Istraživanje virusnog hepatitisa korištenjem metode If

IFA hepatitis C učinkovito određuje, ovo je jedna od metoda dijagnosticiranja bolesti, temeljena na interakciji antigena i protutijela. Imunokemijska reakcija ELISA-om (enzimska imunoanaliza) omogućuje otkrivanje anti-HCV antitijela u tijelu. Metoda omogućuje dijagnosticiranje humanog hepatitisa C na diferencijalni način, kako bi se odredio stupanj razvoja bolesti, kako bi se predvidio njezin tijek. Detekcija specifičnih seroloških markera također omogućuje odabir učinkovitog antivirusnog liječenja patologije.

Značajke metode

Analiza za otkrivanje protutijela virusu hepatitisa tipa C u ljudskoj krvi vrši se vezivanjem alogenog mikroorganizma (antigena) na molekulu imunoglobulina. Priloženi enzim enzima igra ulogu odlične oznake. To omogućuje jednoj pratiti imunokemijsku reakciju, kao i jednu od njegovih komponenti.

Kao komponente enzimskog imunološkog testa, mogu djelovati:

• antitijela;
• antitijela označena posebnim enzimom;
• antigena;
• supstrati enzima;
• boje indikatora.

Kada ini štetni mikroorganizmi ulaze u ljudsko tijelo, zaštitne sile počinju proizvoditi imunoglobuline (protutijela). Nakon toga djeluju na antigene i neutraliziraju ih. Takva interakcija dovodi do stvaranja antitijela-antigena, koji ima svoje pokazatelje količine i kvalitete. Oni ukazuju na prisutnost ili odsutnost HCV infekcije u tijelu. U slučaju da je rezultat enzimskog imunološkog testa pozitivan, javlja se virus hepatitisa tipa C.

Suvremene tehnologije u medicini mogu znatno skratiti vremenski okvir za otkrivanje virusa hepatitisa koji se javlja u akutnom obliku. Zahvaljujući dijagnostičkim sustavima treće generacije, također se čini moguće povećati specifičnost i osjetljivost imunokemijske reakcije.

Glavni studijski materijal za IFA je venska krv (uključujući i donorsku krv). Prema indikacijama može doći do povlačenja cerebrospinalne tekućine ili amnionske tekućine.

Pozitivan rezultat ELISA metode za hepatitis tip C ne znači uvijek prisutnost virusne infekcije u tijelu. U više od 35% slučajeva nema virusa antigena koji se nalaze u krvi, što dovodi do lažnog pozitivnog rezultata.

Metoda vam omogućuje praćenje kvantitativnih i kvalitativnih promjena, razlikujući akutne i kronične oblike hepatitisa C. Međutim, kako bi se odredila aktivnost patološkog procesa, to je neučinkovito. Da bi se preciznije potvrdila prisutnost HCV infekcije, također bi se trebale koristiti i druge metode dijagnoze patologije.

Indikacije za procjenu utjecaja na okoliš

Metoda detekcije vrste i kvantitativne koncentracije stranih mikroorganizama (antigena) uz pomoć imunoglobulina i enzima provodi se u nekoliko faza. Na temelju promjene boje i kvantitativnog indeksa enzima, liječnik može dijagnosticirati osobu s hepatitisom tipa C.

Najčešće se javljaju sljedeće kategorije ljudi:

1. Pacijenti koji su podvrgnuti operaciji, kao i bolesti unutarnjih organa i sustava.
2. HIV-inficiran (inficiran virusom humane imunodeficijencije). Veliki postotak ljudi u ovoj skupini su ovisnici o drogama.
3. Medicinski radnici.
4. Policijski službenici.
5. Trudnice.

Hepatitis virusnog porijekla često dovodi do razvoja raka (na primjer, raka jetre). Zato da doniraju krv u imuno testom treba prvi ljudi koji ulaze u glavnu skupinu rizika, te bolesnici s akutnim i kroničnim hepatitisom.

Prema pokazateljima, liječnik može propisati ELISA pacijentima s dijagnozom:

• STI (infekcije prenesene spolnim putem);
• bolesti virusnog podrijetla (papiloma virus, herpetička infekcija, hepatitis, itd.);
• alergijska priroda patologije;
• status imunodeficijencije;
• onkologija.

