manji polipeptidi također se prenose iz viralnog genoma: peptid p7, protein F i malo proučavani polipeptid molekulske mase od oko 8 kDa [89].

Posljednja dva manja proteina su sintetizirana kao rezultat čitanja genetske informacije od dodatnih inicijalnih kodona lokaliziranih u području genoma koji kodira protein jezgre [22]. Utvrđeno je da se kod kodona 2 očita malo ispitivanog polipeptida molekularne mase od oko 8 kDa (vidi sliku 2). Raspored HCV proteina u EPR membrani prikazan je na slici. 5.

Peptid p7, također nazvan viroporin HCV, tvori heptamere koji tvore kationski specifični kanal, čiji značaj u biologiji virusa još nije u potpunosti razjašnjen [91]. Pretpostavlja se da sudjeluje u ranim fazama morfogeneze virusa. Nedavno je prikazan učinak peptida p7 na infektivna svojstva HCV-a [92].

Protein F sintetizira pomicanjem okvira čitanja genetskog koda na jedan nukleotidni ostatak (novi kodon inicijacije započinje na 341. nukleotidnom ostatku, vidi sliku 2) i ima

EPR šupljina Sl. 5. Raspored HCV proteina u EPR membrani daje se s malim promjenama iz članka B. Lindenbach i C.M. Riža [90].

konzervativna aminokiselinska sekvenca [93, 94]. Predložena je hipoteza o sudjelovanju ovog proteina u razvoju trajne HCV infekcije [94, 95]. Možda postoji veza između F proteina i izgled masnom jetre kod kroničnog hepatitisa C, je pokazano da su protutijela ovog proteina pronađeno je samo u 10% pacijenata sa kroničnim hepatitisom C, ali ako je njihov razvoj masne jetre detekcije navedenih protutijela povećati tri puta [96], U tijeku je intenzivna studija bioloških funkcija manjih proteina HCV-a.

2.1. Struktura, funkcija i glikoprotein omotača epitopi Nosači E1 proteina (ako 192-383) i E2 (ako 384-746) su fragmenti poliproteina uređena za medularnog (jezgre) proteina (vidi, sl. 1) [97, 98]. Prema elektroforetske analize, molekulska težina E1 proteina 31 kDa, E2 - 70 kDa. Oba proteina pripadaju transmembranskim proteinima i sadrže ugljikohidratne ostatke [97]. Glavne funkcije ovih proteina

- interakciju s receptorima i osiguravanje prodiranja virusnog genoma u citoplazmu stanice.

Biosinteza proteina HCV provodi se na ribosomima povezanim s EPR. Zbog posebne signala translokacijskim većine poliproteina dijela odgovarajući proteini E1 i E2, pada u šupljinu EPR spremnika. Tamo, stanične signalne peptidaze cijepaju te proteine ​​jedna od druge, kao i iz jezgre proteina [62, 97-99]. (Peptidaze djelovanje stranice su prikazano na Sl. 1.) Nakon toga HCV proteina ovojnice ostati vezan za membrane s obzirom na dijelove transmembranskih EPR lokalizirane na COOH-terminalnih regija polipeptidni lanac [99, 100].

Složeni proces prostornog slaganja ili preklapanja proteina E1 i E2 počinje istodobno s prijevodom i završava nakon njega. Glavne faze preklapanja E1 proteina provode se tijekom 1 sata uz pomoć staničnog proteina-chaperon-kaleksina, koji s njom tvori kratkoročni kompleks [101, 102]. Uz sudjelovanje kaleksina iz osam cisteinskih ostataka glikoproteina E1 nastaju četiri disulfidne (S-S) veze. Još jedan sat je stabilizirana prostornu strukturu glikoproteina E1 [103].

Sklapanje proteina E2 je duže (oko 4 sata) nego za protein E1.

Očito je to zbog prisustva cisteinskih ostataka u molekuli 18-20, koja može formirati 9-10 disulfidnih veza i intenzivnu glikozilaciju E2 proteina [104]. Prostorno pakiranje E2 proteina javlja se uz sudjelovanje kaleksina i neidentificiranih chaperona, kao i E1 proteina [103, 104].

Pretpostavlja se da kada se dovrši, u E2 proteinu se formiraju 8-9 disulfidnih veza unutar jednog polipeptida i jedne S-veze između dva E2-E2 polipeptida.

Kompleks proteina ljuske E1-E2 nastaje bez pojavljivanja kovalentnih veza [103-105]. Stehiometrija ovog kompleksa još nije uspostavljena, vjerojatno prevladavajuća komponenta je E2 protein [104]. Uvijek nije protein presavijanje i stvaranje kompleksnih glikoproteina omotača vrši pravilno, pogrešno sastavljeni E1 i E2 proteina, i njihove komplekse se nalazi u spremnicima EPR visoke molekulske agregate [105].

Pod djelovanjem staničnih enzima EPR mreže, proteini E1 i E2 su glikolizirani, stvarajući tako tzv. Kortitozu [97].

Proces glikozilacije počinje istodobno s preklapanjem proteina i završava u vakuolima Golgijevog aparata. Glikozilacija osigurava pravilno prostorno pakiranje, stvaranje specifične antigenske strukture i pojavu biološke aktivnosti u envelopiranim glikoproteinima. Osim toga, nakon glikozilacije, proteini El i E2 mogu se izlučiti iz stanica i bolje su zaštićeni od određenih proteolitičkih enzima stanice.

