Polimeraza lančana reakcija (PCR) u molekularnoj biologiji naziva se eksperimentalna metoda detekcije virusa. Omogućuje značajno povećanje koncentracije određenih fragmenata nukleinske kiseline (DNA) u uzorcima biološkog materijala, što omogućuje određivanje (prepoznavanje) i brojanje njih.

Analiza se provodi kako slijedi. Genetski materijal (uzorak krvi), koji potencijalno može sadržavati željeni gen, uvede se u ispitnu epruvetu. Tu se također stavljaju primeri - kemijski sintetizirane male duljine željenog gena.

DNA ili RNA polimeraza se također dodaje u posudu, ona je u stanju izgraditi lanac nukleinskih kiselina koja je potpuno identična originalnoj. Skup od četiri slobodna nukleotida, posebni građevinski materijal za RNK ili DNA, od kojih jedan sadrži radioaktivne čestice fosfora, također se uvodi u rezultirajuću kompoziciju.

Rezultirajuća smjesa se zagrijava do 95-96 ° C, zbog čega se oba DNA helicama, koji su isprepleteni u uobičajenom stanju, razotkriveni. Zatim se priprema ohladi, u ovom trenutku početnice se pričvrste na željeno područje genoma virusa, bez da RNA (ili DNA) ponovo stvori dvostruku spiralu.

Tijekom hlađenja, polimeraza traži slobodan lanac nukleotida. Za funkcioniranje ovog enzima potreban je jedan lanac nukleotida. Jer polimeraze klizi duž lanca DNA (kao uže prsten), dvostruke spirale se ne može raditi.

Nakon toga se provodi ponovljeni ciklus grijanja, zbog čega se nukleotidni lanci razdvajaju. Za svaki od ovih ciklusa PCR, količina željenog hepatitisa u uzorku povećava se u geometrijskoj progresiji, a ostatak genetskog materijala linearno se proizvodi.

Nakon pročišćavanja otopine nukleotidnih ostataka i razdvajanja DNA lanaca parametrom molekularne težine iz elektroforeze, lako je odrediti da li željeni gen postoji u testnom uzorku ili ne.

Prednosti PCR

Laboratorijska studija koja koristi PCR metodu omogućuje dobivanje još više informacija nego jednostavno prisutnost RNA virusa. Prilikom određivanja parametra razine radioaktivnog zračenja, moguće je utvrditi koja je količina genetskog materijala u početku sadržana u uzorku koji se razmatra. U slučaju hepatitisa, odredite razinu viralnog opterećenja.

Druga prednost ove metode je vrlo visoka osjetljivost CR reakcije. To je puno veće od klasičnih metoda za otkrivanje virusa. U idealnom slučaju, da bi se identificiralo željeni gen, samo jedan virus u uzorku je dovoljan za PCR.

Osim toga, PCR je potpuno specifičan. Njegovi su primeri stvoreni na takav način da u potpunosti odgovaraju jedinim dijelovima željenih gena, koji nijedan drugi slijed nema. Oba otisaka prstiju su jedinstveni, au svakom od gena postoje jedinstveni slijedovi nukleotida.

Kvalitativna PCR analiza

Kvalitativna analiza otkriva samo prisutnost virusa u krvi. Taj bi test trebao biti proveden za sve pacijente za koje je utvrđeno da imaju antitijela na hepatitis C u krvi. Rezultat može biti samo jedna od dvije vrijednosti: "otkrivena" ili "nije otkrivena". U zdravih osoba norma (referentna vrijednost) ne smije biti "otkrivena".

Postoji i posebna interpretacija takvih rezultata provedenih kvalitativnih istraživanja:

• Rezultat je "otkriven". To znači da je u uzorku biološkog materijala preuzeta je pronašao RNA ulomak koji je specifičan za hepatitis C virusom Prema tome, tu je i činjenica pacijenta s virusom hepatitisa B infekcije C. Ako je rezultat kvalitativne PCR je „otkrio”, to znači da virus replicira i u ovom trenutku inficira nove stanice jetre u tijelu.
• Rezultat je "ne otkrivena". Kao presudi pokazuje da je u uzorku biološkog materijala dobivenog fragmenta RNA nije otkriven u laboratoriju, koji je specifičan za HCV RNA ili jednakom koncentracijom patogena infekcije u uzorku bio je ispod granice osjetljivosti testa.

U akutnoj fazi virusa hepatitis C virusom, kvalitativne studije primjenom PCR tehnike mogu se otkriti nakon 1-2 tjedna neposredno nakon infekcije tijela, tj. Dugo prije pojave antitijela na hepatitis.

Nepouzdani rezultati analiza takve istrage mogu se dobiti:

• kontaminirana biomaterijala;
• prisutnost heparina u krvi pacijenta;
• prisutnost u uzorku kemijskih ili proteinskih supstanci (inhibitori) koji utječu na različite komponente PCR-a.

Za kvalitativnu analizu PCR, posebna priprema pacijenta za studij nije potrebna. Venska krv koristi se kao materijal.

Procjena rezultata

Kvalitativna PCR testa ima određeni stupanj osjetljivosti, a ovisno o točnosti istraživanja i razini opreme u laboratoriju može varirati između 10 i 500 IU / ml.