Prednosti i nedostaci

IFA hepatitis C može se otkriti u ranoj fazi, kao iu asimptomatskim i žućkastim oblicima. Kao i svaka dijagnostička metoda, ima niz prednosti i nedostataka.

Među pozitivnim obilježjima ELISA, stručnjaci prepoznaju:

1. Točnost kvalitativnih i kvantitativnih pokazatelja. Osjetljivost metode prelazi druge studije za otkrivanje hepatitisa desetak puta.
2. Značajno smanjenje vremena otkrivanja virusne infekcije kroz moderne dijagnostičke sustave.
3. Niska cijena u usporedbi s drugim studijama o otkrivanju hepatitisa kod ljudi.
4. Mogućnost dijagnoze bolesti jetre u ranoj fazi u odsutnosti teških simptoma.
5. Korak-po-korak istraživanje pomoću automatiziranih procesa.

Unatoč visokoj točnosti ELISA, više od 35% slučajeva s pozitivnim rezultatom hepatitisa u pacijentu nije otkriven. Često test ne potvrđuje patologiju, što ukazuje na sumnjivu ili negativnu posljedicu.

Pouzdanost studije utječe na jedan ili više stupnjeva:

1. Prijam lijekova.
2. Poremećaji metaboličkih procesa u tijelu.
3. Prisutnost nekih patologija kronične prirode koja promiče aktivnu proizvodnju imunoglobulina.

S obzirom na nedostatke rezultata in vitro iskustva s ELISA metodom, dodatne studije se daju pacijentu. Za pouzdano otkrivanje antitijela na infekciju virusom hepatitisa C koristi se PCR (polimeraza lančana reakcija) ili RIBA (rekombinantna imunoblotiranje) metoda.

Ono što identificira i kako se studija provodi

Analiza pomoću ELISA može otkriti širok raspon bolesti kod ljudi.

Uz otkrivanje antitijela hepatitisa svih vrsta, pozitivan rezultat testa može ukazivati ​​na prisutnost sljedećih patologija u tijelu:

• virus humane imunodeficijencije;
• herpetička infekcija;
• sifilis;
• STI (ureaplazmoza, klamidija, itd.);
• HPV;
• citomegalovirus.

Istraživanje je također jedna vrsta markera za otkrivanje malignih neoplazmi, patologije genetski, hormonalni poremećaji, kao i neuspjeha u endokrini sustav.

Priprema za dostavu biološkog materijala za otkrivanje virusa hepatitisa C podrazumijeva odbijanje uzimanja hrane i lijekova 12 sati prije studije. Preduvjet je i apstinencija od pijenja alkohola, masne, pržene i slane hrane.

Izravna metoda ELISA

Glavni koraci u provođenju izravnog testa su sljedeći:

1. U početku laboratorijski radnik izvaja krv iz vena (ili drugog biološkog materijala), a zatim ga stavlja u posebne spremnike.
2. Alienski mikroorganizmi (antigeni) počinju se pridružiti njima u roku od 20 minuta.
3. Specijalist dodaje imunoglobuline (antitijela) na pronađene antigene kako bi stvorio imuni odgovor. U tom slučaju komponente ostaju nekoliko sati.
4. Nezaobilazni antigeni uklanjaju se izljevanjem sadržaja iz spremnika.
5. Materijal je ispran s otopinom, a zatim obrađen enzimima i ostavljen jedan sat.
6. Boja i koncentracija sadržaja analiziraju se pomoću kolorimetrije.

Ako kvantitativni indeks sadržaja premašuje dopuštene standarde, to ukazuje na prisutnost virusa hepatitisa C u ljudskom tijelu.

Neizravna metoda ELISA

To podrazumijeva interakciju neobilježenih imunoglobulina s antigenima, na koje su pričvršćena naknadno označena antitijela.

U početku pacijent uzima krv iz vena. Zatim se biološki materijal stavi u posebne posude oko pola sata. U ovim neobilježenim protutijelima pričvršćeni su na zidove spremnika. Zatim se dodaju antitijela koja su obilježena. Kao rezultat njihove interakcije nastaje imunološki kompleks "antitijelo-antigen".

Nakon 4 sata, sadržaj spremnika se izlije i uklanjaju se nepovezani mikroelementi. Laboratorijski pomoćnik dodaje obilježena antitijela na već formirani kompleks, s "imunološkom reakcijom" antitijelo-antitijelo-antigen ".