Oba HCV glikoprotein su transmembranski proteini tipa I, koji karakterizira prisutnost NH2-terminalne ektodomene (tzv proteinskog dijela, izložena od lipidne dvoslojne membrane virusa), i COOH-terminal transmembranske regije. jedan ili dva lanca transmembranski sudjeluje u formiranju E1-E2 i složenih potpornih glikoproteina u lipidne dvoslojne membrane nalaze u virusa E1 i E2 proteina [106-108].

Nedavno su znanstvenici bili posvećeni velikom pažnjom na potragu u obloženim glikoproteinima HCV fuzijskog peptida koji kombinira lipidne dvoslojnice endosoma i virusa. Za HCV predložen je model (koji je djelomično potvrđen) penetracije u stanicu analogno postupku karakterističnom za virus krvarenjača encefalitisa. Prema ovom modelu, nakon kontakta HCV-a s receptorom, formira se kompleks virusa i receptora, koji kao endocitni vakuol penetrira u stanicu (taj se proces naziva i receptorom posredovanom endocitozom). U sljedećoj fazi vakuum endocitoze se stapa s endosomom (citoplazmatskom vezikularnom strukturom) koja je karakterizirana niskim pH vrijednostima. Pod utjecajem kisele okoline endosoma površinski glikoproteini HCV prolaze kroz konformacijske promjene što dovodi do ekspozicije i uvođenja fuzijskog peptida u endosomsku membranu. Ovaj proces pokreće fuziju lipidnog dvosloja virusa i endosomske membrane, koja završava otpuštanjem HCV RNA u citoplazmu stanice.

Do danas nije utvrđeno koji je od dva glikoproteina HCV omotača peptid fuzije. Postoji nekoliko pretpostavki o njegovoj lokalizaciji u E1 proteinu: u regiji s aminokiselinskim ostacima 265-287, ili 272-281, ili 275-293 [107, 109]. Otkrili sličnost u primarnoj strukturi namjeravanog peptida fuzije HCV podtipa 1a (ako 265-287), s istim peptida u neki predstavnici obitelji Flaviviridae (Sl. 6) [109].

U glikoproteinu E1 HCV, identificirana su četiri N-glikozilacijska mjesta: to su ostaci asparagina na položajima 196, 209, 234 i 305 [110-112]. Primjenom metode točkastih mutacija u virusnu RNK kodira E1 protein bio u stanju pokazati da je nestanak mjestima glikozilacije u položaju 209 i 234 ne utječe na formiranje E1-E2 složene [110, 113]. Ostaci oligosaharida

Sl. 6. Primarna struktura fuzijskog peptida u pojedinim članovima obitelji Flaviviridae [109].

FSME - krpeljnog encefalitisa, VZHL - žute groznice virusa, VYAE - japanski encefalitisa, dan - denga virus, Gunwi županija - Cunha virusa, WNV - Virus Zapadnog Nila. HCV naglasio ostataka uobičajene amino kiseline (dva 2 cistein i glicina), ukošen aminokiselinskih ostataka, slične u svojim fizičko-kemijskim svojstvima.

na položajima 196 i 305 potrebni su za pravilno prostorno slaganje E1 proteina, kao i za stvaranje E1-E2 glikoproteinskog kompleksa. Osim toga, pokazalo se da su ugljikohidratni ostaci na položaju 196 i 209 glikoproteina E1 potrebni za održavanje infektivnosti virusa [112].

Na sl. Slika 7 predstavlja hipotetički model prostornog slaganja E1 proteina, izračunatog iz podataka proteomske analize, kompjutorske simulacije i komparativne analize s omotnicom E virusa krvi-borovog encefalitisa.

Oligosaharidni lanci HCV glikoproteina najčešće nastaju s 6-9 manozonskih ostataka povezanih na dva ostatka N-acetilglukozamina [114, 115]. Samo E2 protein detektira više kompleks tipa oligosaharida s manje manozu ostataka, koji djelomično zamjenjuju fukozu i N-acetilglukozaminskih ostataka su u krajnjem položaju oligosaharidne lanca [115].

Glikoprotein E2 detektira 11 glikoziliranja na asparaginskim ostacima na položaju 417 (1) 423 (2) 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) i 645 (11) [111, 112, 115].

Pokazano je da kompleks glikoproteina E1-E2 nije formiran ako

Sl. Shema predložene prostorne strukture El proteina je prikazana u jednostavnoj modifikaciji iz članka R.F. Garry i S. Dash [107].

Legenda: lanac polipeptida u užadi, cilindri - alfa heliksa, strelice - beta struktura, trident - lanci oligosaharida, crni segmenti - disulfidne veze.

ne postoji oligosaharidni lanac na položaju 10 HCV E2 proteina.

Virus gubi infektivnost ako u glikoproteinu E2 nema mjesta ugljikohidrata na položajima 1, 2, 4, 8, 10 i 11 [111]. Nadalje, utvrđeno je da oligosaharidni lanci na položajima 1, 6 i 11 sudjeluju u formiranju epitopa na kojima nastaju antitijela koja neutraliziraju virus [108, 116].