To znači da ako je prisutan u vrlo maloj koncentraciji virus uzorak krvi (manje od praga osjetljivosti laboratorija), a zatim bolestan ishod pacijent može definirati kao „ne detektira.” Zbog toga, kada se izvođenje kvalitativne analize PCR s niskim razinama viremije (virus niska koncentracija), na primjer, kod pacijenata koji se liječe antivirusne terapije, važno je znati, a prag osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

Varijante dijagnostičkih sustava

Za kontrolu virološkog odgovora preporuča se antivirusno liječenje za korištenje dijagnostičkih sustava s pragom osjetljivosti od najmanje 50 IU / ml. Tih kriterija, na primjer: analizatore Cobas Ampicolor HCV (c točnosti od 50 IU / ml) i RealBest HCV RNA (s osjetljivošću od 15 IU / ml).

Prema preporukama SZO za uspostavljanje konačne dijagnoze hepatitisa C, mora se temeljiti isključivo na temelju trostrukog detekciju virusa RNA u uzorcima seruma iz pacijenta bez drugih vrsta markera hepatitisa.

Uz PCR metode, TMA ispitivanje (transkripcijska amplifikacijska metoda) također se koristi za otkrivanje HCV RNA kod bolesnika. Ona ima najbolji prag osjetljivosti (5-10 IU / ml), ali u našoj zemlji takva metoda testiranja još nije vrlo česta.

Raspon otkrivenih modifikacija virusa

Ovo kvalitativno određivanje seruma prisutnosti RNA virusa hepatitisa C omogućuje određivanje nekoliko genotipova ovog virusa. Trenutno, znanost zna više od šest genotipova ovog virusa, kao i oko 10 podtipova ove bolesti.

U našoj zemlji česti su virusi 1, 2, 3 genotipova. Laboratoriji mogu identificirati sljedeće genotipove: la i lb, 2a, 2b i 2c i 3, 4, 5a i 6, bez obzira na podtipove. Za sve izmjene virusa specifičnost detekcije je 100%.

Kvantitativna analiza PCR-a

Korištenjem kvantitativnog PCR testa određuje se razina koncentracije virusa hepatitisa u uzorcima krvi (viralni opterećenje). Ovaj test za viremiju (koncentraciju virusa) omogućuje određivanje broja jedinica specifičnog genetskog materijala (najviše viralne RNA), koji se detektira u određenoj količini. U tom slučaju, odredite njegovu koncentraciju u 1 ml, što odgovara 1 cu. cm.

Kvantitativni parametri analize su izraženi u brojkama, za ovu uporabu kao mjerne jedinice međunarodnih jedinica (IU) po mililitru (ml), označene kao ME / ml. Sada se u nekim laboratorijima količina virusa može odrediti u drugim jedinicama: broj kopija po ml, označen je kao kopija / ml.

• Za hepatitis C, takva kvantitativna analiza PCR-a se obavlja neposredno prije početka terapije. Zatim na 1., 4., 12. i 24. tjedna. Procjena na 12. tjednu je indikativna, omogućuje određivanje učinkovitosti terapije.
• Priprema za analizu. Za kvantitativnu analizu PCR-a nije potrebna posebna priprema pacijenta za ispitivanje. Pola sata prije uzorkovanja, ne smijete pušiti. Venska krv koristi se kao laboratorijski materijal.

Procjena rezultata

Za različite laboratorijske testne sustave, za ovaj pokazatelj postoje različiti faktori konverzije u IU / ml. U prosjeku se koristi parametar pretvorbe u kojem je 4 kopija / ml = 1 IU / ml. To je, na primjer, ako laboratorij daje rezultat PCR analize 2,4 x 10 6 kopija / ml, tada bi taj parametar trebao biti podijeljen s 4, a dobivamo 6 x 10 5 IU / ml.

Visoka razina opterećenja od 800.000 IU / ml smatra se visoka, što je približno jednako indeksu od 3.000.000 kopija / ml. Niža viremija, prema nekim autorima, odgovara parametrima kvantitativnog PCR ispod 400,000 IU / ml.

Kao rezultat kvantitativnog testa, konačni rezultati mogu biti isporučeni ne u obliku digitalne vrijednosti, već: "ispod mjernog raspona" ili "nije detektirano".

• Procjena: "ispod mjernog raspona". To ukazuje da kvantitativni test nije uspio otkriti viralnu RN hepatitis C, ali sam virus prisutan je u tijelu u vrlo malim koncentracijama. Ovo je indicirano dodatnim kvalitativnim testom, koji potvrđuje činjenicu prisutnosti virusa.
• Procjena: "nije otkrivena". Ovaj rezultat pokazuje da kvantitativni test nije detektiran virus u uzorku RNA.

Parametar viralnog opterećenja, prije svega, određuje stupanj infektivnosti bolesti, razinu "infektivnosti" pacijenta. Što je koncentracija virusa veća, to je veća vjerojatnost prijenosa podataka na druge ljude. Na primjer, kada se seksate s bolesnom osobom ili vertikalnom stazom. Takav kvantitativni pokazatelj također pomaže u određivanju učinkovitosti pacijentovog liječenja.