Nakon ponovljenog uklanjanja labavih mikronutrijenata, poseban enzim se dodaje u spremnik mijenjajući boju i kvantitativne indekse sadržaja. Na temelju dobivenog rezultata stručnjak provjerava podatke i zaključuje.

Objašnjenje rezultata

Prilikom provođenja ELISA, pozornost se posvećuje prisutnosti ili odsutnosti protutijela klasa IgA, IgG i IgM. Kvantitativni indeksi tih antitijela uspoređeni su s podacima posebne tablice.

Prema njezinim riječima, tumačenje rezultata je kako slijedi:

1. Ako sva tri tipa pokazatelja nisu određena, osoba je potpuno oporavljena.
2. S istodobnim pozitivnim rezultatom za sva tri indikatora primjećuje se akutni oblik virusne infekcije.
3. Ako se utvrdi protutijela IgG klase, a preostale klase nisu otkrivene, osoba je razvila postinfektivni imunitet.
4. Kronični karakter bolesti označen je pozitivnim indeksima protutijela klasa IgG i IgA. Međutim, oni ostaju nepromijenjeni čak i nakon liječenja lijekom.
5. S pozitivnim otkrivanjem svih tri tipa antitijela može doći do recidiva kronične prirode hepatitisa.

Prema statističkim podacima razina IgM počinje rasti nekoliko dana nakon što infekcija ulazi u tijelo, što ukazuje na ranu fazu patologije. IgG antitijela obično se javljaju 2 tjedna nakon pojave bolesti i nalaze se u krvi dulje vrijeme (čak i nakon oporavka). IgA antitijela su otkrivena nakon 2 tjedna, a nakon terapije lijekom njihova koncentracija u tijelu se smanjuje.

Ne zaboravite da hepatitis C ELISA pozitivno ne ukazuje uvijek na infekciju. Često se smatra da je test lažno pozitivan, što zahtijeva ponovno davanje krvi. U nekim slučajevima bolesniku se dodjeljuju dodatne studije kako bi se preciznije odredili krvni broj.

Glavni kriterij za ispitivanje je precizna identifikacija kvantitativnih i tipičnih pokazatelja. Omogućuju vam da odredite ne samo prisutnost virusa, već i oblik bolesti. Dijagnoza hepatitisa C uz pomoć suvremenih metoda omogućit će započinjanje pravovremene medicinske terapije i minimiziranje negativnih posljedica.

ELISA metoda u otkrivanju hepatitisa

Moderna medicina zna puno bolesti jetre. Među najčešćim i najopasnijim je HCV (virusni hepatitis C), budući da se ta infekcija često javlja asimptomatski i dovodi do kritičnih komplikacija, do smrtonosnog ishoda. Zato je od najveće važnosti pravodobna dijagnoza bolesti, provedena različitim metodama, uključujući enzimski imunoanalizu (ELISA), za otkrivanje protutijela na virus u krvi.

HCV infekcija za dijagnozu hepatitisa

U laboratorijskoj dijagnostici koriste se dvije vrste metoda za otkrivanje hepatitisa C (HCV infekcija):

1. Serološki temelju detekciju antitijela na virus hepatitisa C (HCV protiv), također se zove ELISA (enzimski vezanog imunosorbentnog ispitivanja). Je usmjeren na otkrivanje anti-HCV (IgM i IgG markeri) se koristi za probir i dijagnozi hepatitisa C. Oba od ovih markera može detektirati u krvi (plazmi), u različitim kombinacijama, što zahtijeva ispravan klinički značenje. Da se potvrdi prisutnost anti-HCV ispitivanja se provodi RIBA (rekombinantni imunoblot).
2. Molekularno-biološki, s ciljem otkrivanja RNA virusa. HCV RNA test je dodijeljen sljedećim skupinama pacijenata:
   • s identificiranim anti-HCV;
   • bez otkrivenog anti-HCV, ali s utvrđenim epidemiološkim i kliničkim podacima koji zahtijevaju uklanjanje akutnih oblika HCV.

RNA virusa može se otkriti u krvi 14 dana nakon infekcije, tj. Prije pojave anti-HCV koji se javljaju u prva 2-3 mjeseca.