Utvrđeno je da se virusi podtipa la i 3a razlikuju u broju oligosaharidnih lanaca u obloženim proteinima [117]. U glikoproteinu E2, za razliku od E1 proteina, postoje promjene oligosaharidnih ostataka na položajima 423 i 430 [115, 116].

Glikoprotein E2 je teško proučavati fizikalno-kemijskim metodama analize strukture proteina, uglavnom zbog velike količine ugljikohidratnih ostataka. Zbog obilje oligosaharidnih lanaca u glikoproteinu E2 otežava dobivanje kristala proteina za analizu difrakcije rendgenskih zraka i provođenje nuklearne magnetske rezonancije. Stoga, struktura modela sekundarni je napravljen na skraćenom obliku (ektodomene) E2 proteina pomoću računalnih programa koji predviđaju slaganje proteina i komparativnu analizu već proučavali omotačem Flaviviridae obitelji proteina [112]. Je fragment ektodomene glikoproteina E2 (ako 384-660) bez svojim transmembranskim dijelom koji ima mnoge biološke osobine svojstvene pune duljine E2 proteina. To mogu tvoriti kompleks s glikoproteina E1, reagira s monoklonalnim protutijelima na konformacijske epitope E2 proteina, kao i heparan sulfat i određenih staničnih receptora.

U ovom prostornom modelu ektodomana glikoproteina E2, koju je predložio A.T. Yagnik i sur., Otkrili su nizak sadržaj sekundarnih elemenata strukture (oko 37%) i prevagu neorganiziranih mjesta [113]. Elementi sekundarne strukture uglavnom su zastupljeni beta-sklopnim područjima i nekoliko kratkih alfa-spiralnih fragmenata. Ovo je prvi i do sada jedini model glikoproteina E2, koji, očigledno, odražava svoju stvarnu sekundarnu strukturu s nekom aproksimacijom. S obzirom na složenost i dvosmislenost ovog modela, nije jasno zastupljena.

Jedan od glavnih značajki primarne strukture proteina E2 je prisutnost područjima nestabilne aminokiselinskog slijeda koji se naziva i varijabilnu hipervarijabilna [118, 119]. E2 protein koji se nalazi tri mjesta s vrlo visokom frekvencijom aminokiselinskih supstitucija, to hipervarijabilna područja (HWR). Podrijetla HWR lokalizirana na NH2-terminalnom dijelu E2 proteina na mjestu aminokiselinskim ostacima 384-411, HWR drugi - na mjestu s ostacima 474-482 i treći otkriven nedavno, - na mjestu s ostacima 431-466 i 434-450 [120- 122].

Utvrđeno je da prvi HWR, unatoč visokoj frekvenciji supstitucija aminokiselina, uvijek zadržava ukupni pozitivni naboj i stabilni profil hidrofilnosti / hidrofobnosti.

Osim toga, četiri aminokiselinska ostatka na položajima 385, 389, 406 i 409 su vrlo konzervativni, tj. E. oni se vrlo često javljaju u ispitivanim izolatima HCV [123, 124]. Sve razne varijante sekvenci aminokiselina prvog HWR može se smanjiti na konsenzus sekvence, koja se sastoji od najčešće javljaju aminokiselinskih ostataka u svaku od 27 mjesta (384-411) od proteinskog dijela E2 [124, 125]. Biološka uloga prvog HWR je osigurati rane faze HCV apsorpcije na staničnoj površini, a u „kreće cilj” upoznavanje imunološkog sustava, koji se sastoji od stalno mijenja nove antigenske varijante tog proteina E2 području [31, 123, 126].

Postoje dokazi da su drugi i treći HRV uključeni u vezanje HCV na stanične receptore [121, 127].

Zbog varijabilnosti aminokiselina svih tri hipervarijabilne regije glikoproteina E2 nastaju tzv. Elusive varijante virusa, tj. takav, za koji u ovom trenutku nema imunološkog odgovora.

Druga obilježja proteina omotnice E2 - prisutnost polipeptidnih lančanih mjesta koja imaju sličnosti s drugim proteinima.

Taj se fenomen naziva molekularna mimikacija. Tako, dvanaest konzervirani aminokiselinski ostaci (pozicija 660-671) E2 proteina domene oblikovan RePHD identična mjesta fosforilacije u ribosomske faktora inicijacije translacije eIF2a [128]. Zbog sličnosti HCV može zaustaviti antivirusni učinak IFN-alfa. Protein kinaza R nakon aktivacije interferonom-alfa treba fosforilirati eIF2a faktor, koji zauzvrat dovodi do zaustavljanja u prijevodu HCV RNA. No, E2 protein, koristeći ReHDD domenu, reagira s protein kinazom R umjesto faktora eIF2a, te nastavlja biosinteza virusnih proteina [129].

U NH2-terminalnom dijelu E2 proteina, promatrana je molekularna mimikrija s sekcijama lakih i teških lanaca imunoglobulina i receptora T-stanica [118]. Pretpostavlja se da ova strukturalna sličnost može biti uzrok autoimunih poremećaja kod pacijenata zaraženih HCV-om, kao što su krioglobulinemije mješovite tip II i limfom B-stanica ne-Hodgkin.

