Laboratorijska dijagnostika virusnog hepatitisa C, B, A

Share Tweet Pin it

Virusni hepatitis je infektivna upalna bolest jetre, najčešća patologija među ostalim jetrenim lezijama. Ovisno o vrsti virusnog hepatitisa, dijagnoza bolesti se temelji na kliničkim simptomima i laboratorijskim testovima. Pažljivo istražena povijest bolesti i epidemiološka povijest igraju važnu ulogu. Postoji nekoliko oblika virusnog hepatitisa, uzimajući u obzir različite patogene, kliničke manifestacije, tijek i ozbiljnost bolesti. Laboratorijska dijagnoza virusnog hepatitisa u mnogim je slučajevima jedina metoda koja vam omogućuje da točno utvrdite bolest. Trenutno identificirati i proučavao nekoliko vrsta virusa s hepatotropni akcije (A, B, C, D, E), koji uzrokuju sličnu kliničku sliku. Zbog slabe i teške dijagnoze hepatitisa C smatra se da je najteža od svih poznatih vrsta.

Virusni hepatitis A

Ima fekalno-oralni put prijenosa, što ga čini široj infekciji. Dijagnoza hepatitisa A nije jako teško. Razdoblje inkubacije je relativno kratko - od 7 do 50 dana; karakterizira oštar početak: postoji visoka temperatura, izraziti astenički sindrom, bol u svim zglobovima - klinički sliči gripi. Trajanje bolesti - 1 mjesec. Blaga tijek bolesti ponekad ne zahtijeva posebne terapijske mjere, postoje slučajevi samoizlječenja.

Virusni hepatitis B

Za subkliničke laboratorijskoj dijagnostici hepatitisa B je jedina metoda točan potvrditi dijagnozu - definirano antigen u krvi i antitijela za protein od patogena, kao i HBV DNA. Putevi prijenosa:

  • parenteralno - kroz krv;
  • seksualno - kroz spermu;
  • vertikalna: od majke do fetusa (kroz majčino mlijeko virus se ne prenosi djetetu).

Infekcija se proguta kada se koristi prljave igle (jedna igla ovisnici koriste) putem alata (u slučaju kirurških intervencija, tetoviranje, akupunktura, piercing uho, manikura, pedikura), u transfuzije krvi. Latentno razdoblje traje od 2 mjeseca do 6 mjeseci. Simptomi nalikuju početku virusnog hepatitisa A: razvija se sindrom sličan gripi, postoji bol u cijelom tijelu i zglobovima, teška slabost i slabost. Ponekad su osip. Prognoza za akutni hepatitis je relativno povoljna: u 80% slučajeva dolazi do oporavka. Podklinički oblik bolesti često stječe kronični tijek - rijetko je moguće postići potpuni lijek u takvim slučajevima.

Istovremeno u mnogim slučajevima, bolest se određuje satelita hepatitisa B - D virusa (delta), što uzrokuje virusnog hepatitisa D i otežavajuće za osnovne bolesti.

Virusni hepatitis E na kliničke simptome sliči HAV-u, ali ima postupan početak i mnogo je opasniji za trudnice.

Manifestacije HCV

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C (HCV) u laboratoriju je osobito važna jer utječe na oko 3% svjetske populacije. Svake se godine povećava učestalost - to je povezano sa stalnim porastom ovisnosti o drogama u svijetu.

Pažnja molim te! Virusni hepatitis C jedan je od najopasnijih i najtežih među poznatim oblicima infektivnog oštećenja jetre. To se zove „nježan ubojica”, jer - za subclinical za dugo vremena, a onda brzo ishod u ciroze koja može biti fatalna. Kombinacija HCV-a s drugim oblicima infektivnog hepatitisa značajno povećava tijek bolesti i ubrzava kobni ishod.

Akutni HCV je asimptomatski pa se rijetko dijagnosticira. Ako je moguće identificirati bolest u ovoj fazi, a pravovremenim početkom liječenja u 20%, može doći do oporavka.

HCV se najčešće promatra u kroničnom obliku, u kasnim fazama. Kronizacija procesa događa se u 50% slučajeva.

Uz asimptomatski prijenos virusa C, jetrene stanice postupno oštećuju, razvija se fibroza. U budućnosti, ako ne postoji pravodobno liječenje, povećava se rizik od ciroze ili raka jetre.

Dijagnoza virusnog hepatitisa u bilo kojem obliku temelji se na definiciji:

  • patogen i njegova replikacija;
  • markeri infekcije.

Dijagnostičke metode uključuju imunokemijske i molekularno-biološke reakcije koje otkrivaju:

  • antigeni patogena;
  • antitijela na virus;
  • nukleinske kiseline.

Struktura C virusa

Virus C (BC) ima jednolančanu RNA u svom genomu. On je jedini među uzročnicima virusnog hepatitisa koji ima takvu strukturu. I nosilac i pacijent ne mogu pogoditi virus koji imaju. Stoga, za otkrivanje patologije s nejasnom dijagnozom, potrebno je provesti niz studija i dijagnostičkih testova.

Genom virusa C (njegova RNA) sastoji se od 10.000 nukleotidnih baza. Takva visoka heterogenost određuje karakteristike HCV-a. Kad su proučavali nukleotide RNA, otkrivene su značajne razlike u njihovoj strukturi. Uzimajući u obzir otkrivene strukturne značajke, stvorena je klasifikacija HCV, prema kojoj:

  • mogućnosti (postoji 6 - 9 od njih);
  • podtipovi;
  • genotipova.

Neki od njih nalaze se u svim zemljama bez iznimke, neki - lokalno u određenim regijama. Nakon penetracije u tijelo virus C se umetne u lanac nukleotida molekule RNA. Neprekidno mu mutira (mutira), a osoba može postati nositelj 50 podtipova istog genotipa virusa. Imunološki sustav ne prati brzu mutaciju: antitijela se proizvode za jednu skupinu virusa, bolest postaje kronična.

Definicija C virusa

Dijagnoza HCV-a postala je stvarnost s pojavom molekularne biologije. To se objašnjava ekstremno niskim sadržajem virusa u krvi, koji ne dopušta izoliranje antigena ranijim metodama.

Kad se sumnja na HCV, laboratorijska dijagnoza ima za cilj odrediti:

  • antitijela (IgG, IgM) pomoću ELISA (enzimski imunotest);
  • RNA virus korištenjem PCR (lančana reakcija polimeraze).

Pažnja molim te! Serološki markeri hepatitisa C su RNA-HCV i protutijela koja nastaju u tijelu.

PCR - definicija virusa hepatitisa C

RNK - HCV pripada ranih markera HCV: njegova pojava u krvi javlja se za 10 - 12 dana nakon infekcije, odnosno znatno ranije povećanje aminotransferaza (AST, ALT, GGT)... Otkrivanje RNA-HCV ukazuje na aktivnu replikaciju (množenje) virusa. To je "zlatni standard" dijagnoze, jer pojašnjava i potvrđuje dijagnozu čak iu vrijeme kada su simptomi bolesti gotovo prazni. PCR bi trebao biti izveden za praćenje rezultata ELISA. Obavlja se u kvalitativnim i kvantitativnim varijantama.

Virusna opterećenja smatraju se visokom za PCR> 800 tisuća IU / ml ili 2 milijuna kopija / ml; niska - s PCR-om

Pažnja molim te! PCR nije samo kvalitativna analiza (detekcija RNA virusa), već određuje i broj kopija RNA u 1 ml krvi. Ovo igra važnu ulogu u imenovanju učinkovitog liječenja i procjene uspjeha u terapiji. Ako se RNA virusa C detektira u krvnoj plazmi, to ukazuje na akutnu fazu bolesti. Opseg oštećenja jetre i širenje patoloških promjena - fibroza i upala - otkrivena je nakon biopsije. Ova metoda je najsigurnija i pouzdanija u dijagnozi. Manipulacija je potpuno bezopasna za pacijenta i traje nekoliko sekundi.

ELISA - otkrivanje antitijela na virus

Ljudski imunološki sustav proizvodi protutijela (IgG, IgM) protiv patogena kad uđe bilo koji zarazni agens. Formirani imunoglobulini stvaraju snažan kompleks s inozemnim proteinom (s antigenom virusa), čiji kvantitativni i kvalitativni parametri određuju se tijekom ELISA. Odnosi se na neizravnu metodu ispitivanja: tijekom istrage virusi se ne otkrivaju, ali imunološki odgovor organizma na zarazni agens koji je ušao pojavio. ELISA se izvodi za ranu dijagnozu, praćenje procesa u dinamici.

Protutijela su otkrivena u 80% zaraženih samo 5 do 6 tjedana nakon pojave bolesti, u 90% - 12 tjedana. Ponekad ti testovi daju lažne pozitivne odgovore. Za takve slučajeve postoje posebni testovi - spektar protutijela proteina određen je metodom rekombinantnog imunoblotiranja.

Da bi se postigli pouzdani rezultati, PCR i ELISA testovi se izvode dvaput u određenom vremenskom razdoblju. Tipično, razdoblje je 6 mjeseci.

Taktike promatranja

Kako bi se razjasnila aktivnost procesa u jetri, kako bi se utvrdila taktika liječenja, utvrđeni su testovi na jetri:

  • transaminaze u krvi (ALT, AST, GGT);
  • ukupni bilirubin i njegove frakcije;
  • alkalna fosfataza (AFP);
  • ukupni protein s frakcijama.

Ovisno o rezultatima laboratorijskih istraživanja koriste se različite taktike upravljanja pacijentima:

  • S normalnim brojkama pacijent je pod nadzorom liječnika. Uz promjene u zdravstvu, testovi se ponavljaju.
  • Uz povećanje od 2 ili više puta, ELISA se provodi na anti-HCV.
  • Ako je enzimski imunoanalizam pozitivan, koristi se lančana reakcija PCR-polimeraze koja rezultira odabirom antivirusne terapije.
  • Pri povišenom 2 puta ili više indikatora uzoraka jetre, ali negativno ELISA ili povećanjem jetrene uzoraka 2-struki, i pozitivne IFA PCR dinamičnog praćenje nastavlja inspekciju i kontrolu krvnih biokemijskih testova 1 svaka 3 mjeseca.
  • Kod visokih biokemijskih parametara, pozitivni rezultati ELISA i PCR provode se kliničkom dijagnozom, odabire se antivirusni lijek i kontrolira se liječenje.

Istraživanje biokemijskih pokazatelja

Na temelju rezultata biokemijskog testa krvi procjenjuje se razina aminotransferaza.

  • ALT - alanin aminotransferaza - dio je hepatocita. Čak i lagani višak norme ukazuje na postojeći hepatitis (uključujući virusni) u ranim fazama.
  • AST - aspartat aminotransferaza: ako njegova razina premašuje ALT, to je pokazatelj početne fibroze (proliferacija vezivnog tkiva).

Visoke vrijednosti ALT i AST u krvi posljedica su nekroze stanica jetre. Oni su indirektni pokazatelj aktivnosti upalnog procesa. Ako razina ALT prelazi 3 puta norma, govorimo o minimalnom aktivnošću, 3 - 10 puta -umerennaya upalna aktivnost proces, više od 10 puta - hepatitis s visokom aktivnošću.

Razina AST se mijenja i s drugim patologijama, ALT se smatra specifičnijim za bolesti jetre.

  • Povećanje razine ukupnog i izravnog bilirubina javlja se s povećanim obrazovanjem ili odgađanjem izlučivanja iz tijela. Virusni hepatitis javlja se s kršenjem izlučivanja bilirubina. Staklenični i scleri promatrani su na razinama bilirubina iznad 30-35 mmol / 1, uz daljnje nakupljanje žute kože. U kroničnom tijeku to se ne događa.
  • Povišeni alkalnu fosfatazu (AP), gammaglyutamintransferazy (GGT), kolesterola i žučne kiseline, karakterističan za sindrom. Ali bolest jetre nije jedini razlog njihovog povećanja.
  • Porast albumina povezan je s oštećenom funkcijom jetre.

Klinička dijagnoza

U korist virusnog hepatitisa C ukazuje se klinička manifestacija. Kronična naravno naznačen oskudne simptoma: poremećena slabost i povećava umor krajem dana, smanjena tolerancija na redovito fizičke aktivnosti. U normalnim biokemijskim analizama, takve kliničke manifestacije rijetko se povezuju s virusnim hepatitisom. Nesavijeno klinička slika se pojavljuje u kasnijim fazama: tamo teleangiektazija i jetre „Stars”, jetre - i splenomegalija, žutica bjeloočnice, kožu i sluznicu usta, svrbež kože (s vrlo visokom razinom bilirubina u krvi), tamna mokraća, neobojene izmet, krvarenje, gubitak težine, palmine jetre.