Za konačnu potvrdu dijagnoze (pogotovo kada se otkrije samo jedan od dva biljega HCV infekcije), stručnjaci preporučuju da se HCV anti-HCV i HCV RNA ponavlja nakon određenog vremena.

Identifikacija hepatitisa ELISA-om

Za rano otkrivanje virusnog hepatitisa, posebno asimptomatski, anicteric oblika seruma detektirati prisutnost virusne proteine ​​(antigeni) ili njihovih protutijela (proizvedena od strane imunološkog sustava u prodiranja virusa tijela) pomoću imuno testom (PUO). To je univerzalni postupak za imunološki dijagnozu svojoj suštini je proučiti interakciju „antigen-protutijelo”. Naširoko koristi u mnogim zemljama svijeta.

Određivanje HCV ELISA-om omogućuje ne samo točne dijagnoze, ali i procijeniti prirodu bolesti, kao i odabir kvalitetnog i učinkovitog liječenja konvencionalnim lijekovima (interferon, ribavirin), lijekovi izravnog djelovanja (sofosbuvir, Daklatasvir) i njihova generička Indiji i Kini.

Ako je moguće, dijagnoza virusnog hepatitisa ELISA-e nadopunjuje PCR (lančana reakcija polimeraze) koja omogućuje određivanje prisutnosti virusa hepatitisa u krvi RNA.

Koliko je točno metoda enzimskog imunotestiranja

Prema mišljenju stručnjaka, točnost ELISA metode je 95%, odnosno u 95 od 100 pacijenata uz pomoć enzimskog imunotestina moguće je detektirati prisutnost i količinu HCV protutijela - IgM i IgG u krvi. Ako je rezultat pozitivan, može se dijagnosticirati HCV kontakt s tijelom (ne sam virus, već prisutnost protutijela u krvi, što može biti posljedica već prenesene bolesti).

Međutim, unatoč visokoj osjetljivosti enzimski povezanog imunosorbenskog testa (ELISA), 40% bolesnika s pozitivnim rezultatom ne može se otkriti, što ukazuje na sumnjivi ili lažno pozitivni rezultat.

Da bi se potvrdila ispravnost ELISA rezultata, RIBA (rekombinantno imunoblotiranje) koristi se za preciznije proučavanje otkrivanja protutijela na HCV.

Ispitivanje anti HCV jezgre

Učinkovite studije za određivanje prisutnosti protutijela na hepatitis viruse uključuju anti-HCV jezgru koja se koristi kao potvrdni test za dobivanje "neizvjesnih" rezultata.

Ako se anti-HCV jezgra detektira u serumu krvi kod razrjeđenja od 1: 1000, vrlo je vjerojatno da se može ustanoviti pozitivan rezultat, tj. Da je ta bolest prisutna.

Ako su uzorci u razrjeđenju 1: 1000 negativni, u razrjeđenju 1: 200 su pozitivni, potrebna je studija za prisutnost virusne RNA. U ovom slučaju, najvjerojatnije, ne postoji HCV infekcija.

Važno je razumjeti da u kroničnih oblika HCV protutijela otkrivena su stalno i na otklanjanje (izlučivanje virusa stanica) traju 4-8 godina ili više. Jer prisutnost anti-HCV nije uvijek indikativno infekcije organizma i ne dopušta cilj zaključci o aktivnosti protsessa.Dlya dobiti točne podatke o količine virusa, stupanj oštećenja jetre, trajanje infekcije, i razlike akutnih i kroničnih oblika bolesti preporuča koristiti definiciju spektra antitijela na različite HCV peptida. Također je važno promatrati njihovu kvantitativnu i kvalitativnu dinamiku.

Istraživanja o virusu hepatitisa C

Protutijela na hepatitis C virus (ukupno)

Protutijela na hepatitis C virus u serumu obično su odsutna
Ukupna antitijela na virus hepatitisa C su protutijela klasa IgM i IgG, usmjerena na kompleks strukturnih i nestrukturnih proteina hepatitisa C virusa.
Ova studija je prikazana kako bi se identificirali bolesnici s FAR. Ukupno protutijela na virus hepatitisa C mogu se otkriti u prva dva tjedna bolesti, a njihova prisutnost ukazuje na moguću infekciju virusom ili prenesenom infekcijom.