Kao što je gore spomenuto, obloženi proteini HCV omogućuju interakciju virusa sa staničnim receptorima. Utvrđeno je da su ti ostaci oligosaharida ljuska glikoproteini može imati ključnu ulogu u vezanje virusa sa potencijalnim receptorima kao DC-ZNAK (CD209), L-SIGN (CD209L) i asialoglycoprotein receptora [117, 131, 132]. Prva dva potencijalna proteina receptora tipa C lektin i djeluju kao adhezijskih molekula površine, pružajući kontakt dendritskih stanica, endotelne i T-stanica. L-SIGN receptor na površini endotelnih stanica sinusoide jetre i limfne čvorove, i DC-ZNAK - na površini dendritičkih stanica. Ovi receptori imaju posebnu kalciju ovisni uglevodraspoznayuschy dio (CRD domena prepoznavanje ugljikohidratima), koji se veže na ostatke ugljikohidrata E1 i E2 proteina [117, 131]. Od receptora DC-SIGN i L-ZNAK nije otkrivena u hepatocitima, ne mogu se smatrati kao glavni ciljevi HCV. Ovi receptori hvataju, akumuliraju virus i odašilju ga T stanicama i, eventualno, hepatocitima.

Atiolakloproteinski receptor prisutan je na površini stanice jetre i omogućuje penetraciju glikoproteina koji nemaju ostatnu sijalnu kiselinu na kraju ugljikohidratnih lanaca. S tim receptorom specifično su povezani rekombinantni proteini El i E2, dobiveni ekspresijom odgovarajućih fragmenata HCV RNA u stanicama insekata [132].

Utvrđeno je da rekombinantni E2 protein interagira s drugim potencijalnim virusnim receptorom (ili ko-receptorom), transmembranskim CD81 proteinom [133]. Ovaj receptor je prisutan na površini većine stanica (osim eritro- i trombocita) i sudjeluje u staničnim funkcijama vezanim uz adheziju, mobilnost, metaboličku aktivaciju i transformaciju. CD81 pripada grupi tetrapaninskih proteina i ima karakterističnu strukturu: 4 transmembranska niza i veliku i malu ekstracelularnu petlju. Pokazano je da se velika ekstracelularna petlja CD81 specifično veže na rekombinantni E2 virusni protein [133].

U A.T. Yagnik i koautori u ovoj interakciji uključuju dvije površinske regije proteina E2 s ako 474-494 i 522-551 [112]. Međutim, u kasnijoj studiji, otkriveno je da aminokiselinski ostaci proteina E2 na položajima 420, 527, 530 i 535 stupaju u kontakt s velikom petljom CD81 [134].

Eksperimenti s HPV-om, HPV i rodnog virusa iz seruma bolesnika s CHC potvrdio da CD81 je uključen u proces HCV ulaska u stanicu, ali osim što je potrebno neki drugi protein koji stimulira endocitoze [77, 78, 134]. Uz pomoć CD81 i proteina u stanici će prodrijeti viri koje nisu povezane s lipoproteina, jer potreba kontakt virusnih glikoproteina E2 i CD81. Poznato je da je sadržaj takvih viriona oko 20% (vidi odjeljak 1.2). Na ovaj način stanica može prodrijeti u viriona koji nisu povezani s lipoproteina, budući da je formiranje HCV kompleksa s njima, očito, sprječava kontakt s E2 glikoproteina receptora CD81.

Do 80% HCV je u tijelu zaraženih ljudi u obliku kompleksa s lipoproteinima (to su tzv. Lipovirusne čestice). Ove čestice ulaze u stanice pomoću receptora za LDL (vidi odjeljak 1.2) i još jedan SR-BI receptor (druga oznaka je Cla-1) [126]. SR-BI receptor se nalazi na površini mnogih stanica, ali njegov najviši sadržaj je zabilježen u jetri i steroidogenim tkivima. Glavna funkcija tog receptora je dostaviti stanicama lipide koji čine lipoproteine ​​visoke gustoće. SR-BI receptor pripada transmembranskim proteinima. Ima dvije membranske niti, veliku izvanstaničnu petlju i dvije kratke citoplazmatske regije u NH2- i COOH-terminalnim područjima [135]. Utvrđeno je da prvi HVR rekombinantnog proteina E2, HPV i virus dobiven iz stanične kulture mogu biti povezani s tim receptorom [136-138]. Međutim, HCV iz krvnog seruma osoba s hepatitisom C djeluje zajedno sa SR-BI receptorom bez sudjelovanja prvog HWR i E2 proteina [118].

Za objašnjenje ovog fenomena, sugerira se da virus prodire u stanicu pomoću višekomponentnog receptorskog kompleksa kojeg tvori CD81-SR-BI [77, 138].