Pažnja molim te! U prisutnosti kroničan HCV mogu oblikovati s velikom vjerojatnošću razvije rak jetre, stoga je potrebno u određenim vremenskim razmacima (1, svakih šest mjeseci) istražiti krv za tumorski markeri i alfa - fetoprotein.

Ultrazvučni pregled

Osim laboratorijskih metoda, postoje dodatne metode anketiranja koje igraju važnu ulogu u dijagnozi HCV-a. To uključuje ultrazvučne preglede. Ovom metodom ispitivanja proučava se stanje trbušnih organa. Određuje veličinu, gustoće, strukture, položaj tijela, odrediti trodimenzionalno oblikovanje, račun, kršenje odljeva žuči, veličina portala i slezene vene. Splenomegalija, hepatomegalija, portalna vena širenje pokazuju prijelazni hepatitis do ciroze. Daljnje ispitivanje, serodiagnoza je neophodna za isključenje ili potvrđivanje virusnog hepatitisa C.

Fibroscanning i ostali testovi

Metoda neizravne dijagnoze, ekvivalent biopsije - fibroskaninga (elastometrija): neinvazivna, sigurna, može se ponoviti za kontrolu terapije. Pokazatelji za provedbu elastometrije sumnjaju se na patološke procese u jetri, uključujući - prisutnost virusa.

Postoje i mnogi dijagnostički testovi koji su alternativa biopsiji jetre. Testovi omogućuju određivanje točne morfološke slike oštećenog organa, postojećih fibroza, steatosisa, nekroze ili upale. Neki od njih:

  • FibroTest - sa svojom pomoći, sveobuhvatnu analizu 5 biokemijskih pokazatelja i pravodobnu dijagnozu stanja fibroze.
  • ActiTest - određuje 6 biokemijskih pokazatelja i omogućuje dijagnosticiranje upalnog procesa nekroze u jetri.

Pažnja molim te! Prognoza HCV ovisi o pravovremenoj dijagnozi, o stupnju infekcije i o pacijentovoj želji za izliječenjem. Suvremene terapijske metode uz uporabu antivirusnih lijekova omogućuju liječenje bolesti ili postizanje dugoročne remisije, produljenje života i poboljšanje njegove kvalitete kod zaražene osobe ili nosača. Virusni hepatitis C, unatoč teškoj dijagnozi i produženom liječenju, nije presuda. Potrebno se obratiti liječniku na vrijeme kako biste dobili kvalitetnu medicinsku njegu i pažljivo ispunili sve njegove svrhe.

Dijagnoza hepatitisa B i hepatitisa C. Ispitivanje

Hepatitis je čest naziv upalnih procesa jetre. U većini slučajeva, hepatitis virusi uzrokuju hepatitis B i hepatitis C mogu postati zaražene pri obavljanju piercing, tetoviranje, manikura, putem intravenskog korištenja droga. U zubaru postoji visoki rizik zaraze, s kirurškim operacijama, transfuzija krvi. Hepatitis B se prenosi seksualno i od majke do djeteta tijekom trudnoće (rizik je oko 30-40%). Za hepatitis C, takav prijenosni put je malo važan.

Simptomi virusnog hepatitisa B i hepatitisa C su slični.

Klinička slika razlikuje se u akutnim i kroničnim oblicima.

Akutni virusni hepatitis je upalni proces u jetrenom tkivu uzrokovan nedavnom infekcijom (manje od 6 mjeseci). Kronični virusni hepatitis je upala jetre-distrofična lezija s blagom fibrozom koja traje duže od 6 mjeseci.

Simptomatologija virusnog hepatitisa uzrokuje opijanje zbog kršenja detoksifikacijske funkcije jetre i kolestaze (kršenje protoka žuči). Prije svega, postoji cerebro-toksični učinak, što dovodi do povećanog umora, poremećaja sna (u blagim oblicima akutnog hepatitisa i kroničnog hepatitisa).

U slučaju akutne bolesti početno razdoblje traje oko 2-3 tjedna. To je popraćeno bolovima u zglobovima, slabost, probavne smetnje (mučnina, povraćanje, gubitak apetita), groznica, posebno uobičajena kod virusnog hepatitisa B. kolestatska žutica zahvaljujući također obilježje hepatitisa B. Ovo mijenja boju mokraći (tamne) i izmet (posvjetljuje ). Često, akutni oblik općenito je asimptomatski, posebno u hepatitisu C.
Akutni virusni hepatitis B u 80% slučajeva završava oporavkom, u 20% - ide u kronični oblik. U hepatitisu C, kronični tijek razvija se u približno 90% odraslih pacijenata iu 20% djece. Kronični oblik predstavlja najveću opasnost, jer se često pretvara u cirozu jetre.

Kod netretiranih pacijenata, mentalna depresija i umor mogu biti jedina manifestacija kroničnog virusnog hepatitisa čak i prije nego što se dijagnoza provede. U kasnijim fazama kroničnog hepatitisa s velikim fibroze i ciroze sindroma planu portalne hipertenzija, koja je opasna po život uslijed nakupljanja tekućine u abdomenu (ascites), i moguće unutarnje krvarenje.

Prva pojava karakteristična za hepatitis simptoma treba proći dijagnostičko testiranje za hepatitis B virus (B) i C s obzirom na činjenicu da je moguće asimptomatski tijek bolesti, kao i jednostavnost zaraze HBV probir treba biti učinjeno redovito, ali od virusnog hepatitisa B ne cijepiti.

Metode korištene za otkrivanje hepatitisa C infekcije

Najteži oblik virusnog hepatitisa je hepatitis C. Samo ovaj virus karakterizira prisutnost RNA u svom sastavu. Sumnja na penetraciju i širenje virusa u tijelu pojavljuje se u slučaju povećane aktivnosti jetrenih enzima. Dodatni faktor koji ukazuje na potrebu za dijagnozom je pripadnost mogućeg prijevoznika grupi rizika.

Savjeti od hepatologa

U 2012. godini došlo je do otkrića u liječenju hepatitisa C. Razvijeni su novi antivirusni lijekovi s izravnim djelovanjem, koji s vjerojatnošću od 97% potpuno oslobađaju tu bolest. Od tada, hepatitis C službeno se smatra potpuno izlječivom bolesti u medicinskoj zajednici. U Ruskoj Federaciji i zemljama ZND-a lijekovi su zastupljeni markama cofosbuvir, daklataswir i lepidasvir. Trenutno se na tržištu pojavljuju mnoge lažne krivotvorine. Lijekovi odgovarajuće kvalitete mogu se kupiti samo od tvrtki koje imaju licence i relevantnu dokumentaciju.
Idite na službenu stranicu dobavljača >>

U većini slučajeva, bolest prolazi bez posebnih znakova, a prijevoznik možda ne zna da je njegovo tijelo zaraženo HCV-om. Kako bi se otkrila bolest, potrebno je provesti niz studija i testova.

Ako rezultati takvih analiza sumnjaju, stručnjak može propisati ponavljanje pregleda pacijenta.

U ljudskom tijelu jetra djeluje kao mini-laboratorij. Kada virusi prodre, on daje signal o tome - postoji povreda proizvodnje određenih enzima ili smanjenje njihove aktivnosti, biokemijski pokazatelji promjene krvi zbog zamjene ili pojave novih tvari.

Na primjer, neizravna indikacija prisutnosti HCV u tijelu može biti promjena u aktivnosti ALT- i AST-transferaza enzima koji ulaze u krvotok zbog bolesti tkiva jetre.

Ali ovaj čimbenik također može svjedočiti o drugim bolestima jetre i unutarnjih organa, tako da su stručnjaci razvili posebne visoko učinkovite metode za dijagnosticiranje hepatitisa C virusa.

Kako bi se provjerilo postoji li bolest, potrebno je provesti pred-laboratorijske, laboratorijske i kliničke studije.

Opća simptomatologija bolesti

Bolest se može nastaviti u latentnom obliku i prijeći u kroničnu fazu, a ova varijanta je fiksna u većini slučajeva. Međutim, nakon završetka razdoblja inkubacije virusa, koji može trajati do mjesec dana, mogu postojati određeni znakovi koji nalikuju simptomima gripe. Važno je obratiti pozornost na njih na vrijeme i provjeriti dostupnost HCV-a.

Ovakvi znakovi su rangirani:

  • opće pogoršanje zdravlja;
  • povišena tjelesna temperatura;
  • bol u mišićima i zglobovima;
  • rjeđe - pojavu kožnih reakcija.

Ti znakovi se manifestiraju postupno, pa pacijent može lako zbuniti svoje stanje prehladom ili istim gripe.

Ali nakon nekoliko dana, priroda tijeka bolesti se mijenja. pojavljuju:

  • bolna senzacija u području pravog hipohondrija;
  • oštećenje ili ukupni gubitak apetita;
  • zamračivanje urina;
  • razjašnjenje izmeta;
  • stanje mučnine, želje za povraćanjem.

Ako ne započnete liječenje na vrijeme, bolest se odvija u kroničnu fazu.

Znakovi takve promjene u prirodi bolesti ponekad su tako neprimjetni da im zaražena osoba ne pridaju nikakvu važnost, otpuštajući sve zbog banalnog umora. Ali u stvari oni zahtijevaju pažnju i ispitivanje od strane stručnjaka.

Nedavno sam pročitao članak koji opisuje upotrebu kompleksa lijekova "SOFOSBUWIR DAKLATASVIR "za liječenje hepatitisa C. S ovim kompleksom se zauvijek može riješiti HEPATITIS C.

Nisam navikao povjeravati bilo kakve informacije, ali sam odlučio provjeriti i narediti. Lijekovi nisu jeftini, ali život je skup! Nisam osjetio nuspojave iz postupka, već sam mislio da je sve uzaludno, ali mjesec dana kasnije prošao sam testove i PCR nije otkriven, ali nije pronađen nakon mjesec dana liječenja. Cardinally poboljšano raspoloženje, opet je postojala želja za životom i uživanje u životu! Uzeo sam lijek za 3 mjeseca i kao rezultat, virus je otišao. Pokušajte i vi, a ako ste zainteresirani, veza u nastavku je članak.

To su simptomi kao što su:

  • brz nastup umora;
  • tjelesno stanje i nesposobnost suočavanja sa uobičajenim naprezanjima;
  • nelagoda u abdomenu;
  • česta pojava povraćanja i mučnine;
  • bol u mišićima i zglobovima;
  • smanjena funkcija crijeva.

Ako bolest stječe kronični tečaj, žutica, povećana jetra i slezena, krvarenje, gubitak težine. To ugrožava ciroza jetre ili nastanak raka.

Prisutnost gore navedenih znakova ili zabrinutosti o prodiranju HCV u krv sugerira da je potrebno proći sveobuhvatno ispitivanje stanja zdravlja i primati kvalitetnu medicinsku njegu. Takva intervencija podrazumijeva laboratorijske testove koji potvrđuju zarazu i širenje virusa u tijelu.

Laboratorijsko istraživanje

Dijagnoza hepatitisa C i naknadno imenovanje režima liječenja dio je profesionalne kompetencije stručnjaka za zarazne bolesti koji se specijalizirao za prepoznavanje akutnog tijeka bolesti. Ako pacijent ima kronični oblik bolesti, trebao bi se posavjetovati s hepatologom.

Kako bi se proučio proces promjene stanja jetre, bolesniku se preporučuje da prođu takve studije kao testovi za razinu bilirubina i jetrenih enzima (ALT).

Postoji i obvezno uzimanje testova jetre za biokemiju, čija proučavanje omogućuje provjeru prisutnosti bolesti i stupnja oštećenja jetrenih stanica. Otkrivene povrede tijela sugeriraju testiranje krvi za prisutnost HCV.

Postojanje virusa i njegove karakteristike utvrđene su uporabom posebnih markera. To su markeri anti-IgM / G i HCV RNA. Takve analize predstavljaju dvije vrste studija:

Imunološka (ELISA). Ova vrsta temelji se na definiciji postojanja antitijela na virus u krvi. Prisutnost antitijela je pouzdan pokazatelj HCV-a. Proizvode ih tijelo (to jest leukociti u krvi) kako bi uništili virus. Nakon što je osoba bila bolesna, protutijela ostaju u strukturi krvi za cijeli život. Ovo je zaštitna reakcija imunološkog sustava.

Ako ova analiza daje pozitivan rezultat, postoji sumnja na infekciju. Nadalje, potencijalni nosač mora proći kompleks potvrđenih dijagnostičkih metoda. To je zbog činjenice da postojanje protutijela nije izravni dokaz prisutnosti bolesti. Možda je tijelo već jednom stupilo u interakciju s virusom, na primjer, tijekom cijepljenja. Ili, na primjer, lažno pozitivan rezultat često se može zabilježiti u trudnica.