Nije moguće jednoznačan odgovor na temelju rezultata ovog testa, budući da test određuje ukupna protutijela IgM i IgG. Ako je to rano razdoblje akutnog virusnog hepatitisa C, to potvrđuju i protutijela IgM, a ako je to razdoblje oporavka ili stanje nakon HCV, to upućuje na IgG antitijela.

IgG antitijela na HCV mogu se zadržati u krvi convalescents 8-10 godina s postupnim smanjenjem njihove koncentracije. Možda kasnije otkrivanje antitijela godinu ili više nakon infekcije. U kroničnom hepatitisu C, ukupna protutijela su kontinuirano određena. Stoga, kako bi se pojasnilo vrijeme infekcije, potrebno je odvojeno identificirati protutijela IgM klase na HCV.

Procjena rezultata istraživanja

Rezultat istraživanja je izražen kvalitativno - pozitivan ili negativan. Negativan rezultat istraživanja ukazuje na odsutnost ukupnih protutijela (JgM i JgG) na HCV u serumu. Pozitivni rezultati - detekcija ukupnih antitijela (JgM i JgG) HCV ukazuju na početnoj fazi akutnog hepatitisa, akutne infekcije, vrijeme rane faze oporavka, virusne hepatitisa C ili kroničnim virusnim hepatitisom C.

Međutim, otkrivanje ukupnih protutijela na HCV nije dovoljno za dijagnosticiranje HCV-a i zahtijeva potvrdu da se izuzme rezultat lažnog pozitivnog testa. Stoga, kada se dobije pozitivan test probira za ukupna protutijela na HCV u laboratoriju, provodi se potvrda testa. Konačni rezultat određivanja ukupnih protutijela na HCV daje se zajedno s rezultatom potvrđivanja testa.

Protutijela na hepatitis C virus JgM

Protutijela na hepatitis C virus JgM u serumu obično su odsutna. Prisutnost JgM klasa antitijela na HCV u pacijentovoj krvi omogućuje provjeru aktivne infekcije. Protutijela klase JgM mogu se otkriti ne samo kod akutnog HCV, već i kod kroničnog hepatitisa C.

Protutijela klase JgM do HCV pojavljuju se u bolesnikovoj krvi 2 tjedna nakon razvoja kliničke slike akutnog virusnog hepatitisa C ili pogoršanja kroničnog hepatitisa i obično nestaju nakon 4-6 mjeseci. Smanjenje njihove razine može ukazivati ​​na učinkovitost terapije lijekovima.

Procjena rezultata istraživanja

Rezultat istraživanja je izražen kvalitativno - pozitivan ili negativan. Negativni rezultat istraživanja ukazuje na odsutnost JgM antitijela na HCV u serumu. Pozitivni rezultati - otkrivanje HCV protutijela na JgM označava početnoj fazi akutnog virusnog hepatitisa, akutne infekcije, vrijeme rane faze oporavka ili aktivnog kroničnim virusnim hepatitisom C.

Detekcija hepatitisa C virusom PCR metodom (kvalitativno)

Virus hepatitisa C u krvi obično nema.
Za razliku od seroloških metoda za dijagnozu HCV, gdje su otkrivena antitijela na HCV, PCR može kvalitativno i kvantitativno detektirati prisutnost HCV RNA izravno u krvi. Detektirajući fragment u oba je očuvana regija hepatitisa C genoma.

Detekcija antitijela na HCV potvrđuje činjenicu samo inficirani pacijent, ali ne dopušta procijeniti aktivnost infektivnog procesa (replikacije virusa), prognozu bolesti. Osim toga, antitijela na HS virus otkriven u krvi bolesnika s akutnim i kroničnim hepatitisom, kao i na one pacijente koji su bolesni i oporavio, ali često protutijela pojavljuju se u krvi samo nekoliko mjeseci nakon početka kliničke bolesti, što je teško dijagnosticirati. Detekcija virusa u krvi pomoću PCR metode je više informativna dijagnostička metoda.

Kvalitativno otkrivanje HCV putem PCR-a u krvi svjedoči o viremiji, omogućuje procjenu reprodukcije virusa u tijelu i jedan je od kriterija za učinkovitost antivirusne terapije.