Poznato je da negativno nabijeni ugljikohidratni lanci površinskih glikoproteina stanice mogu poslužiti kao središta primarnog vezanja različitih virusa [139]. Zbog ovog procesa, sadržaj virusa na površini stanice raste i vjerojatnost njezine interakcije s specifičnim receptorom raste. Eksperimenti vezanja HCV na hepatocitne stanične kulture pokazali su da se taj proces može blokirati heparinom i suraminom koji ima negativni naboj [140]. Dio koji se specifično veže heparin, vjerojatno lokaliziran u prvom HWR glikoproteina E2 i / ili u području u kojem ako 559-614, gdje otkriva visok sadržaj pozitivno nabijenih aminokiselinskih ostataka [112, 126]. Međutim, u pokusima s pseudovirusnim česticama HCV, nije zabilježena interakcija E2 proteina s heparinom [141]. Očito, uključivanje glukozaminoglikana u složeni proces prodiranja HCV u stanicu zahtijeva daljnje proučavanje.

Kao što pokazuju studije provedene u posljednjem desetljeću, HCV ima široki stanični tropizam. Virus replicira u hepatocitima, periferne mononuklearne stanice i ascitesa, limfe i monocita [142-144], dendritičke stanice, 145 [52], hematopoetskih progenitor stanica [146], [38] mikroglija kardiomiocitima [147], [kroz intestinalni epitel 148], osteoblasta [149] i folikula B-stanica limfnih čvorova [150]. Ovo je vjerojatno razlog zašto postoji više od jednog receptora za HCV.

Mnogo je pažnje u istraživanju proteina ljuske dana analizi njihovih antigenskih i imunogenih svojstava, budući da je to nužno za razvoj cjepiva protiv hepatitisa C.

Utvrđeno je da glikoproteini E1 i E2 imaju visoku imunogenost. Tako, kada imuniziraju čimpanze s proteinima rekombinantne ovojnice, dobivena su specifična protutijela na te proteine ​​s titrom 1/819200 [15]. Međutim, u prirodnom tijeku akutnog i kroničnog hepatitisa C kod ljudi, humoralni odgovor na virusne glikoproteine ​​E1 i E2 mnogo je slabiji.

Objavljeni podaci o otkrivanju linearnih B-epitopa u proteinima E1 i E2 prikazani su u Tablici. 1. Za analizu tih epitopa korišteni su postupci skeniranja peptida, prikaza faga i monoklonskih protutijela. Metoda skeniranja peptida temelji se na upotrebi sintetičkih peptida koji pokrivaju cijelu aminokiselinsku sekvencu proteina i određivanju njihove imunoreaktivnosti, tj. E. sposobnost interakcije s protutijelima pacijenata s hepatitisom C. Prvi put je takva studija proteina omotnice HCV provedena u korporaciji Chiron (USA) [151]. Kasnije, 1997. Godine, objavljeni su rezultati peptidnog skeniranja glikoproteina E1 i E2, u kojima

Upotrijebljeni su jedinstveni serumi žena zaraženih prije 17 godina s jednim HCV izolatom, koji je kontaminiran lijekom s anti-D imunoglobulinom [152].

Kroz napore tri skupine istraživača, pod vodstvom J. Dubuisson, M. Flint i A.H. Patel, banka mišji i ljudska monoklonska antitijela je uspostavljen (ica) HCV kojima mogu identificirati neke linearne i konformacijske epitope B-ljuska E1 i E2 proteina [79, 109, 153-155].

Na sl. Slika 8 prikazuje raspored B-epitopa u glikoproteinu E2, detektiran uz pomoć MCA.

Od posebnog interesa su epitopi B, vezanje antitijela na koja dovodi do neutralizacije virusa. Takav virus neutralizirajući epitop otkriven je u prvom HBP proteina E2 [156].

Drugi epitop, koji neutralizira vezanje virusa na stanicu (takozvani NOB epitop iz "neutralizacije vezanja"),

Sl. 8. Položaj B-epitopa detektiranih od strane MCA u proteinu E2.

Shema je dana s malim promjenama u publikacijama R.F. Clayton i sur. 79 i A.M. Owsianka et al. [155].

Na vrhu pravokutnika MKA prepoznaje ektodomain E2 proteina, E2 proteina pune duljine u kombinaciji s E1 i E2 proteinom u HPV kompoziciji. Ispod su prikazani MKA, interakciji s ektodomenom E2 proteina ili s punom dužinom proteina E2 u kompleksu s E1 proteinom. U crnoj, MCA inhibirajući vezanje na CD81 ektodomanu E2, E2 proteina pune duljine u kombinaciji s E1 i HPV je istaknuta u crnoj boji. Siva boja obilježena je MCA inhibicijom vezanja HPV-a na CD81.

konformacija struktura u formiranju koji po pretpostavci, jedna grupa autora uključeni aminokiselinske ostatke 406-644 u proteinskoj sekvenci E2 [76, 156, 157], i u skladu s drugom - ostaci sekvence 414-443 i 490-519 [158 ].

Pokazalo se da još jedan složeniji konformacijski B-epitop koji ne posjeduje viralizirajuća svojstva može se formirati aminokiselinskih ostataka iz 3 mjesta:

297-306 protein E1, 480-494 i 613-621 protein E2 [167].

U glikoproteinima E1 i E2 identificirani su epitopi T helper (CD4 +) i T-ubojica (CD8 +) (Tablica 2).

Trenutno se nastavljaju studije lokalizacije i strukture B- i T-epitopa proteina omotnice HCV. Informacije o ovoj temi nalaze se na web stranici Nacionalnog laboratorija Los Alamos (SAD): http://hcv.lanl.gov.