Da bi se točnu dijagnozu učinila, specijalist treba provjeriti rezultate genetske studije. Neosporna prednost takvih testova je mogućnost dijagnosticiranja ranog stadija bolesti, jednostavnosti upotrebe, sposobnosti kontrole progresije infekcije. Nedostaci ELISA uključuju nemogućnost određivanja prisutnosti virusa, ali samo odgovarajuća antitijela na njega;

Genetski (PCR). Ova vrsta se temelji na određivanju genetskog materijala HCV u krvi PCR (metoda lančane reakcije polimeraze). Određuje se prisutnost RNA virusa. Kao rezultat toga, podaci o koncentraciji virusa postaju dostupni i njihovo članstvo u određenoj vrsti. Ova metoda je u stanju otkriti čak i malu koncentraciju HCV.

Budući da bolest može biti različite prirode podrijetla, a time i različite vrste virusa koji ga uzrokuje, studija PCR pruža najpotpunije informacije o značajkama etioloških je da je virus koji je pokrenuo bolest. Prednosti ove vrste analize smatraju se kvalitativnim i kvantitativnim istraživanjem HCV u krvnom serumu. To omogućuje liječniku da propisuje optimalnu shemu za uklanjanje bolesti, praćenje dinamike bolesti, kako bi se procijenila učinkovitost odabranih metoda liječenja.

Ova se analiza sastoji od tri faze: kvalitativnog PCR, zatim kvantitativnog PCR i određivanja genotipa. Zahvaljujući najnovijim istraživanjima stručnjak može najučinkovitije provoditi terapiju za bolest i primijeniti lijekove koji odgovaraju određenoj vrsti virusa. To će vam pomoći da se riješite bolesti što je prije moguće.

Nakon što prođe niz laboratorijskih testova, liječnik propisuje optimalni režim liječenja:

  • ako su biokemijski pokazatelji unutar granica norme, uspostavljeno je praćenje stanja pacijenta i imenovano periodično ponavljanje studija;
  • u prisutnosti abnormalnosti testovi funkcije jetre i ELISA pozitivni rezultati PCR, stručnjak dodjeljuje kliničke studije pripisuje režim i učinkovitosti dinamiku kontrolu bolesti i odabrane lijekove i lijekove.

Koja je karakteristika kliničke dijagnoze? Kako bi se odredio stupanj oštećenja jetre, koristi se ultrazvučna metoda. Na temelju podataka dobivenih tijekom SPM-a, stručnjak može procijeniti promjene u veličini organa, njegovoj strukturi, strukturi, gustoći tkiva, te u nekim slučajevima - o funkcijama.

Točniji podaci o statusu jetre daju analizu biopsije, kojom se utvrđuje stupanj fibroze i upalnih oštećenja nekroze.

Na temelju svih vrsta dijagnoze, liječnik određuje dijagnozu i propisuje najučinkovitiji tretman. Ako stručnjak postoji sumnja o prisutnosti virusa ili njegova pripadnost određenoj vrsti, vjerojatno kako bi potencijalni pacijent će biti ponovno izabrani ili dodatnim testovima, koji će pomoći da se uspostavi precizniju sliku o njegovom stanju.

Hepatitis C: načini infekcije, dijagnoze, načini liječenja

Hepatitis C (hepatitis C) je upalna bolest jetre uzrokovana infekcijom tijela virusom HCV, hepatitis C virusom. Kad se virus hepatitisa C umnoži, a jetreno tkivo postaje oštećeno, razvijaju se patološki procesi, razvija se ciroza jetre i razvijaju se rakovi. Ovaj oblik se smatra najopasnijim oblikom hepatitisa, ne samo zbog sposobnosti da poremetiti cjelokupno funkcioniranje tijela i uzrokuje bolesti koje dovode do invaliditeta ili smrti, već i zbog prirode tijeka bolesti. Simptomi hepatitisa C, u pravilu, nisu ekspresirani, infekcija prolazi u latentnom obliku, a cjepivo protiv hepatitisa C je odsutno.

Što je hepatitis C (hepatitis C)?

Hepatitis C (HCV) postao je poznat kao zasebna bolest dugo prije otkrića specifičnog infektivnog sredstva. "Non-A non-B hepatitis", non-A, non-B hepatitis (NANBH) kao bolest imao je manifestacije koje su mu omogućile klasifikaciju kao hepatitis, ali su se razlikovale tijekom bolesti i teških komplikacija. Nakon toga, virusi koji su uzrokovali hepatitis D i G također su bili izolirani u hepatitisnim vrstama.
Po prvi put je 1989. godine izoliran poseban oblik virusa. Trenutno je šest genotipova virusa HCV službeno identificirano, a još 5 laboratorijskih ispitivanja. Također je poznato oko 90 podtipova HCV. Najčešći oblik je prvi oblik virusa, on je također odgovoran za najteži oblik hepatitisa C, rezistentan na interferonsku terapiju.
Varijabilnost virusa hepatitisa C, proizvodnja novih genotipova tijekom infekcije otežava stvaranje cjepiva protiv ove bolesti, koja trenutno, prema statističarima, bolesna oko 150 milijuna ljudi u svijetu. Godišnje od komplikacija uzrokovanih hepatitisom C umire oko 350 tisuća ljudi. Specifična izbrisana simptomatologija dovodi do situacije kada je dijagnoza hepatitisa HCV slučajno otkrivena tijekom analize ili je uspostavljena u fazi razvoja komplikacija. Aktivne mutacije virusa dovode do stvaranja promijenjenih kopija genotipa, što uzrokuje visok postotak kroničnog oblika bolesti.

Znakovi hepatitisa C

Fotografija: Jarun Ontakrai / Shutterstock.com

Pojava prvih znakova hepatitisa C ovisi o otporu tijela. Od vremena infekcije do primarne simptomatologije može trajati od 2 tjedna do 6 mjeseci. Ako postoji sumnja u kontakt s infekcijom za ranu dijagnozu, provodi se PCR krvni test radi utvrđivanja prisutnosti RNA virusa u krvi, 2 tjedna nakon infekcije.
Hepatitis C ima karakteristike "ljubavnog ubojice": latentni simptomi i teške komplikacije dovode do ozbiljnih oštećenja tijela u odsustvu sumnje na prisutnost HCV.
Prvi simptomi ovog oblika virusnog hepatitisa uključuju smanjenje radne sposobnosti, asteno stanje, osjećaj umora.
Glavni znakovi hepatitisa C, koji se manifestiraju tijekom faze izražene umnožavanja virusa u tijelu, smatraju se:

  • smanjenje ili nedostatak apetita;
  • mučnina;
  • opća slabost, astenija, pogoršanje zdravlja;
  • bol u zglobovima;
  • iterus kože, sluznice, sclera oka kao posljedica povećanja koncentracije bilirubina u krvi zbog oštećenja jetre u hepatitisu C;
  • povećanje veličine jetre i slezene.

Uzroci hepatitisa C, načini ugovaranja hepatitisa C

Metoda prijenosa HCV virusa je hematogena, s krvlju i drugim biološkim tekućinama. Infekcijsko sredstvo je prisutno čak iu najmanjim kapi krvi i ostaje aktivno do 5 dana kada se tekućina suši pri sobnoj temperaturi. Infekcija se događa kada inficirani HCV biološki materijal ulazi u drugi organizam tijekom invazivnih postupaka, kao iu kontaktu s površinama rane (ogrebotine, abrazije, pukotine i mukozne lezije itd.). U tom smislu, odredite glavne načine infekcije:

  • kroz injekcije s ne steriliziranim višekratnim štrcaljkama, iglicama;
  • transfuzija krvi, plazma iz zaraženog donora, transplantaciju organa i tkiva;
  • u procesu korištenja ne steriliziranih instrumenata u stomatološkim klinikama, kozmetičkim, manikarskim salonima, s piercingom, crtežom tetovaža itd.;
  • s traumatskim spolnim kontaktom: dovoljno male pukotine na površini sluznice;
  • vertikalni način zaraze: od majke do fetusa tijekom trudnoće;
  • način kućne infekcije kod upotrebe lopatica, četkica za zube itd. (iznimno je rijedak);
  • kod isporuke i operativnih postupaka, traume u ne sterilnim uvjetima.

Inaktivacija virusa nastaje kada se površine obrađuju sredstvima za dezinfekciju koji sadrže klor kada se tretira vodom s temperaturom od najmanje 60 ° C tijekom 40 minuta ili s tri minute kuhanja.
U rizične grupe stanovništva izložene visokom riziku od infekcije HCV-om, nose medicinsko osoblje i zaposlenici sanitarne-a-epidemioloških institucija, ovisnici s invazivnom primjenom lijekova, osobe s visokim brojem nezaštićenog spolnog odnosa, seksualnih partnera inficiranih pacijenata, uključujući i skriveni nosači hepatitisa C, ljudi s autoimunim bolestima, imunodeficijencije itd.
Virus hepatitisa C ne prenosi dodirom rukovati kapljica u zraku, rijetki slučajevi zaraze u dojci hranio (u prisutnosti rana na sisama pukotina u majke i oštećenja sluznice u ustima djeteta), te kontakt za domaćinstvo, dijeljenje. Prevencija hepatitisa C su sterilizacija medicinskih i kozmetičkih alata za invazivnih postupaka i injekcije, u skladu s pravilima osobne higijene u domu, i mehaničkim metodama za zaštitu seks s nepoznatim partnerima.
Sprječavanje infekcije djeteta s hepatitisom C tijekom trudnoće posebna je terapija za smanjenje količine virusa tijekom trudnoće, kao i pregled i liječenje žene prije začeća.

Vrste i faze hepatitisa C

Postoje dva oblika hepatitisa C. Akutni oblik ove virusne infekcije dijagnosticira se u rijetkim slučajevima zbog izbrisane kliničke slike. Najčešće, otkrivanje akutne faze događa se slučajno tijekom preventivnog pregleda ili kada osoba traži dijagnozu u slučaju sumnjivog kontakta.
S pravodobnom terapijom, 20% akutnih oblika hepatitisa C potpuno se izliječi. U odsutnosti ili neučinkovitosti liječenja, akutni hepatitis C postaje kroničan.
Hepatitis C u kroničnom obliku može se također pojaviti asimptomatski bez utjecaja virusnog opterećenja na tijelo, bez kliničkih manifestacija i specifičnih simptoma. Ova skupina skrivenih prijenosnika virusa otežava prikupljanje statističkih podataka o prevalenciji HCV-a, jer se određuje samo krvnim testovima za hepatitis markere, ali može pridonijeti širenju infekcije.
Klasični tijek kroničnog hepatitisa C popraćen je oštećenjem jetrenih stanica, razvoju tkiva fibroze. U nedostatku liječenja, fibrozni žarići izazivaju razvoj ciroze jetre, stvaranje tumora karcinoma i drugih opasnih komplikacija.

Komplikacije hepatitisa C

Fotografija: Den Rise / Shutterstock.com

Stopa razvoja komplikacija ovisi o općem stanju tijela, sposobnosti imunološkog sustava za proizvodnju antitijela, obliku genotipa i prisutnosti mutacija virusa, kao i načina života i prehrane čovjeka. Korištenje alkohola, masne hrane dovodi do značajnog ubrzanja u razvoju patoloških procesa, alkoholnih, toksičnih hepatitisa.
Hepatitis C može uzrokovati sljedeće bolesti i poremećaje:

  • fibroza jetrenog tkiva;
  • steatohepatitis, zamjena tkiva jetre s masnim tkivom;
  • ciroza jetre;
  • hepatocelularni karcinom, kancerogena transformacija jetrenog tkiva;
  • hipertenzija portala karaktera;
  • ascites, nakupljanje tekućine u organima peritoneuma;
  • varikozne vene unutarnjih organa;
  • hepatična encefalopatija;
  • kronično opijanje tijela s produktima dezintegracije tkiva i zbog nedovoljne funkcije jetre;
  • latentno unutarnje krvarenje.

Hepatitis C je također opasan stvaranjem povećanog rizika od razvoja hepatitisa B kada je izložen infekciji uslijed smanjene funkcije jetre.

Dijagnoza hepatitisa C

Za dijagnozu hepatitisa C koriste se slijedeće metode:

  • prikupljanje anamneze i ispitivanje pacijenta, palpacija peritonealnih organa;
  • biokemijski test krvi;
  • test krvi za antitijela na hepatitis C virus (anti-HCV) i HCV-RNA putem PCR;
  • test krvi za prisutnost protutijela IgM klase (anti-HCV IgM), koji pokazuje akutni stupanj bolesti;
  • opća analiza krvi, ispitivanje karakteristika zgrušavanja (koagulogram);
  • ultrazvučni pregled jetre, slezene, peritonealnih organa.