Analitička osjetljivost PCR metode je najmanje 50-100 virusnih čestica u 5 ul, koja je izolirana iz DNA uzorka, a specifičnost je 98%. Otkrivanje HCV RNA PCR-om u ranim fazama virusne infekcije (po mogućnosti 1-2 tjedna nakon infekcije), s obzirom na ukupnu odsustvu bilo seroloških markera, mogu poslužiti kao dokaz najranije infekcije.

Međutim, izolirana detekcija virusa hepatitisa C virusa na pozadini potpune odsutnosti drugih seroloških markera ne može u potpunosti eliminirati lažno pozitivan rezultat PCR-a. U takvim slučajevima potrebna je sveobuhvatna procjena kliničkih, biokemijskih i morfoloških studija i ponavljane ponovljene potvrde prisutnosti PCR infekcije.

Prema WHO preporukama za potvrđivanje dijagnoze virusnog hepatitisa C, potrebna je trostruka detekcija virusa hepatitisa C u krvi pacijenta.

Detekcija HCV RNA pomoću PCR metode se koristi za:

Detekcija hepatitisa C virusom PCR metodom (kvantitativno)

Kvantitativna metoda za određivanje RNA sadržaja virusa hepatitisa C u krvi daje važne informacije o intenzitetu bolesti, učinkovitosti liječenja i razvoju otpornosti na antivirusne lijekove. Analitička osjetljivost metode je od 5.102 kopija / ml virusnih čestica u krvnom serumu, specifičnost je 98%.

Razina viremije se procjenjuje na sljedeći način: kada je sadržaj HCV RNA od 10 ^ 2 do 10 ^ 4 kopija / ml - niska; od 10 ^ 5 do 10 ^ 7 kopija / ml - srednja i iznad 10 ^ 8 kopija / ml - visoka.

Kvantitativno određivanje HCV RNA u krvnom serumu pomoću PCR je važno za predviđanje učinkovitosti liječenja interferonom alfa. Pokazano je da osobe s niskom razinom viremije imaju najpovoljniju prognozu bolesti i najveću vjerojatnost pozitivnog odgovora na antivirusnu terapiju. S učinkovitim liječenjem razina viremije smanjuje.

Genotipizacija hepatitisa C - određivanje genotipa

PCR metoda omogućuje ne samo otkrivanje HCV RNA u krvi, već i uspostavljanje genotipa. Najvažnije za kliničku praksu su 5 podtipova HCV-1a, 1b, 2a, 2b i 3a. U našoj zemlji najčešći podvrsti su 1b, a slijede 3a, 1a, 2a.

Određivanje genotipa (podtip) virusa je važna za prognozu HCV i odabir pacijenata s kroničnom HCV obavljanja liječenje interferonom alfa i ribavirinom.

Kada je pacijent inficiran podtipom lb, kronični HCV se razvija u oko 90% slučajeva, sa podtipovima 2a i 3a u 33-50%. U bolesnika s podtipom 1b bolest se javlja u teškom obliku i često završava razvojem ciroze jetre i hepatocelularnog karcinoma. Kada je zaraženo podtip 3a je izraženija u bolesnika s masnom, lezije žučnog trakta, ALT aktivnost i manje ozbiljnim fibrotičnih promjena u jetri nego u pacijenata s podtipom 1b.

Indikacije za liječenje kroničnog interferona-alfa HCV su:

U liječenju pacijenata sa virusom hepatitisa C s podtipom lb, učinkovitost terapije je u prosjeku u 18% slučajeva zaražena drugim podtipima - u 55%. Korištenje kombiniranog režima liječenja (interferon-alfa + ribavirin) povećava učinkovitost terapije. Snažan odgovor opažen je u 28% bolesnika s podtipom 1b i 66% kod ostalih podvrsta HCV-a.

Značajke krvnog testiranja pomoću ELISA metode

U mnogim slučajevima, liječnici moraju točno procijeniti koliko dobro funkcioniraju zaštitne funkcije tijela pacijenta. Za preciznu dijagnozu različitih bolesti, patologija krvi, otkrivanje imunodeficijenata, koristi se posebni test krvi pomoću ELISA. Ova kratica označava imunoanalizu.

Bit ELISA metode

Ova metoda odnosi se na broj imunokemijskih reakcija, koji se temelje na interakciji antigena i protutijela. Za molekulu protutijela molekula antigenskih enzima je kemijski povezana. Enzim se koristi kao etiketa, nakon čega slijedi jedna od komponenata reakcije.