* Ako su 20-člane peptidi korišteni za određivanje epitopa, tada ne postoji točna lokalizacija.

2.2. Nukleokapsidni antigen Shema lokalizacije nukleokapsidnog proteina (sinonima: jezgre, jezgre) u poliproteinu prikazana je na Sl. 1. Ovaj protein sudjeluje u ključnim stadijima morfogeneze virusa: stvara virusne nukleokapsid pokrenuti HCV RNA pakiranje i montaža virusne ovojnice [74, 178, 179].

Vjerojatno, cor protein ima druge biološke funkcije. Tako, u različitim eksperimentima modela pokazuju da međudjeluje s regulatornim proteinima i pojedinih strukturnih elemenata stanica: Protein p53 [179], što je prvi receptor za faktor nekroze tumora [180] receptor limfotoksin beta [181], transkripcijski faktor LZIP [182 ] STAT3 protein (koji povećava transkripciju signal) [183], heterogena nuklearni ribonukleoproteinskog K [184] helikaze DDX3 [185] citoplazma triglicerida vezikule [186], 187 [mitohondrijima] citokeratin stanice [188]. Smatra se da korbelok sudjeluje u razvoju i masnom hepatocarcinogenesis kod pacijenata sa kroničnim hepatitisom C, [179, 186].

Nukleokapsidni protein se najprije formira među svim virusnim bjelančevinama u procesu biosinteze, odcjepljen je od poliproteina putem stanica signalnih peptidaza [190]. U konačnoj proteolitičkoj hidrolizi jezgre proteina, novootkrivena peptidaza peptidaza SPP, koja uključuje neobična intramembranska cijepanja, sudjeluje [189, 190].

Obrada nukleokapsidnog proteina prati prijelaz njenog oblika p23 (193 ako) na p21 (173 ako) i fosforilaciju s OH skupinama serinskih ostataka [189]. Razdijeljeno mjesto (174-193 ako) nosi signal translokacije, kroz koji NH2-terminalni dio E1 proteina ulazi u ESR cisterne [191].

Zreli oblik cor proteina ima dobro definiranu amfipatsku strukturu: hidrofilnu NH2-terminalnu regiju i hidrofobnu COOH-terminalnu regiju [192]. Prema tome, domena D1 (hidrofilna) i domena D2 (hidrofobna) izolirana su u proteinu. Slična struktura karakteristična je za nukleokapsidne proteine ​​obitelji Flaviviridae. Ponekad je treća domenica (središnja), koja ima neuobičajeno visoki udio triptofanskih ostataka, također izolirana u korelarnom (46).

U hidrofilnoj domeni Dl postoji mjesto vezanja RNK, glavni konzervirani epitopi B i fragment koji je odgovoran za formiranje dimera jezgrenog proteina [192]. Funkcionalno aktivni oblik nukleokapsidnog proteina je stvoren od dva polipeptidna lanca, tj. cor protein je dimer u kojem dominira alfa-spiralna strukturalna organizacija. Hidrofobna domena D2, koji osigurava vezu s lipidne membrane i citoplazme inkluzija nalaze amfipatsku a-uzvojnicu s izraženim hidrofilnih i hidrofobnih površina.

Od svih virusnih bjelančevina, kor- protein ima najveći sadržaj konzervativnih zona u primarnoj strukturi [193].

Mjesto glavnih funkcionalno važnih područja nukleokapsidnog proteina je prikazano na slici. 9. Na ovim važna područja treba naglasiti područje armature proteina s ostacima 72-91 aminokiselinskih koji surađuje s omotanih proteina E1 [194] Dio s ostacima 69-104 potrebne za očuvanje infektivnost u HCV [195] zona 65 ostataka -72, što je vjerojatno u kontakt s peptidnom P7 u ranim fazama morfogeneze virusa [195].

Prema elektronskoj mikroskopiji, jezgra proteina je lokalizirana u stanici na EPR membranama, na lipidnim vezikulama u citoplazmi, kao iu jezgri. Prijenos proteina u jezgru stanice provodi se celularnim transportnim proteinom bisparnin NLS, koji u ovom slučaju interakcionira s posebnim signalnim slijedom u jezgri proteina [196].

Istraživanje nucleocapsids iz rodnog serumu i njihovih analoga proizvedene pomoću replikacije HCV-otkrila je da, bez obzira na njihovo podrijetlo imaju koeficijent sedimentacije oko 100 S, usponi lagane gustoće u

Sl. 9. Raspored glavnih funkcionalno važnih mjesta u nukleokapsidnom proteinu daje se s malim promjenama iz članka C.L. Murray et al. [195].

U nastavku, brojevi označavaju broj aminokiselinskih ostataka.

cezija 1.28 g / ml i promjer od 33-46 nm, određeno uz pomoć transmisijskog mikroskopa [197, 198]. Prema elektronskoj mikroskopskoj analizi uzoraka biopsije jetre osoba s CHC-om, veličina nukleokapsida virusa u tom slučaju intenzivnije varira od 28 do 48 nm [198].

Jezgra bjelančevina je jedan od najimunogenijih antigena HCV-a. Podaci o njegovim B- i T-epitopima dani su u tablici. 3 i 4.