U nekim je slučajevima propisano laboratorijsko ispitivanje tkiva jetre (biopsija).
Ove metode omogućuju određivanje prisutnosti infekcije i utvrđivanje točne dijagnoze s definicijom HCV genotipa.

Liječenje virusnog hepatitisa C u različitim fazama

Hepatitis C podrazumijeva sveobuhvatnu terapiju usmjerenu na podršku tijelu i borbi protiv HCV virusa zajedničkog ili specifičnog antivirusnog učinka. Tijek terapije bolesnika s hepatitisom C uključuje:

  • terapija lijekovima s antivirusnim lijekovima;
  • uzimanje lijekova za održavanje funkcije jetre;
  • preparati za popravljanje, imunomodulatori, stimulansi imuniteta.

Tijek terapije lijekovima neće biti učinkovit ako se ne pridržavaju pravila prehrane, ograničavajući tjelesnu aktivnost, promatrajući režim dana. Virus hepatitisa C agresivno utječe na ljudski imunološki sustav i tkivo jetre, što uzrokuje potrebu za štednjom prehrambene prehrane, adekvatnom odmoru, isključujući vjerojatnost kontakta s drugim virusnim i bakterijskim infekcijama.

Tradicionalna antivirusna terapija za hepatitis C

Za borbu protiv HCV virusa koriste se antivirusni lijekovi koji potiču imunosne sile tijela. Najučinkovitiji (45-50% lijeka, ovisno o stupnju bolesti i genotipa HCV uzrokovane hepatitis) smatraju lijekove Ribavirin i interferon alfa-upotrijebiti ovisno o fazi i općeg stanja pacijenta, zasebno ili u kombinaciji.
Opći tijek terapije ovim lijekovima, doziranjem i režimom određuje liječnik-hepatolog na temelju dijagnostičkih podataka i odgovora pacijenata na lijekove. Prosječno trajanje tijeka antivirusne terapije s ovim lijekovima je 12 mjeseci.
Kombinacija lijekova može uzrokovati alergijske reakcije, njihova uporaba je neprihvatljiva u trudnoći i određenim bolestima. Učinkovitost tretmana se procjenjuje na temelju podataka o krvi za ispitivanje za smanjenje razine virusnog opterećenja (HCV RNA) i stupanj aktivnosti transmnaze.
Lijekovi mogu uzrokovati značajne nuspojave. Primanje interferon skupinu u visokim dozama se često su popraćena značajnog pogoršanja karakteristične perioda adaptacije na lijek (do 1 mjesec), te uz hipertermije na 38-39 ° C, glavobolja i bol u zglobovima, gubitak težine, suha koža, gubitak kose. Takvi simptomi prolaze neovisno i ne zahtijevaju prestanak uzimanja lijeka.
3-4 mjeseca nakon početka uzimanja lijekova interferonske skupine može se vidjeti promjena u krvnoj slici: smanjenje koncentracije trombocita, leukocita. Ovisno o stupnju promjena, uzimanje lijekova može se kratko obustaviti.
Ozbiljne komplikacije koje zahtijevaju korekciju tijeka liječenja su hemoragijsko krvarenje i vezanje bakterijskih infekcija.
Prilikom uzimanja ribavirina može doći do manje dispepsije, hemolitičke anemije, povećane koncentracije mokraćne kiseline, glavobolje.
Liječenje se provodi pod nadzorom stručnjaka.

Izravno djelujući lijekovi na HCV

U 2013. godini novi lijek razvijen tijekom 11 godina klinički je testiran i odobren kao antivirusno sredstvo za izravno djelovanje. Sofosbuvir kojeg proizvodi Gilead (SAD) patentiran je kao jedini aktivni sastojak koji je trenutno dostupan, prema istraživanjima, liječenje 95% slučajeva hepatitisa C.
Zbog visokih troškova proizvodnje (osnovni tijek liječenja sophosbuvirom u Sjedinjenim Državama košta 84.000 dolara), tvrtka je prenijela licencna prava za proizvodnju lijeka. Trenutno, proizvodnja Hepcinata u Indiji je također na tržištu lijekova s ​​troškovima lijekova za terapiju na 880-1200 dolara.
Antivirusni lijek sadrži kombinaciju sophosbuvira i daklatasvira uzimane oralno. Doziranje i trajanje tečaja izračunava hepatolog na temelju podataka o genotipu virusa, stupnju fibroze jetre, individualnim karakteristikama pacijenta. Lijekovi su učinkoviti za sve genotipove HCV-a, nemaju kontraindikacije kod pacijenata s HIV-om. Tijek liječenja je od 12 do 24 tjedna.

Hepatoprotectors u hepatitisu C

Pripravci - hepatoprotectors, koji su dio terapije za hepatitis C, imaju za cilj održavanje funkcija zahvaćenog organa. Bez stvrdnjavanja tijela bolesti, oni pomažu u održavanju i obnavljanju zdravlja jetre, regeneriraju tkiva.
Za takve pripravke učinkovite u hepatitisu s, nositi Essentiale, Karsil, Lipoevuju kiselina, Silimar, Fosfogliv i drugi. Tijek uzimanja hepatoprotectors počinje bez obzira na prisutnost ili odsutnost antivirusne terapije i završava kliničkim zdravljem jetre potvrđenim laboratorijskim testovima i instrumentalnim studijama.

imunomodulatori

Budući da je imunološki sustav koji pate od virusne konstantnim opterećenjem, uzimanje lijekova s ​​ciljem jačanja ona ulazi ukupni terapija s obzirom na bolesnika s hepatitisom C Najčešće imunomodulatori za hepatitis C, uključuju lijekove i Zadaxin Temogen.

Dijetna hrana

Liječenje hepatitisa C i njegovih komplikacija prati imenovanje medicinskog sustava prehrane za Pevzner, broj prehrane 5. Ispunjavanje prehrane olakšava funkcioniranje jetre i drugih organa probavnog sustava, usporavajući razvoj komplikacija hepatitisa C.
Osnovna načela prehrane broj 5 ograničavaju potrošnju namirnica koja poboljšavaju izlučivanje probavnih sokova: masna, začinjena, slana, pušena, konzervirana hrana, kava, jaki čaj. Alkoholna pića su potpuno isključena. Preporučena dnevna količina tekućine (voda, kompoti, voćni napici i sokovi od povrća s niskim nadražujućim učinkom na želudac) iznosi od 2 do 3 litre.

Prognoza rezultata liječenja hepatitisa C

Prognoza lijekova za virusni hepatitis C ovisi o vremenu početka terapije, stupnju bolesti, nazočnosti i opsegu komplikacija, izboru liječenja i imenovanju stručnjaka.
Najpovoljnija prognoza na početku terapije u ranoj akutnoj fazi hepatitisa C, kada ta bolest još nije prošla kroničnu infekciju s teškim komplikacijama, degeneracijom jetrenih stanica, toksičnim oštećenjem tijela.
Pridržavanje načela prehrambene prehrane, odbijanje alkohola u velikoj mjeri pomaže u izbjegavanju ranog razvoja komplikacija i općenito održavanju zdravlja.
Ovisno o izboru lijekova za izravno ili opće antivirusno djelovanje, prognozu za virusni hepatitis C iznosi 45 do 95% brzine liječenja. Složeno liječenje hepatitisa C uz uporabu novih antivirusnih lijekova pomaže pri liječenju bolesti i izbjegavanju komplikacija.

Sprječavanje hepatitisa C

Fotografija: Alexander Raths / Shutterstock.com

Zbog velikog broja genotipova vrste hepatitisa i njegova sposobnost da mutiraju stvaranju brojnih podvrsta specifična prevencija hepatitisa C u obliku cijepljenja je još uvijek u razvoju. Nespecifična mjere sprječavanja virusnih hepatitisa C se smatra ograničavajuće mjere za zaštitu od prodiranja virusa u tijelo i općem jačanje tijela.
Hepatitis C prenosi se isključivo kontaktiranjem biološke tekućine koja sadrži virus, s površinom rane ili potkožnim tkivima. Stoga je prevencija bolesti isključivanje situacija takvih kontakata:

  • kontrolu nad poštivanjem sanitarnih i higijenskih normi pri korištenju usluga zdravstvenih ustanova, kozmetičkih i dentalnih salona, ​​isključujući mogućnost korištenja ne steriliziranih kirurških instrumenata, ponovljivih štrcaljki;
  • ograničavanje broja seksualnih kontakata s nepoznatim partnerima, korištenje osobne zaštitne opreme tijekom spolnog odnosa;
  • Redovita analiza markera virusa kada rade u uvjetima povećanog rizika od infekcije.

Oko 20% slučajeva infekcije B virusa hepatitisa ovog oblika su nepoznate etiologije, bolest je vidio u ljudi vodećih zdravog načina života, a ne podvrgnut postupku transfuzije krvi ili presađivanja organa, imaju jednu redovnu seksualnog partnera, a ne skloni ubrizgavanje uporabe droga. Prevencija - mjera sprečavanja bolesti, koja se mora slijediti čak iu nedostatku jasne vjerojatnosti zaraze.
Ostale mjere uključuju prevenciju nespecifične zdravog načina života, ograničiti korištenje alkohola, uravnoteženu prehranu koja bi mogla ometati razvoj bolesti i njezinih komplikacija, čak i kada virus uđe u tijelo.

Hepatitis C: preventivne mjere u prisustvu pacijenta u obitelji

Hepatitis C je zarazna bolest koja se prenosi uglavnom kroz krv. Kada žive zajedno na istom području sa zaraženim pacijentom, nema potrebe za zaštitom prostora, sprečavanju kontaktiranja ili uporabe zasebnog pribora za jelo.
Važno je isključiti zajedničko korištenje jednog brijanje stroja (zbog mogućih rezanja), četkica dezinfekciju površina na kojoj staviti kap krvi kod kuće ozljede otopinom bjelila (1: 100), koji sadrži klor tekućina vrenja ili opere na 60 ° C, kako bi se promatrati mjere zaštite tijekom spolnog odnosa, kako bi spriječio ozljede genitalija razvoj bolesti povezanih s oštećenjem kože ili sluznice. U prisutnosti ozljeda, otvorenih rana preporuča se oprez.
Zbog smanjene otpornosti tijela na druge tipove hepatitisa preporučuje se članovima obitelji i brižnom osoblju cijepljenje protiv hepatitisa A i B.

Sprječavanje infekcije fetusa i novorođenčadi

Zbog izbrisanih simptoma, prisutnost virusnog hepatitisa C u žena može se dijagnosticirati već u fazi trudnoće pri ocjenjivanju testova za infekciju. U takvim slučajevima, prognoza prijenosa virusa na fetus ovisi o virusnom opterećenju majčinog tijela, određenom brojem titra u krvi.
Da bi se smanjila vjerojatnost infekcije fetusa, preporučuje se uzimanje nekih generičkih lijekova, kao i imenovanje hepatoprotektora radi smanjenja vjerojatnosti komplikacija trudnoće uzrokovane povećanim stresom na jetri.
Na male vjerojatnosti virusnog opterećenja rođenja zaraženog djeteta je mala, ali kako bi se utvrdilo prisustvo virusa u krvi može samo 1-1,5 godina nakon rođenja, kao djeteta krvi za dugo vremena su antitijela majke.
Profilaksa je krvno testiranje prisutnosti virusa prije začeća i tijeka liječenja bolesti ako je prisutan prije trudnoće. Tijekom gestacijskog razdoblja, antivirusni lijekovi zabranjeni su zbog mogućih teratogenih učinaka na fetus i povećanog rizika od pobačaja.
Kako bi se smanjila vjerojatnost zaraze novorođenčeta, preporučuju se iste mjere kao i kod života s odraslom osobom zaražena.
Dojenje od majke s hepatitisom C sada je sigurno, jer nema virusa u majčinom mlijeku. Međutim, potrebno je pažljivo pratiti stanje kože i bradavica dojke pokriva kako bi se spriječilo bilo kakve ribana, pukotine i provjerite oralne sluznice u prisustvu djeteta rane, ogrebotine, gljivične infekcije.
Ako imate bradavice područje microtrauma preporučamo korištenje jastučići koji ne dopušta nikakvu tekućinu iz rane u ustima djeteta, ili privremeno prekinuti dojenje do oporavka kože.