Glavne komponente ELISA-e su:

• antigen;
• antitijela;
• antitijela obilježena enzimom;
• supstrat enzima;
• boja pokazatelja.

Protutijela ili imunoglobulini nastaju u vrijeme kada neki antigeni ili strani mikroorganizmi ulaze u tijelo. Imunoglobulini dolaze u doticaj s antigenom i neutraliziraju ih. Povezivanje na specifični antigen, imunoglobulini čine neku vrstu kit: antigenski protutijelo. Ovaj set može imati i kvantitativne i kvalitativne pokazatelje. To je ono što određuje s velikom točnošću ELISA metodu.

U nekim slučajevima, cerebrospinalna tekućina ili vitreous humor se uzima kao ispitni materijal. U trudnica se ispituje amnionska tekućina. No, najčešće se pacijentova krv koristi za istraživanje. Uzima se iz vena strogo na prazan trbuh.

Kako se pripremiti za analizu?

Prije uzimanja testa trebali biste se suzdržati od jela 12 sati. Također, 2-3 dana prije testa nemojte jesti masnu i prženu hranu, piti alkohol.

Fizička aktivnost prije analize isporuke i najbolju stresa ne mogu utjecati na rezultat, dakle, poželjno da ih eliminirati.

Liječnik bi trebao znati je li pacijent uzeo bilo kakve lijekove uoči dana. Žene trebaju obavijestiti liječnika o fazi menstrualnog ciklusa - također je važno.

svjedočenje

Liječnik može propisati isporuku ovog testa ako sumnjate na sljedeće bolesti:

• virusne bolesti - hepatitis, herpes, citomegalovirus, itd.;
• alergijski uvjeti;
• spolno prenosive bolesti - klamidija, sifilis, mikoplazmoza itd.;
• bolesti imunodeficijencije;
• neki rak (na primjer, rak jetre).

Također se upotrebljava ELISA metoda kako liječnik može procijeniti učinkovitost terapije propisane za pacijenta u liječenju određene bolesti, koja je razina hormona u pacijenta. Također je uključen u složeno ispitivanje pacijenta prije predstojeće kirurške intervencije.

Dekodiranje nekih pokazatelja ELISA analize:

Vrijeme čekanja za rezultatima ovisi o tome koja bolest treba dijagnosticirati. Osim toga, potrebno je uzeti u obzir mogućnosti laboratorija u kojem se provodi studija. Neke male medicinske ustanove čekaju da će krv biti darovana od strane nekoliko pacijenata da istodobno koriste reagense.

Ali čak i sa svim mogućnostima, trebali biste dobiti rezultate najkasnije 10 dana nakon prikupljanja krvi. U najbržem slučaju, vrijeme čekanja je 1 dan.

Prednosti analize

Nedvojbene prednosti ove metode ispitivanja krvi uključuju:

• visoka točnost pokazatelja. ELISA nadilazi druge metode za osjetljivost faktorom od 10-100;
• velika brzina provođenja - dobitak u vremenu primanja rezultata povećava se 30 puta;
• niske cijene u usporedbi s drugim metodama istraživanja;
• mogućnost ranog otkrivanja bolesti i praćenje dinamike procesa bolesti;
• automatizacija svih faza istraživanja;
• visoka ujedinjenja.

Nedostaci su da u nekim slučajevima rezultati su i lažno pozitivni i lažno negativni. Na točnost prijema utječe na broj lijekova pacijent, razni poremećaji u metabolizmu pacijenta i prisustvo tvari nekih kroničnih bolesti (na primjer reumatoidnog artritisa), u kojem se nalazi aktivan proizvodnju antitijela u tijelu.

Prilikom uzimanja ove analize u novorođenčad, pouzdanost može utjecati i na prisutnost majčino antitijela u djetetovoj krvi.

PCR metoda

Kako bi se ponovno testirali podaci ELISA analize, kako bi se razjasnila dijagnoza, bolesniku se nudi mogućnost slanja PCR analize. Ovo je dijagnoza lančane reakcije polimeraze. Ova analiza otkriva mikroskopski fragment DNA bilo kojeg uzročnika, na primjer, virus hepatitisa. Pouzdanost analize je u većini slučajeva 100%.