Treba napomenuti da se epitope B nukleokapsidnog proteina koncentriraju uglavnom u hidrofilnoj domeni iu konzervativnim regijama.

2.3. Karakterizacija NS2 proteina NS2 protein se odnosi na nestruktivne HCV proteine, nalazi se u poliproteinu nakon peptida p7 (vidi sliku 1). NS2 protein ima molekulsku masu od oko 23 kDa, ne sadrži ugljikohidrate i ostaje vezan za EPR membrane [206, 207]. Točna proteinska topografija u membrani nije uspostavljena, pretpostavlja se da tvori 3 transmembranska niza (vidi sliku 5) [90]. Protein NS2 je slabo topljiv, pa je teško proučavati.

Glavna biološka funkcija NS2 proteina jest cijepanje HCV serin proteaze. Za njegovu primjenu, NS2 protein stvara kompleks s poliprotein mjestom koji odgovara NS3 proteinu [206, 208].

"Kazan (Privolzhsky) Savezno sveučilište. NI Lobachevsky Novi unosi knjiga u Fond narodne banke od 27. lipnja do 4. rujna 2015. Kazanovi zapisi se izrađuju u RUSMARC formatu koristeći "Ruslan" ALIS. Materijal je sustavno uređen prema granama znanja, unutar dijelova - u abecedi autora i naslova. Sa naslovnicom, sažetak i sadržaj publikacije mogu se naći u elektroničkom katalogu Nepoznat naslov Materijali All-Russian konferencije p. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova za visoko stručno osposobljavanje” Tyumen State University „Instituta za biologiju, Odjel za ekologiju i genetiku, NA EKOLOŠKA PARASITOLOGIJA Obrazovni i metodički kompleks. Program rada za studente u smjeru pripreme 06.03.01 biologije (razina preddiplomski), profili za obuku „Bio-ekologija”, oblik trening s punim radnim vremenom Tyumen države. "

„Ministarstvo prosvjete i znanosti države Obrazovne ustanove visokog stručnog obrazovanja Tyumen State University Instituta za biologiju, Odjel za zoologiju i Evolucijska životinja Ekologija AV Tolstikov, V.A. Stolbov ENTOMOLOGIJA Obrazovni i metodički kompleks. Radni program za studente iz područja izobrazbe 35.03.10 Pejzažna arhitektura, profil izrade Uzgoj biljaka i rasadnika, oblik obrazovanja je redoviti Tyumen. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova za visoko stručno osposobljavanje” Tyumen State University „Instituta za biologiju, Odjel za ljudske anatomije i fiziologije te životinje Lepunova ON ANATOMIJA I LJUDSKA MORFOLOGIJA Obrazovni i metodički kompleks. Program rada za studente 06.03.01 smjer "Biology", sekcije: botanike, zoologije, fiziologije, genetike, bioecology, biokemije; oblik osposobljavanja. "

„Općinski” Bezhanitsy četvrt „općinskih proračuna opće obrazovne ustanove” Bezhanitsky GIMNAZIJA „Dogovorili potvrditi metodički vijeća №1 glavni Zapisnik 08.27.2014 _ / SK Mikheev Red broj 71 datiran 29.08.201 programu rada subjekti biologije osnovnog općeg obrazovanja, 6. razreda na 2014-2015 akademsku godinu Master Irina Vasilyeva Bezhanitsy 2014 1.Poyasnitelnaya note radi na biologije susreće Federalna. "

„Ministarstvo poljoprivrede Ruske Federacije savezne države Obrazovne ustanove visokog stručnog obrazovanja” Kuban Država Agrarni Sveučilišta »Zavod za mikrobiologiju, virologiju i smjernice epizootology o disciplini: B1.V.DV.1" Veterinarski virologiju„za samoučenje poslijediplomskom studiju u smjeru 2 pripravak 36.06.01 Veterinarska i zootehnička orijentacija: "Veterinarska mikrobiologija, virologija. "

„Ministarstvo prosvjete i nauke Kaluga State regija proračuna institucija dodatne edukacije Kaluga regija” Regionalna ekološka i biološka centra „opće srednje opće razvojni program” Špajza prirode „za učenike osnovnoškolske dobi (7-11 godina) Razdoblje provedbe -2 godine sastavio nastavnika dodatno obrazovanje : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kaluga Sadržaj Objašnjenje Relevantnost programa: Ciljevi i ciljevi programa. "

«« TEORIJSKA MEHANIKA »Metodološke upute za praktične studije na 2. semestru biomedicinskog fakulteta u I. semestru akademske godine 2012.-2013. specijalnost 201000 - biotehnički sustavi i tehnologije 1. uvodna lekcija. Jednadžbe gibanja i putanja jednadžbe tochki.Reshite sljedeće zadaće: 1. Prema jednadžbi gibanja točke putanje dobiva se izraz za koordinatni oblik i odabir smjera na slici 1) x = 3t -5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Stranica 1 Ispis web stranica Fakulteta za biologiju tiskani ili povratak Shalapenok Elena Semenovna Odjel za personal zoologiju, biološki fakultet BSU. LJUDI Odjel za zoologiju nastavnog osoblja nastave i potporu znanstveno osoblje doktorskih studenata i studenti Shalapenok Elena Semenovna (1931-2010) izvanredni profesor, Odjel za zoologiju, PhD, izvanredni profesor Diplomirao bjeloruski. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije Penza State University Odobrio: rektor _ AD Gulyakov „” _ 201, registarski broj intrahigh osnovnih stručnih obrazovnih programa visokog obrazovanja Smjer priprema 020 400 biologiju profil Bioecology treninga kvalifikacije (stupanj) diplomirao Bachelor načinu studiranja s punim radnim vremenom Penza 2013. SADRŽAJ 1. OPĆE. 1.1 Glavni stručni obrazovni program visokog obrazovanja. "