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C

MI Mikhailov, Institut za epidemiologiju i mikrobiologiju. NF Gamalei RAMS, Moskva

Prilikom utvrđivanja dijagnoze "hepatitisa C" potrebno je razmotriti sljedeće najvažnije čimbenike:

  • pokazatelji aktivnosti enzima "jetrene";
  • prisutnost ili odsutnost markera infekcije virusom hepatitisa C (HCV) i drugih hepatotropnih virusa;
  • epidemiološka povijest;
  • rezultati kliničkog ispitivanja pacijenta. Samo sveobuhvatan prikaz ovih čimbenika omogućava dijagnozu ove bolesti s visokim stupnjem pouzdanosti. Laboratorij radnik mora pružiti objektivne informacije o određivanju raspona virusnih antigena i antitijela, kao i HCV RNA, čime medicinarima, zaposlenica krvnih transfuziju i epidemiologa odlučivati ​​o izazovima s kojima se suočavaju. Najčešće je:
  • Identificiranje osoba s HCV-om za smanjenje posttransfuzijskog hepatitisa C;
  • dijagnoza i diferencijacija akutnog i kroničnog hepatitisa C;
  • prognozu bolesti;
  • imenovanje, procjenu i prognozu učinkovitosti terapije;
  • proučiti širinu HCV-a u populaciji i različitim skupinama stanovništva.
    Istodobno, glavna područja rada koje obavlja laboratorijsko osoblje su:
  • razvoj i odabir najpopularnijih metoda za otkrivanje markera HCV infekcije;
  • definiranje kriterija za objektivnu procjenu dobivenih rezultata;
  • razvoj optimalnih algoritama za provođenje laboratorijskih studija;
  • uvođenje sustava za poboljšanje otkrivanja biljega HCV infekcije.

    Osnova laboratorijske dijagnoze hepatitisa C. HCV služi znanja o svojoj replikacije, informacije o dinamici pojave i nestanak markera infekcije, kao i suvremene imunokemijskih i molekularno biološkim metodama za otkrivanje antigena, protutijela i nukleinskih kiselina.

    VIRUS HEPATITIS C. HCV je prvi put identificiran u 1988, kada je skupina istraživača pod vodstvom M. Houghton i Choo Q.L, primjenom nove metode molekulyarnobiologicheskie istraživanja i klonirani sekvinirovala virusni genom [I]. Čestica virusa hepatitisa C ima sferični oblik s prosječnim promjerom od oko 50 nm [2,3]. Pokušaji da vizualno otkriti i proučiti strukturu virusa hepatitisa C poduzete od otkrića virusa, ali do sada ne postoje dobro dokumentirani rezultati tih istraživanja, vjerojatno zbog teškoća akumulacije virusnih čestica u potrebnim količinama.

    Član VGSedinstvenny roda Hepacivirus iz porodice Flaviviridae, koja uključuje viruse kao što je virus bikove proljeva i svinjske groznice (rod Pestivirus) i žute groznice virus, Dang virus i GB virusa: GBV-A GBV-B i GBV-C / HGV (roda Flavivi-rus). Struktura virusa hepatitisa C može se prikazati kako slijedi (shema br. 1). Nukleokapsid sadrži RNA virusa hepatitisa C nucleocapsid vrh prevučena s udubljenjem u njemu lipidnog omotača premaza proteina kodiranih HCV RNA. Genom virusa predstavljen je jednostranom linearnom RNA molekulom pozitivne polarnosti, oko 9600 nukleotida u dužini. Organizacija HCV genoma slična je ostalim flavivirusima. Ona razlikuje dvije zone koje kodiraju strukturne i ne-strukturne (funkcionalne) proteine. Geni koji kodiraju strukturne bjelančevine nalaze se u 5 'regiji genoma virusa, a ne-strukturni u 3' regiji. Gena HCV ima jedan otvoren okvir čitanja (ORF), jedan polipeptid (približno 3000 amino kiselina), koji pod djelovanjem stanične i virusne proteaze izrezati u strukturnim i ne-strukturnih proteina.

    Sl. 1. Strukturni elementi HCV

    Strukturne bjelančevine obuhvaćaju proteine ​​kodirane jezgrom, El i E2 s HCV RNA zonama. Je otkrila tri oblika proteina C-HCV: pune dužine (p21) molekularne težine - 21 kD, skraćena (P19) i oblik (P16) je otkrivena u jezgrama inficiranih hepatocita. Na svojoj plohi koja je C-protein nosi različite visoko konzerviran epitop B-stanice, postojanje što je izuzetno važno za detekciju antitijela na HCV u laboratorijskoj dijagnostici hepatitisa C.

    RNA područja HCV-E1 i E2 kodiraju proteine ​​molekulske mase 31 i 70 kD. Ovi proteini imaju nekoliko N-glikozilacijskih mjesta; U E1 proteinu, identificirano je do 6 takvih mjesta, au E2-11. Podaci o malom proteinu, p7, pronađeni su u odjeljku E2, koji nije pronađen u strukturi virusa.

    Označavanje regija bliže 3'-kraju HCV RNA - kao zone koje nose informacije o ne-strukturnih proteina virusa - ukazuje na to da ti proteini nisu strukturne komponente virusne čestice. U nestacionarnom području HCV RNA dodjeljuju se mjesta označena kao: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A i NS5B. Većina proteina kodiranih ne-strukturnih zona HCV RNA potrebna je za replikaciju virusa.

    Komparativna analiza nukleotidnih sljedova izolata HCV RNA proizvedenog u različitim područjima svijeta, pa čak i u tijeku bolesti iz istog pacijenta pokazali osnovno svojstvo virusa - visoke heterogenost RNA. Položaj velike genetske varijabilnosti HCV RNA je temelj teorije da objasni: dugoročni (ponekad doživotno) nosilac virusa, česte razvoj kroničnih bolesti, poteškoće u uspostavljanju učinkovitog liječenja i cjepiva. Najznačajnije razlike u sekvencijama HCV RNA su koncentrirane u N-terminalnom dijelu E2 regije, što se naziva "hipervarijabilna regija" (HVR) [4].

    Trenutno postoji 6 glavnih genotipova i preko 100 podtipova HCV-a. Genotipovi la, lc, 2a, 2c, 2c i 3a čine više od 90% HCV izolata dobivenih u Americi, Europi, Rusiji, Kini, Japanu i Australiji / Novom Zelandu [5]. Genotipovi 4, 5a i 6 zabilježeni su, međutim, u Srednjoj i Južnoj Africi, u jugoistočnoj Aziji. U Rusiji i zemljama ZND-a zabilježena je učestalost genotipa 16 (ne manje od 68,9%) [6,7]. Vjeruje se da bolesnici zaraženi genotipom 1 (osobito 1c) reagiraju na liječenje u usporedbi s pacijentima zaraženim drugim genotipima virusa.

    Pacijent HCV cirkulira kao populacije čestica virusa, čiji genom međusobno razlikuju od 1-2% (kvazispetsifichnosti) kao rezultat mutacija koje se nakupljaju tijekom infekcije i / ili će biti u pacijenta za vrijeme infekcije. Ovi mutirani oblici mogu dati jače ili replikaciju virusa može pomoći da izbjegne imuni odgovor i potencijalno utjecati na rezultat akutne infekcije, razlike u toku bolesti i odgovor na IFN [8].

    ODREĐIVANJE ANTI-HCV. Nakon otkrivanja HCV virusa i odrediti njegovu ulogu u razvoju post transfuzijskim hepatitisom - „ni A niti B” istraživači su izazvane razviti metode sposobnih za otkrivanje onih s HCV i prikladni su za dijagnosticiranje akutne i kronične hepatitisom C. Nađeno je da su HCV antigeni cirkuliraju izuzetno niske koncentracije, i očito je da je metodološka razina kasnih 80-ih godina XX. stoljeća, koja se koristila za otkrivanje virusnih antigena, očito nedovoljna.

    1989, skupina istraživača tvrtke „Chiron Corporation” pod smjeru Q-L.Choo provodi kloniranje HCV RNA i bio Imunoreaktivni oligopeptidi koji reagiraju s antitijelima koji cirkulira u krvi bolesnika s kroničnim hepatitisom „ni niti B”. Ovi oligopeptidi postali su temelj dijagnostičkih lijekova za otkrivanje protutijela na HCV. Ovo je odredilo brz napredak u razvoju i proizvodnji dijagnostičkih proizvoda. Glavna metoda koja se koristi za otkrivanje anti-HCV je enzim vezan imuno test kao metoda koja zadovoljava zahtjeve praktičnog zdravstvenog -te Visoka osjetljivost, specifičnost i jednostavnost ponašanja.

    S obzirom da je HCV dalje postoji u krvi bolesnika s akutnim i kroničnim hepatitisom C u kombinaciji s anti-HCV dijagnostički proizvodi usmjeriti razvojnim koncentrirane na stvaranje ispitnih sistema za detekciju antitijela, pruža najveću moguću identifikaciju nositelja virusa, i što ranije dijagnosticiranje akutne infekcije. Raznolikost antigena i antigenske determinante koje kodiraju strukturne i ne-strukturnog područja HCV RNA, određen smjer u dizajnu dijagnostičkih pripravaka za ove konstrukcije i oligopeptidi koji se koriste za izradu njih. Od trenutka otkrivanja HCV, stvoreni su dijagnostički sustavi od tri generacije (Tablica 1).

    Tablica 1
    Dijagnostički lijekovi za otkrivanje anti-HCV [9]

    Primijenjeni peptidi,
    zona HCV RNA u kojoj
    oni su kodirani

    % detekcije nosača
    HCV

    Vrijeme prvog
    otkrivanje
    anti - HCV iz
    rana jaundica

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 jezgra
    C200 NS3 i NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 jezgra
    C200 NS3 i NS4
    NS3p NS3
    Peptid NS5

    Uvođenje dodatnih peptida, prije svega c22-3 (Core), u dijagnostičke lijekove druge i treće generacije, omogućilo je rješavanje glavnog zadatka, odnosno povećanja osjetljivosti, specifičnosti i, najvažnije, detekcije anti-HCV. Zahvaljujući dijagnostičkim krivuljama treće generacije, moguće je detektirati do 97% HCV nosača. Istovremeno, određena rasprava potaknuta je uvođenjem peptida koji je kodiran NS5 HCV RNA regijom u dijagnostiku. Prema nekim istraživačima, prisutnost ovog peptida nije od temeljne važnosti za poboljšanje kvalitete dijagnostičkog lijeka. [10,11]. Međutim, protutijela NS5 mogu se otkriti u ranijem vremenu infekcije, što poboljšava kvalitetu laboratorijske dijagnoze akutnog hepatitisa C. [12]

    Trenutačno se dijagnostički pripravci treće generacije koriste diljem svijeta, uključujući i Rusiju. Peptidi koji se koriste u dijagnostičke pripravaka dobivenih rekombinantne tehnologije (npr dijagnostičke tvrtki: „Dijagnostički sredstva”, Nizhny Novgorod, „vektor”, Novosibirsk, „Roche”, „Abbott” et al.), Ili sintetički ( 000 MC "Avicenna", Sankt Peterburg, "Organon", itd.). Dijagnostika, u kojoj su istodobno korištene obje vrste peptida, primljene su oznake kao pripreme 4. generacije. Po njihovim svojstvima, ti lijekovi nemaju značajne razlike. Usporedni testovi, koje redovito provodi Ministarstvo zdravstva Rusije, pokazali su usporedivu osjetljivost dijagnostičkih preparata domaćih i stranih proizvođača.

    Utvrđeno je da se upotreba dijagnostičkih lijekova treće generacije za otkrivanje anti-HCV među imunokompetentnim populacijama (na primjer, donatore krvi) procjenjuje na 98,8-100%. Istovremeno, među imunokompromitiranim pojedincima, na primjer, kao što su bolesnici nakon transplantacije bubrega, koštane srži ili osobe zaražene HIV-om, ova je brojka znatno niža - 50 do 95% [12]. S.George i sur. [13] pokazala je da 8,4% bolesnika s HIV infekcijom ima lažno negativne rezultate otkrivanja anti-HCV. U takvim pacijentima tijekom promatranja može se zabilježiti učinak sero-reverzije; registracija pozitivnog rezultata nakon seronegativnog anti-HCV razdoblja [14].