Niz kroničnih bolesti s slabom analizom protoka ELISA nije u mogućnosti otkriti, ali PCR metoda je sasvim moguća. S tim analiza otkrila bolesti kao što su hepatitis, mononukleoze, citomegalovirus, encefalitis, različite infekcije, spolno prenosive infekcije, papiloma, kandidijaza, HIV-a.

Materijal za istraživanje je krv, kao i urin, slina, sluz, sjeme, struganje epitela, intraartikularna tekućina.

Kako se pripremiti za analizu?

Da bi rezultat bio istinit, pacijent mora biti pravilno pripremljen za analizu. Ako se venska krv uzima za analizu, ne možete jesti niti piti nekoliko sati prije isporuke. Nekoliko dana prije analize, poželjno je iz svog prehrane isključiti masnu i prženu hranu i hranu koja može uzrokovati alergijsku reakciju. Slijedite kako biste se suzdržali od pijenja alkohola i pušenja.

Također ne manje od 10 dana prije dana dijagnoze treba prestati uzimati antibakterijske lijekove. Ako se urin daje za analizu, možda neće biti moguće urinirati oko 3 sata prije sakupljanja. Urin se skuplja ujutro u strogo sterilnom staklenku.

Prije davanja smjese, žene ne bi trebale špricati i primjenjivati ​​vaginalne supozitorije.

Davanje pokusa za analizu potrebno je prije početka menstruacije ili 4 dana nakon njihovog raskida. Pacijent dobiva odgovor jedan dan nakon što je test podnesen.

Dijagnoza virusnog hepatitisa pomoću ELISA i PCR

Za potvrdu dijagnoze pacijenta u „hepatitis” rezultatima istraživanja koriste ELISA i PCR igrati vodeću ulogu. PCR-om u krvi pacijenta otkrije genetski materijal virusa, koji ne samo da omogućava potvrde dijagnoze, ali i da se identificiraju broj virusa i odrediti fazu procesa infekcije. Uz pomoć ELISA dijagnostike otkrivaju se antitijela na viruse hepatitisa.

Liječnik u početku dijagnosticira hepatitis A nakon ispitivanja pacijenta, prema pritužbama koje ukazuju na akutni napad bolesti: tešku mučninu i povraćanje, bol u trbuhu, razvoj žutica. U izluci pacijenta, ako se skupljaju u akutnom stadiju bolesti, možete otkriti virus.

Kada se krv pacijenta testira za ELISA u akutnoj fazi bolesti, razina IgM će biti znatno podignuta, a IgG titar će ostati na visokoj razini čak i nakon što se pacijent oporavi. Specifična antitijela otkrivena su već 3. dana akutne faze bolesti i mogu trajati do šest mjeseci. Svi moderni sustavi za ispitivanje dijagnoze hepatitisa A temelje se na ELISA metodi.

Za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa B, liječnici pokušavaju koristiti i ELISA metodu i PCR metodu. Visoka razina titra IgM i IgG ukazuje na visoku aktivnost virusa, koja je tipična za nedavnu infekciju. PCR dijagnostika u ovom slučaju koristi se za određivanje stupnja koncentracije virusa.

Također, obje metode se upotrebljavaju za sumnju na hepatitis C. Titri protutijela IgM će biti otkriveni otprilike 8 tjedana nakon infekcije, IgG titar će se pojaviti nakon 12 tjedana. Pomoću PCR dijagnostike, liječnik će točno odrediti stupanj procesa infekcije, količinu i kvalitetu samog virusa. Također možete odrediti genotip virusa hepatitisa C.

Činjenica je da u ovom trenutku znanost zna 11 vrsta tog virusa. U Rusiji najčešći su 3 genotipa. Ako liječnik točno zna koji genotip pacijenta je zaražen, tada će liječenje biti usmjereno posebno na borbu protiv određenog genotipa. Svi lijekovi i doze će biti ispravno odabrani i šanse za uspjeh, dakle, će se značajno povećati.

Unatoč činjenici da je ELISA metoda izumljena davno (prva takva analiza provedena 1971.), njezina relevantnost još nije danas izgubila značenje.

Treba imati na umu da samo liječnik može utvrditi potrebu za takvom dijagnozom. I samo kvalificirani medicinski stručnjak može ispravno tumačiti rezultate analize i propisati odgovarajući tretman. U svakom slučaju, nemojte samodijagnosticirati, a osobito samo-lijekove.