„Sažetak na program rada na temu” Biology „na 2014-2015 akademskoj godini Grade 9 Svrha programa rada - stvaranje uvjeta za planiranje, organizaciju i upravljanje obrazovnim procesom na temu biologije, pogledajte” Osnove opće biologije”.Rabochaya Program uključuje sljedeće dijelove: Odjeljak 1. Obrazloženje u kojem se opći ciljevi općeg obrazovanja navode u svjetlu specifičnosti predmeta. Radni program temelji se na približnom osnovnom programu. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova za visoko stručno osposobljavanje” Tyumen State University „Instituta za biologiju, Odjel za ekologiju i genetiku, NA Zhigileva OSNOVE EKOLOGIJE Obrazovni i metodički kompleks. Radni program za studente iz područja izobrazbe 42.03.02 Novinarstvo (prvostupnik), profil treninga "Seal", "Televizijsko novinarstvo", "Convergentno novinarstvo". "

„Ministarstvo prosvjete i nauke, savezna država učilište visokog stručnog obrazovanja Tyumen State University Instituta za biologiju Zavod za botaniku, Biotehnologija i krajobrazne arhitekture Marina V. Semenova bioekoloških baze sastavu s biljkama nastavnih materijala. Radni program za studente smjera 35.03.10 Profil krajobrazne arhitekture Krajolik i krajolik. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova visokog stručnog obrazovanja Tyumen State University Instituta za biologiju, Odjel za botaniku, Biotehnologija i krajobrazne arhitekture Belozerova A.A.MORFOBIOLOGICHESKIE obilježja dekorativne biljke nastavnih materijala. Radni program za studente u smjeru 35.03.10. Pejzažna arhitektura unutarnjeg oblika profila obuke Dekorativna biljka raste i. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova za visoko stručno osposobljavanje” Tyumen State University „Institut za Odjel za zoologiju i evolucijsku ekologiju životinja OA Aleshina OSNOVNA OBRAZOVNA SVEBIOOLOŠKA PRAKSA: ZOOLOGIJA NEVERTEBRIRANIH Obrazovni i metodički kompleks. Radni program za studente iz područja izobrazbe 06.03.01 - "Biologija" (akademski stupanj), profil treninga. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova za visoko stručno osposobljavanje” Tyumen State University „Instituta za biologiju, Odjel za ljudske anatomije i fiziologije te životinje Lepunova ON Molekularna biologija VIRUSA ILI DRUGIH intracelularni paraziti nastavnih materijala. Radni program za studente 06.03.01 smjerovi "Biologija", profil: biokemija; oblik obrazovanja - s punim radnim vremenom Tyumen. "

„Savezna Biomedical Agencija za državne organizacije zdravlje” sibirskom Medical Center Savezne medicinskih i bioloških agenciji „(FGBUZ SOMTS FMBA Rusije) za standarde i tehnologiju medicinskih sestara smjernice stručnoj djelatnosti medicinske sestre proceduralne Novosibirsk 2013 Savezna Biomedicinski agencije FEDERALNA DRŽAVNA PRORAČUNSKA INSTITUCIJA ZDRAVLJA. "

„Ministarstvo obrazovanja i znanosti Ruske Federacije savezna država obrazovna ustanova visokog stručnog obrazovanja Tyumen State University Instituta za biologiju, Odjel za botaniku, Biotehnologija i krajobrazne arhitekture SP Arefiev TAXATION Obrazovni i metodički kompleks. Program rada za studente smjera 35.03.10 krajobrazne arhitekture s punim radnim vremenom profila obuke ukrasi i vrtić Tyumen State University. "

Far Eastern State University Isayev SYNERGETICS biologija Uvodna Udžbenik Vladivostok radna knjiga sastavlja se na temelju kolegija za studente Cell Biology Department of State University Dalekog istoka, pročitao je autor već nekoliko godina, te je prilagođen za biologe, pojednostavljeno i ilustrirati osnovne ideje nelinearne znanosti (često se naziva sinergetika), uključujući teoriju bifurkacije i. "

„Općinski proračunski opće obrazovne ustanove” Prosječni Opće obrazovanje škola №18 „smatra na sastanku” složio „” Odobreno „SHMO Prirodne znanosti zamjenik direktora, direktora MBOU«Škola №18»Glava TI Antonovich na UVR LA Ishutina V.N. Nikitin protokol №1 za „23” u svibnju 2014 PROGRAM akademskih predmeta BIOLOGIJA KLASA 9. svibnja (GEF) Abakan OBJAŠNJENJE Ova biologija Program se temelji na Saveznom državnom obrazovnom standardu. "