    Jedan od najvažnijih problema u provođenju studija za prisutnost anti-HCV je lažno pozitivan rezultat. Njihov izgled može biti posljedica nespecifične interakcije reakcijskih komponenti, mogućih križnih reakcija s drugim virusnim antigenom i mnogim drugim čimbenicima. Razina lažno pozitivnih rezultata u otkrivanju anti-HCV s različitim dijagnostičkim lijekovima može doseći 10-20% [15,16]. Povećana razina takvih rezultata zabilježena je kod bolesnika s onkološkim i autoimunim bolestima, osoba s imunodeficijentnim stanjima i bolesnika sifilisa [16,17]. Postojanje lažnih pozitivnih rezultata rezultira zadatkom laboratorijskog radnika da ih razlikuje od prave detekcije anti-HCV-a. Da bi se riješio taj problem, serum se detektira u krvnom serumu HCV RNA. Međutim, negativni rezultat otkrivanja HCV RNA ne dopušta govoriti o prisutnosti lažne pozitivne detekcije anti-HCV. Treba imati na umu da anti-HCV može na izolirani način cirkulirati u krvi pacijenta koji se oporavio od akutnog hepatitisa C (10-15%) ili koji je uklonio HCV RNA kao rezultat tekuće terapije.

    POTVRDA (DODATAK) ISPITIVANJA. Kako bi se ograničila lažno pozitivnih uzoraka i uzoraka zapravo sadrži HCV protutijela, razvio dodatne (Dopunski) ispitivanja. Najčešće korišten u ovim testovima imunoblot princip [npr - RIBA ispitivanje ( „orto-Klinička dijagnostike”); „LiaTek HCV” (Organon Teknika)], kada se adsorbira na nitroceluloznu membranu u obliku pojedinačnih traka antigena kodiran različitim zonama HCV RNA. Anti-HCV antigenima interakciju s adsorbiranim pomoću enzima obilježenog antitijela protiv humanog Ig G sa njihovom naknadnom detekcijom pomoću kompleksa podloge. Dodatno imunoblot kao dodatna ispitivanja koriste dijagnostičkih sredstava za otkrivanje anti-HCV protiv antigena kodiranih od različitim zonama HCV RNA [ „spektar 4” ( „ImBio” Nižnji Novgorod, RecombiBest anti-HCV spektra „- ZAO” Vector Best "Novosibirsk, IFA- Anti-NSO-Spektr, neprofitnih organizacija" Dijagnostički sustavi”, Nižnji Novgorod].

    Dizajn i primjena tih ispitivanja je paralelna s uvođenjem screening ispitivanja za anti-HCV, ponavljajući princip širi spektar peptida koji se koriste u svakom uzastopnom generaciju dijagnostičkih sredstava. Dakle, dijagnostički RIBA-III se razlikuje od prethodne generacije dodavanjem peptida koji je kodiran NS5 zonom. Načela da se potvrdi pozitivan rezultat detekcije anti-HCV ponajprije su: mogućnost (u nekim slučajevima), preciznije rezultate enzimske reakcije reakcijom s pojedinim peptidima, kao i upotrebu u širenju spektra DIAGNOSTICUM peptidi koji se ne koriste u 'screening' analizama. Samo uvođenje novih peptida omogućuje povećanje dijagnostičke vrijednosti potvrdnih testova.

    Tumačenje rezultata dobivenih, na primjer, u takvom testu kao i RIBA-III, uključuje tri moguća odgovora: pozitivan, negativan i neodređen rezultat. Potonji se izdaje u nedostatku jasnih indikacija (prema uputama priloženim dijagnostičkom kompletu), što omogućuje da se definitivno ocjenjuje prisutnost ili odsutnost anti-HCV u uzorku ispitivanja. Korelacija spektra snimljenih odgovora tijekom potvrđenih testova varira ovisno o karakteristikama skupina pacijenata kod kojih se primarno detektira anti-HCV [18]. Prema J.M. Pawlotsky i sur. [19], u polovici slučajeva rezultata, interpretiranih kao "nejasni", može se otkriti HCV RNA. Prema našem mišljenju, valjanost odgovora - "nejasan rezultat detekcije anti-HCV" koji laboratorijski radnik daje kliničaru, vidljiv je ne samo u provođenju potvrđivanja, već iu rutinskim istraživanjima o prisutnosti anti-HCV. Nužno je takvo tumačenje dobivenih rezultata odraz trenutnog stanja laboratorijske dijagnoze hepatitisa C.

    ODREĐIVANJE IgM ANTI-HCV. Trenutno su stvorene i proizvedene dijagnostičke komplete za otkrivanje IgM anti-HCV od strane tvrtki: "Vector Best"; "Dijagnostički sustavi"; "Imbio", "Abbott", itd. U fazi projektiranja dijagnostičkih kompleta razvijeni su ELISA kompleti, zasnovani na peptidima kodiranim različitim područjima HCV RNA [20]. Izbor je zaustavljen na peptidu koju kodira jezgra regije HCV RNA i otkrivanje IgM protutijela na njega. Kao i kod testova za otkrivanje anti-HCV (IgG), lažno pozitivne rezultate mogu se zabilježiti u istraživanju IgM anti-HCV. Prema Stevensona D.L. s et al. [21], do 70% bolesnika s kroničnim hepatitisom C s prisutnošću IgM anti-HCV istodobno je imalo povišenu razinu reumatoidnog faktora, što pridonosi pojavljivanju lažnih pozitivnih rezultata. Istodobno, prema Pawlotsky J.M., prisutnost reumatoidnog faktora ne utječe na kvalitetu detekcije IgM anti-HCV [22].

    ODREĐIVANJE ANTIGENA HCV. Mogućnost određivanja HCV antigena privukla je pažnju istraživača odmah nakon otkrića virusa. Teorijski mogućnost ispitivanja njih je pokazano Krawczynski K. et al [23] su otkrili da imunohistokemije u tkivu jetre HCV antigena, pokazuje specifičnost imunofluorescencije sjaj. Upotreba poli- i monoklonskih protutijela s različitim antigenima HCV uspostavila prisutnost HCV jezgre Ag, antigena kodiranih NS3 i NS4 područja HCV RNA u jezgri i u citoplazmi hepatocita, u 60-90% bolesnika s kroničnom HS [24].Meðutim daljnja ispitivanja su pokazala da je antigeni HCV mogu se otkriti u manje od 5% stanica jetre.

    Prvi dijagnostički test sustava ( „Orto antitijela na antigen jezgre (mišje monoklonsko) EL1SA Test sustava” i „Imucheck F-HCV Ag jezgre Kokusai”) za otkrivanje HCV antigena pojavio na tržištu imunoloških proizvoda u 1999. godini. U svrhu detekcije, izabran je Core HCV antigen, koji se određuje pomoću ELISA varijante krute faze dizajnirane na osnovi monoklonskih protutijela. Prve studije o primjeni tih testova su identificirali svoju visoku osjetljivost, specifičnost, i obećavajuće aplikacija, prvenstveno u službi transfuzije krvi [25,26]. osnovana:

  • mogućnost određivanja jezgre Ag HCV u serumu ili plazmi;
  • specifičnost detekcije Core Ag HCV;
  • prisutnost osoba s cirkulirajućim antigenom u krvi seronegativno za anti-HCV;
  • česte (90,3%) detektiranje Core Ag HCV u krvnom serumu uz prisustvo anti-HCV i HCV RNA [25];
  • izravna korelacija između koncentracije HCV RNA i detekcije Core Ag HCV [25];
  • smanjujući fazu "prozora" - od trenutka infekcije do prvog pozitivnog rezultata otkrivanja anti-HCV. Je utvrđeno da HCV jezgre Ag moguće utvrditi od 83% slučajeva (n = 24), sljedeći dan nakon prvog detekciju HCV RNA [26], i duge (prosjek 26 dana) prije pojave anti-HCV [27].

    Postupci otkrivanja RNA HCV. Suvremena faza laboratorijske dijagnostike hepatitisa C može se karakterizirati kao stupanj početka široke primjene molekularnih bioloških metoda za otkrivanje HCV RNA. Prekomjerna većina metoda za otkrivanje nukleinskih kiselina ispitana je za otkrivanje HCV RNA. Načela izrade dijagnostičkih pripravaka i njihova upotreba za otkrivanje virusne DNK ili RNK posvećeni su značajan broj pregleda literature objavljenih u domaćim [28] i stranim publikacijama [29]. Sve ove metode se mogu podijeliti u dvije skupine, koje se temelje na primjeni načela hibridizacije bez amplifikacije odabrane regije nukleinske kiseline ili njihovom amplifikacijom, što značajno povećava snagu razdvajanja metode.

    Metoda hibridizacije na temelju kombinacije obilježenih hibridizacijskih sondi (genetski modificirane ili sintetske molekulske strukture koje sadrže nukleotidne sekvence komplementarne na odabrane RNA mjesta). Rezultati se uzimaju u obzir intenzitetom signala koji dolazi iz oznake u sastavu formiranog kompleksa.

    U hepatitisu C, ova metoda detekcije HCV RNA primarno je pronašla aplikaciju za njegovu identifikaciju izravno u hepatocitima, u testovima označenim kao in situ hibidizacija [30]. Mogućnost izravnog otkrivanja HCV RNA u tkivima omogućila je njegovo otkrivanje u mononuklearnim krvnim stanicama, stanicama žlijezda slinovnica i ostalim tkivima bolesnika s hepatitisom C [31, 32].

    Hibridizacijska metoda koja se koristi za otkrivanje HCV RNA omogućuje da se pokaže prisutnost negativnih (replikacijskih) lanaca HCV RNA, što ukazuje na aktivnu replikaciju virusa [33].

    Metoda lančane reakcije polimeraze - trenutno najčešće korištena metodička metoda, koja je temelj gotovo svih molekularnih bioloških metoda za otkrivanje HCV RNA. Štoviše, određivanje HCV RNA je moguće u kvalitativnim i kvantitativnim verzijama, što je osobito važno za imenovanje, praćenje i procjenu učinkovitosti korištene terapije.

    Glavne varijante metode mogu se identificirati na sljedeći način:

  • lančana reakcija polimeraze (PCR);
  • ligaza lančana reakcija;
  • NASBA;
  • TMA (transkripcijski amplificirana amplifikacijska reakcija, Transkripcija-posredovana amplifikacija).

    Lančana reakcija polimeraze - naširoko koristi i u Rusiji i inozemstvu metodu otkrivanja HCV RNA. Temelji se na procesu s više ciklusa, koji podsjeća na prirodnu replikaciju nukleinske kiseline, svaki ciklus koji se sastoji od uzastopnih stadija.

    Iz ispitivanog materijala (seruma ili plazme krvi, biopsije jetre), HCV RNA se oslobađa. S obzirom da je nukleinska kiselina HCV predstavljena s RNA, a za amplifikaciju, molekula cDNA je potrebna enzim-reverznom transkriptazom, nastaju jednolančane molekule HCV cDNA. U sljedećem koraku, takozvana "cDNA" se dodaje u određeni dio svakog od lanaca HCV cDNA. Primeri - kratki oligonukleotidi, komplementarni poznatim nukleotidnim sekvencama. Usporedba primarne strukture 5'UTR regije genoma različitih izolata HCV otkrila je njihovu neznatnu varijabilnost (između genotipova, homologija nukleotida - 92-98% i unutar genotipa 98-99%). To je pogodilo odabir primera iz ove zone HCV RNA i njihovu upotrebu u dijagnostičkim testnim sustavima proizvedenim u našoj zemlji i inozemstvu.

    Nadalje, uz pomoć enzima DNA polimeraze ovisne o DNA, sintetizirani su novi odsječci DNA. Trenutno je izvor ovog enzima je najčešće korišteni thermophilus termus bakterije (Tth-polimeraza) ili thermophilus aquaticus (Taq-polimeraza). Toplinskom stabilnošću u prisutnosti mangana i magnezijevih iona, enzim se može istovremeno koristiti za sintezu komplementarnih jednolančanih molekula HCV cDNA i amplifikaciju cDNA odabranih porcije. U završnoj fazi jednog reakcijskog ciklusa, sinteza DNA sintetizira nove lance komplementarnih HCV cDNA. Više ponavljanja iz reakcijskog ciklusa dovodi do nakupljanja HCV cDNA fragmenta, koji može biti registriran pomoću polikarilamidne gel elektroforeze, nakon čega slijedi vizualno detekciju, ili pomoću hibridizacije s oligonukleotidne sonde, što povećava osjetljivost i specifičnost dijagnostičkih proizvoda koji se koriste. Upotreba primera obilježenih enzimima omogućava snimanje rezultata PCR pomoću enzimskog imunotestiranja.

    Konstantan cilj istraživača koji oblikuju dijagnostičke sustave za otkrivanje HCV RNA je povećanje osjetljivosti i specifičnosti. Ova svrha služi PCR varijantom, nazvanim "ugniježđena PCR" [34]. Značajka ove metode iz "klasične" je istodobna upotreba dvaju parova primera, od kojih je jedan komplementarno povezan s unutarnjom regijom amplikona dobivenog nakon prvog kruga amplifikacije. Istodobno, vjeruje se da ova varijanta PCR-a ima veći rizik kontaminacije uzoraka, što može dovesti do lažnih pozitivnih rezultata [35].

    Akutna potreba za određivanjem HCV RNA i složenosti povezana s velikim proizvodnjom visoko osjetljivih i specifičnih dijagnostičkih kompleta za PCR dijagnostiku odredili su široku primjenu lijekova proizvedenih u znanstvenim laboratorijima. Usporedba tih ispitnih sustava, tzv. "In-house" testovi, pokazala je veliku varijabilnost osjetljivosti i specifičnosti, kao i nedostatak ponovljivosti rezultata između laboratorija i niza dijagnostičkih lijekova. Na primjer, u prvom europskom krugu "vanjskih" kontrola kvalitete kontrole otkrivanja HCV RNA (1996), od 136 laboratorija samo 22 (16%) su mogli točno odrediti prisutnost ili odsutnost virusne RNA u danim kontrolnim uzorcima [36]. Sličan je rezultat zabilježen u našoj zemlji tijekom sličnog rada u okviru Saveznog sustava vanjske kontrole kvalitete (2001), kada je samo 3 od 14 laboratorija sudionika (21,4%) bilo u stanju ispravno riješiti zadatak [37].

    Uzroci lažno negativnih i lažno pozitivnih rezultata otkrivanja HCV RNA su različiti. S lažno negativnim rezultatima:
    - gubitak ili uništavanje HCV RNA u pripremi za odgovor kliničkog materijala;
    - prisutnost u uzorku inhibitora koji utječu na različite komponente PCR-a. Ovi inhibitori predstavljaju različite kemijske ili proteinske tvari. Na primjer: prisutnost inhibitora reverzne transkriptaze u tekućini sperme nije dopustila otkrivanje HCV RNA i razgovor o mogućnosti provođenja seksualnog puta prijenosa hepatitis C [38]; prisutnost hepaprine [39]; visoka razina krioglobulina u krvnom serumu [40];
    - nepoštivanje toplinskog režima skladištenja i transporta kliničkog materijala. S lažnim pozitivnim rezultatima:
    - kontaminacija između uzoraka (pri obradi uzoraka i / ili radnji s reakcijskom smjesom), uključujući onečišćenje s pozitivnim kontrolnim uzorkom;
    - kontaminacija po proizvodima prije pojačavanja (amplicons) koji mogu zagaditi ispitne uzorke i otopine pomoću aerosola ili laboratorijske opreme.

    Masovno uvođenje PCR dijagnostike definiranjem RNK HCV-a stavilo je tijela praktične zdravstvene skrbi zadatak prelaska na novu razinu provođenja laboratorijskih studija. Izolacija izoliranih zona za glavne faze PCR-a (za pripremu uzoraka, pojačanje, uzimanje u obzir rezultata); Odvojeni kit za svaku fazu reakcije laboratorijske odjeće, automatskih pipeta; postojanje standardnih dijagnostičkih kompleta i, što je najvažnije, dostupnost visoko kvalificiranog laboratorijskog osoblja omogućuje smanjenje razine lažnih rezultata.

    Prvi standardizirani komplet za određivanje HCV RNA ("Amplicor ™ HCV", "Roche Diagnostic Systems") proizveden je 1993. godine. Tijekom godina razvijene su setove za otkrivanje HCV RNA, čija je glavna svrha povećati njihovu osjetljivost i specifičnost. Pri projektiranju „Amplicor TM HCV” koristi se nekoliko originalnih metodoloških tehnika koje omogućuju otkrivanje ili iznad 100 kopija HCV RNA po ml., Kao i da se bave mogućim slučajevima kontaminacije uzoraka i otopina koje se koriste u setu. Pomoću enzima - amperazy i deziksiuridintrifosfata (dUTP) omogućuje da se uništi u prvom ciklusa pojačanja od prethodnih aplikony koje mogu pojaviti onečišćenja. Uništavanje amperazy krajem prvog ciklusa pojačanja (na 55 ° C) ne dopušta enzim uništiti amplikona odabrane kao metu. Važna inovacija bila je uvođenje interne kontrole. Značenje ove inovacije sastoji se u uvođenju uzorka u svakoj sekvenci takvo umnožene HCV RNA dijela koji je zatim detektiran pomoću odgovarajućih klica u reakciji amplifikacije na isti način. Odsutnost pozitivne reakcije u otkrivanju interne kontrole ukazuje na lažno negativnu reakciju na prisutnost HCV RNA u uzorku. Dijagnostika sljedeće generacije bio je lijek označen kao "HCV Amplicor 2.0", koristeći graničnu osjetljivost 50 molekula HCV RNA.

    Sustav za otkrivanje HCV RNA korištenjem Rocheovih kompleta ne može se uzeti u obzir izolirano od njihove instrumentacije, što određuje visoku kvalitetu ispitivanja. Programeri metode nastojali su potpuno automatizirati sve faze reakcije. Sadrzaj ove ideje je sustav „COBASAmpliPrepTM”, što omogućuje da se u potpunosti automatizirati proces ekstrakcije HCV RNA, amplifikacije i detekcije, čime se smanjuje rizik od lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata, uz zadržavanje visoke osjetljivosti i specifičnosti [41].

    Lančana reakcija lanca laziranja detekcije RNA BGC (LCR). Metoda se temelji na sposobnosti enzima "DNK DNA koja ovisi o DNA" da umrežava (ligira) prekida fosfodiesterske veze u DNK u prisutnosti ATP i Mg 2+ iona. Kao i kod "klasičnog" PCR-a za otkrivanje HCV RNA, prva faza LCR-a je reverzna transkripcija kako bi se dobila HCV cDNA. Nadalje, DNK ligaza veže dva para primera (komplementarna na 5 'nekodiranu HCV RNA regiju), koja se dalje pojačavaju. Detekcija produkata amplifikacije LCR provodi se uzimanjem u obzir reakcije antigena i antitijela. Svaki od dva primera označen je različitim haptenom. Prvi od njih zarobljen je antitijelima adsorbiranim na mikročesticama. Nakon postupka pranja, koristeći drugi par antitijela obilježenih fluorescentnom oznakom, selektivno reagiraju s haptenom u proizvodu za amplifikaciju, nakon čega slijedi reakcija supstrata i uzimajući u obzir fluorometar.

    Osjetljivost ove metode iznosi oko 200 primjeraka HCV RNA u ml, što omogućuje da se koristi za rješavanje različitih kliničkih i dijagnostičkih problema [42]. Trenutno, dijagnostički setovi za otkrivanje HCV RNA, temeljeni na LCR-u, proizvodi Abbott.

    Nucleic Acids pojačanje Seaquencence - NASBA -metoda detekcije HCV RNA temelji se na istovremenom djelovanju tri enzima: reverznom transkriptacijom virusa ptičje mijeloblastoma, RNAsease H i RNA polimeraze T7 [43]. Za razliku od RT PCR, reverzna transkripcija HCV RNA se ne provodi u prvoj fazi. Uz pomoć korištenih enzima, u roku od 90 minuta može se dobiti više od 10 (9) kopija HCV cDNA mjesta [44]. Sposobnost provođenja reakcije pri niskim temperaturama (+41 ° C) uvelike pojednostavljuje rad i omogućava napuštanje opreme koja pruža cikličke promjene u visokim temperaturama. Rezultati reakcije se uzimaju u obzir elektrokemijalnom ekscizijom. Unatoč činjenici da je osjetljivost NASBA blizu RT PCR, metoda nije široko korištena za otkrivanje HCV RNA. Trenutno se razvija varijanta metode koja kombinira principe NASBA i "Real-time RT PCR".

    Metoda transkripcije posredovane amplifikacije (TMA) razlikuje se od PCR i LCR prvenstveno po tome što su HCV RNA fragmenti direktno amplificirani, umjesto HCV cDNA. U početnoj fazi reakcije, klica (br. 1) je vezana na HCV RNA i kopija ciljne molekule, cDNA, je sintetizirana uz pomoć enzima (reverzna transkriptaza). Reverzna transkriptaza, koja također ima aktivnost RNaze-H, uništava virusnu RNA u RNA-cDNA hibridu. Zatim je pričvršćen drugi premaz na cDNA molekulu, nakon čega slijedi završetak dvolančane DNA reverznom transkriptazom. Pomoću drugog enzima dolazi do RNA polimeraze, RNA transkripcije s cDNA koja rezultira formiranjem 100 do 1000 kopija ampikona HCV RNA u jednom reakcijskom ciklusu. Primer br. 2 je vezan za ove RNA aplicone s daljnjom sintezom cDNA kopija i uništavanjem RNA molekule. Dodatak primera br. 1 u cDNA nakon čega slijedi završetak dvolančane DNA aktivira sljedeći ciklus amplifikacije. Rezultati reakcije se uzimaju u obzir na lumenometru, budući da nastali RNA amplikoni specifično djeluju u interakciji s DNA sondama označenim kemiluminfora.

    Kao prednosti TMA metode pri otkrivanju HCV RNA, zabilježeno je:

  • reakcija pri nižim temperaturama u usporedbi s PCR;
  • formiranje većeg broja amplikona u jednom reakcijskom ciklusu, što smanjuje vrijeme potrebno za dobivanje konačnog rezultata (30-40 minuta) i povećava osjetljivost reakcije (50 kopija / ml) [45].
  • smanjujući rizik kontaminacije, budući da je RNA manje stabilna od DNA.

    Usporedne studije o otkrivanju HCV RNA pomoću TMA i drugih metoda pokazale su visoku razinu podudarnosti rezultata [45].

    Kombinacija načela hibridizacije i amplifikacije temelji se na postupku otkrivanja HCV RNA, označenog kao "Metoda hibridizacije rabeći razgranate sonde ili degradirane DNA test (bDNA) [46]. Za razliku od PCR u ovom testu, pojačanje ne uključuje molekule HCV cDNA, već signal. Reakcija je provedena na pločicama s 96 jažica na kojima su adsorbirani fragmenti HCV RNA iz 5 'netranslatirane zone i HCV RNA jezgre gena. Naknadnim vezivanjem na sintetsku razgrananu DNA molekulu i hibridizacijom s uzorkom obilježenim alkalnom fosfatazom s pojačivačem i kasnijom enzimskom reakcijom postiže se oštar porast signala. Dijagnostika treće generacije (Bayer 3.0 Hepati-tis C Virusna RNA Kvantitativnost bRNA) sada je na dijagnostičkom tržištu, s osjetljivošću koja omogućuje otkrivanje 520 IU / ml (2500 primjeraka HCV RNA).

    KVANTITATIVNO OTKRIVANJE HCV RNA. Kvantitativna varijanta PCR-a se koristi za procjenu koncentracije HCV RNA. Početku, koncentracija HCV RNA je pokušao karakterizaciju rednih vrijednosti, kao što su „+”, „++” itd vizualno reflektirajuća Intenzitet vrpci dobivenih elektroforeze amplifikacijskih produkata ili ograničavajućim razrjeđenjima, odnosno prisutnošću pozitivnog rezultata u konačnom titracijska točka. Poteškoće u standardiziranju svih faza PCR ne dopuštaju objektivnu procjenu koncentracije HCV RNA, što dovodi do značajnih pogrešaka u interpretaciji dobivenih rezultata.

    Trenutačno, rezultati istraživanja su izraženi u kvantitativnim jedinicama: broj kopija HCV RNA sadržan u 1 ml., U apsolutnim ili logaritamskim uvjetima (log 10). Temelji se na činjenici da je koncentracija HCV RNA ukazuje na broj virusnih čestica, taj podatak se naziva „virusa ekvivalent (ekv)”, uz dodatak prefiksa k (kg) ili tisuća M (ppm). Drugi način za izražavanje broja čestica virusa je njihov ekvivalent težine. Na primjer, u gramima ili pikogramima (1 pg odgovara oko 1 mil. Eq). Raznolikost primijenjenih količina otežava tumačenje rezultata dobivenih u različitim laboratorijima. Stoga, WHO Expert odbor biološkoj standardizaciju učinila „međunarodni referentni materijal” sadrži HCV RNA (liofilnovysushennaya krvni serum koji sadrži HCV RNA je genotipove 1), što je koncentracija koja je izražena u internacionalnih jedinica (IU / mL) [47]. Posebni faktori omogućuju nam da preračunate dobivene vrijednosti koncentracije u međunarodne jedinice.

    Gotovo sve varijante PCR koriste se za određivanje koncentracije HCV RNA. Istovremeno, dijagnostičkim lijekovima prikazani su brojni specifični zahtjevi, od kojih je najvažnije stroga linearnost rezultata, tj. povećanje signala detektirane reakcije s povećanjem koncentracije HCV RNA u uzorku ispitivanja. Korištenje internih standarda s različitim sadržajem HCV RNA izbjegava mnoge metodološke pogreške koje mogu utjecati na konačni rezultat reakcije [28]. Osjetljivost primjenjuje dijagnostiku (Amplicor HCV Monitor v2.0; LCX HCV RNA test kvantitativno) može otkriti HCV RNA s početkom na 50 kopija po ml [48.49], što je posebno važno za predviđanje učinkovitosti antivirusne terapije izabrao.

    PCR u stvarnom vremenu ("real-time RT PCR") -jedna od najpoželjnijih mogućnosti za kvantitativnu metodu za otkrivanje HCV RNA. Metodu i njegov hardver zajednički su razvili stručnjaci tvrtke Roche i Percin Elmer. Princip metode je sposobnost hidrolize cDNA sekvenci u smjeru 5 '---- 3'. U reakciji se koristi posebna sonda, označena s dvije fluorescentne boje s bliskom apsorpcijom i fluorescentnim maksimumima. U prisutnosti produkata amplifikacije, Tag-polimeraza cijepa sondu koja sprječava prijenos energije iz jedne molekule boje na drugu i time sprječava oslobađanje kvantne svjetlosti. Poseban uređaj uzima u obzir reakciju i matematičko modeliranje fluorescentne kinetike u svakoj fazi reakcije, što omogućuje dobivanje informacija o početnoj koncentraciji HCV RNA.

    Značajka "real-time PCR" je mogućnost dobivanja informacija o prisutnosti HCV RNA izravno u reakcijskom procesu, što omogućuje smanjenje vremena analize u kombinaciji s visokom osjetljivošću i linearnosti dobivenih rezultata [50]. Prema Tatiana Yashini i koautorima, ova metoda omogućuje detektiranje od 200 kopija HCV RNA u ml. [51].

    Postupci genotipizacije RNA VHC. Određivanje povezanosti HCV-a s određenim genotipom i podtipom utvrdilo je njegovu primjenu za rješavanje ne samo čisto znanstvenih, već i praktičnih problema. Na primjer: traženje izvora infekcije tijekom epidemije hepatitisa C ili predviđanje učinkovitosti korištene terapije.

    "Zlatni standard" HCV genotipizacije je izravno određivanje primarne strukture HCV RNA s njegovom kasnijom filogenetskom analizom [52], što omogućuje jasno karakteriziranje ovog izolata virusa. Te informacije možete dobiti pomoću sljedećih opcija slaganja:

  • izravno;
  • zasnovano na standardnom kloniranju;
  • sekvencioniranje produkata PCR reakcije (ograničeno sekvenciranje).
    Usprkos točnosti rezultata, metoda izravnog redoslijeda ne koristi se u praktičnoj zdravstvenoj zaštiti zbog tehničkih poteškoća u provođenju istraživanja i visokim troškovima rada. Istovremeno, dostupnost informacija o primarnoj strukturi HCV RNA je referentna metoda genotipizacije, a dostupnost automatskih uređaja za sekvenciranje pojednostavljuje rezultate.

    Trenutno, u većini slučajeva, metode temeljene na korištenju PCR-a s tip-specifičnim primerima koriste se za genotipiranje HCV RNA. Prvo genotipiranje HCV RNA provedeno je u N. Okamoto et al. 1992. godine s RT-PCR [53], što uključuje dva koraka amplifikacije. Prva od njih je provedena s univerzalnim primerima za sve genotipove HCV-a, a druga s mješavinom tip-specifičnih primera kako bi se dobili specifični produkti amplifikacije različitih duljina. Prisutnost određenog genotipa prosuđena je veličinom amplificiranog produkta. Kao početnice koriste se specifične sonde, informacije o kojima se nalazi u 5'UTR, Core ili NS5 područjima RNKVS [54].

    Hibridizacija pojačanih produkata s genski specifične sondi adsorbiranih (s 5 „netranslatirane regije HCV RNA), adsorbirani na nitroceluloznu membranu, nalazi se na osnovi ispitivanja - označeno‘INNO-Lipa HCV, Inno-genetikom’[55]. U početku je uz pomoć ovog testa moguće tipizirati genotipove: la; lb; 2a; 2b; 3a; 3; 4 i 5a. Nakon test-sustav 2. generacije „INNO-Lipa HCV II, Innogenetics” dopustiti razlikovati sve genotipove 6 i daljnje 2c; 2d; 2i; 3c; 4a-h; 6a i 10a. [56]

    Metodološki arsenal HCV genotipizacije nije ograničen na gore navedene postupke i obuhvaća različite metode:

  • genotipizacija na temelju analize restrikcijskih profila amplificiranih produkata (RFLP). Produktovi amplifikacije HCV RNA fragmenata (5'UTR-regije ili NS5 HCV RNA regije) digestiraju se restrikcijskim enzimima. Formirani fragmenti razlikuju se po dužini, ovisno o restrikcijskim mjestima unutar kojih se cijepaju. Rezultati elektroforeze i njihova usporedba omogućuju identificiranje HCV genotipa u ispitnom uzorku [57]. Usporedba rezultata genotipizacije primjenom PCR-RFLP metode sa sekvenciranim podacima pokazala je visoku razinu podudarnosti rezultata - 95% [58].
  • genotipizacija na temelju SSCP metode (procjena konformacijskog polimorfizma pojedinačnih DNA fragmenata). Kao predmet studije odabrano je 5'-netranslatirano područje HCV RNA, koja ima minimalni niz nukleotidnih varijacija koje razlikuju genotipove jedna od druge. Ova činjenica određuje mogućnost primjene zajedničkih primera za genotipizaciju [59].

    SEROTYPING Anti-HCV Istraživanje je moguće zahvaljujući P.Simmonds i sur, utvrditi prisutnost protutijela usmjerenih na epitope koji genotipspetsifichnym informacija kodiranih HCV RNA NS4 zona [60]. S ELISA za diagnosticum konstruiran na bazi sintetskih peptida, koji može razlikovati slučajeva hepatitisa C, koje su uzrokovane virusima 1, 2 i 3 genotip (89% podudaranja s rezultatima genotipizaciju). Razvoj testsistem koristeći sintetske i rekombinantnih antigena kodiranih od NS4 i središnje zone HCV RNA virus poboljšane tipizirani varijante popis i sudac prisutnost podvrsta (1a, lb, 2a, 2b, preko i 4a) [61,62]. Trenutno oslobađanje komercijalni dijagnostičkih pripravaka za serotipizacije u izvedbi licu ELISA - „NA Mureh 1-6 Pokus Serotipiziranje, Murex Diagnostics”, a u varijanti „immunoblot” - RIBA HCV ispitivanje serotipiziranje, Chiron Diagnostics. Usporedni podaci serotipizacije i genotipizacije HCV RNA pokazali su visoku razinu koincidencije rezultata, te su dosegnuli 95% [62].

    Serotipizacija anti-HCV u usporedbi s genotipiziranjem HCV RNA ima prednosti kao jednostavnost reakcije i niže troškove. Istovremeno, ova metoda ni u kom slučaju ne može zamijeniti genotipizaciju. Rezultati serotipizacije anti-HCV-a svjedoče o vrsti anti-HCV u tekućoj ili prethodno prenesenoj infekciji. U nekim slučajevima (najčešće hemofiličare) zabilježen istovremenu detekciju različitih anti-HCV podtipova koje mogu biti indikativni za infekciju množine različitih genotipova HCV i podtipova [63]. Osim toga, kod bolesnika s hepatitisom C u pozadini izrečene RNA imuniteta može biti jedini marker, što ga čini nemoguće provesti serotipizacije.

    OTKRIVANJE I TRAKCIJA REZULTATA ISPITIVANJA SEROLOŠKIH MARKERAČA HCV-INFEKCIJE. Širok raspon seroloških biljega tekuće ili prethodne HCV infekcije, kao i moderne metodološkog okvira može riješiti mnoge probleme u laboratorijskoj dijagnostici i prevenciji hepatitisa C. Tablica 2 prikazuje broj serološke markere HCV infekcije i najvažnija područja njihovog ispitivanja.

    Tablica 2
    Dijagnostička značajnost markera tekuće ili prethodne HCV infekcije

    probir
    u službi
    krv

    potvrđen
    IZJAVE
    rezultat
    + anti-HCV

    Jedan od glavnih zadaća laboratorijske dijagnoze hepatitisa C je dijagnoza i odvajanje akutnih od kroničnog hepatitisa C identificiranjem seroloških markera infekcije. Kao i kod drugih akutnih virusnih hepatitisa, serološki biljezi HCV infekcije dosljedno pojavljuju i nestaju tijekom tijeka infekcije i proces oporavka (Slika 2).

    HCV RNA može se otkriti 7. do 21. dana nakon HCV infekcije i anti-HCV na dan 20 do 150 (u prosjeku, 50. dan) [64]. Spektar anti-HCV može se razlikovati ovisno o razdoblju akutnog hepatitisa. Vjeruje se da prvi otkriva protutijela koja su kodira Core i NS5 od HCV RNA regije. Anti-HCV na proteine ​​kodirane NS4 zonom nije prisutan u akutnoj fazi hepatitisa C [65]. Usporedna studija razine koncentracije anti-HCV, spektar anti-HCV i HCV RNA u bolesnika s akutnim i kroničnim hepatitisom pokazuju neke razlike [66]. Po našem mišljenju, te se razlike mogu povezati s individualnim karakteristikama infektivnog procesa, što smanjuje njihovu dijagnostičku vrijednost.

    Sl. 2. akutni hepatitis C

    Analogno laboratoriju dijagnozom hepatitisa A i B se očekuje na antitijela za HCV IgM klasa će biti velik kao dijagnostičke vrijednosti IgM anti-HAV i IgM anti-HBc. Međutim, ovi ispitivanje serum pacijenata s akutnim i kroničnim hepatitisom C, u prisutnosti IgM anti-HCV ukazuje na njihovu identifikaciju česte među tim pacijentima - 50-93% i 50-70%, odnosno [67,68], ti rezultati pokazuju da se otkrivanje IgM anti -HCV se ne može koristiti kao marker akutne HCV infekcije.

    Odsutnost marker koji tvrdi da je "zlatni" standard akutnog hepatitisa C određuje potrebu za sveobuhvatnom procjenom dobivenih rezultata na temelju dinamičkog promatranja pacijenta.

    Jednako važno područje primjene visoko osjetljivih metoda za testiranje HCV RNA - smanjenje rizika od posttransfuzije hepatitis C. Potreba za takvim radovima određena je prisutnošću faze "prozora", tj. vrijeme između prvog detekciju HCV RNA i pojavom anti-HCV, kao i postojanje davatelja krvi (pacijente s kroničnim hepatitisom C) koji imaju HCV RNA u odsutnosti anti-HCV. Sadašnji sustav praćenja donacija krvi za HCV uključuje samo testiranje anti-HCV-a, rizik od ugovaranja hepatitisa C i dalje postoji. Polazeći od toga, legitimno je postaviti pitanje testiranja krvi za prisutnost HCV RNA suvremenim metodama (NAT metode su "test amplifikacije nukleinskih kiselina"). Čimbenik ograničavanja ovog rada je visoka cijena istraživanja. Da bi se smanjili troškovi, preporučuje se testiranje bazena krvnog seruma (od 8 do 96 uzoraka) uz naknadno traženje pozitivnog uzorka u slučaju otkrivanja HCV RNA u bazenu seruma. Uzimajući u obzir čimbenik razrjeđivanja željene HCV RNA kada su krvni serumi napuhani, pitanje korištenja najosjetljivijih metoda detekcije postaje od glavne važnosti. Vjeruje se da upotreba dijagnostičkih kompleta za NAT - s osjetljivošću od 50-100 IU / mL može značajno smanjiti rizik od posttransfuzijskog hepatitisa C.

    Bez sumnje, popis problema koji se mogu riješiti prilikom testiranja cijelog spektra markera HCV infekcije nije ograničen na ta dva područja. Dostupnost suvremenih metoda ispitivanja u kombinaciji s poznavanjem njihovih sposobnosti otvara široke mogućnosti za znanstveno i primijenjeno istraživanje hepatitisa C.

    • Share Tweet Pin it
    Prethodni Članak

    Što je nositelj virusnog hepatitisa C?

    Sljedeći Članak

    Kako se zaštititi od hepatitisa C?

    Vezani Članci Hepatitis

    Napajanje

    Dijeta za hepatitis A

    Napajanje

    Kronični hepatitis: što učiniti, znakove, dijagnozu, kako liječiti bolest i prevenciju

    Napajanje

    Norme opće analize krvi (UAC) i opće analize urina (OAM)