Provođenje kvantitativne analize PCC-a važno je za antivirusnu terapiju, vrednovanje njegovog uspjeha i raspoređivanje trajanja tečaja. Dakle, s brzim odzivom tijela na liječenje i niskim stupnjem viremije, trajanje terapije može se smanjiti.

S polaganim smanjenjem kvantitativnog parametra PCR, antivirusna terapija treba biti proširena ili modificirana. Ako je razina viralnog opterećenja niska, onda je to povoljan faktor terapije, ako je visok, onda je primijenjena metoda liječenja nedjelotvorna, a lijekove ili metode njihove upotrebe treba mijenjati.

Kvalitativna analiza za hepatitis C

Ostavite odgovor

Kvalitativna analiza lančane reakcije polimeraze - PCR za hepatitis C određuje prisutnost ili odsutnost HCV u tijelu. U laboratoriju se proučava struktura RNA, u kojoj će se virus locirati. Ako se otkrije virus C, potrebno je podvrgnuti tijeku liječenja, budući da zanemareno stanje jetre ima ozbiljne posljedice. Kvalitativno PCR se provodi nakon oporavka kako bi se potvrdilo odsutnost protutijela. Imenovan i za preventivni pregled. Uz nisku koncentraciju patogena u krvi, PCR (kvalitativni) ne može otkriti ništa, jer dijagnostički sustav ima prag osjetljivosti. U slučaju početne faze bolesti ili blagog oblika, PCR se u konačnici dijagnosticira s ultrazvučnom opremom.

Što je RNA virus?

Pojam RNA virusa hepatitisa C (ili virusa hepatitisa C virusa RNA) naziva se sam jetrena bolest. Virus C se veže na zdravu ćeliju tijela, prodirući unutra. Tijekom vremena, širenje po cijelom tijelu, to je samo doći u krv. Kao rezultat, patogen prodire u jetru, osigurava svoje stanice i naporno radi. Jetrene stanice (hepatociti) rade pod njegovim utjecajem, podvrgavaju se promjenama i od toga propadaju. Što duže virus C bude u jetri, više stanica umre. Tijekom vremena nastaju opasne bolesti koje dovode do maligne degeneracije i smrti.

Infekcija jetre s tom vrstom virusa ne može se na bilo koji način manifestirati izvana. Dugi niz godina ili desetljeća zaražena osoba osjeća se sasvim zdravo, a samo slučajni pregled najčešće otkriva patologiju. Kada donosi krv za hepatitis, ispituje se dio lanca RNA (ribonukleinske kiseline) koji je dio ljudskog gena (DNA). Rezultati laboratorijskih istraživanja ne bi trebali biti korišteni za samo-liječenje, jer to je samo indikator. Liječnik će odrediti točnu sliku i daljnju dijagnozu.

Kada završite: svjedočanstvo studije

Za potvrdu HCV je dodijeljena PCR analiza (lančana reakcija polimeraze). PCR studije pomažu pronaći patogeni materijal u strukturi RNA i propisati učinkovitu terapiju. Imenovan u sljedećim slučajevima:

• identifikacija znakova upale jetre;
• probira za prevenciju;
• ispitivanje osoba u kontaktu;
• dijagnoza hepatitisa mješovitog porijekla (definicija glavnog uzročnika);
• Određivanje razine aktivnosti reprodukcije virusa u kroničnom obliku;
• ciroza jetre;
• kako bi se odredila učinkovitost propisane terapije.

PCR studije određuje liječnik kako bi se utvrdilo učinkovitost tijeka liječenja hepatitisa.

Postoji kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a. Kvantitativno PCR pokazuje postotak RNA s nosačima virusa u krvi, a kvalitativno PCR upućuje na virusnu prisutnost ili odsutnost. Pozitivan pokazatelj kvalitete (prisutnost hepatitis C RNA) također zahtijeva kvantitativno istraživanje. Visoka razina koncentracije patogena hepatitisa C povezana je s rizikom prijenosa, tj. Kontaminacije drugih. Niska količina se bolje liječi. Količina RNA virusa u krvi nije povezana s intenzitetom bolesti. PCR analiza se također obavlja u slučaju interferonske terapije, kako bi se propisala trajanje i složenost liječenja.

Značajke kvalitativne PCR analize za hepatitis C

Imenuje kvalitativnu analizu s indeksom lančane reakcije polimeraze, svi pacijenti koji su imali antitijela u krvi za hepatitis C koji je bio bolestan i oporavio, treba ponovo uzeti test. Preporučljivo je da se testira na hepatitis B, a zatim, u slučaju pozitivnog zaključka, i hepatitis D. i kvalitativno analizirani reakatsiya treba provoditi u suradnji s drugim krvnim testovima. Analize će pokazati kompletnu sliku širenja virusa.

Iz rezultata ispitivanja vidjet će se samo pozitivan test za hepatitis C ili negativan, tj. Prisutnost ili odsutnost virusa. Ako se zaključak "detektira", virus je i nastavlja djelovati aktivno. Oznaka "nije pronađena" ukazuje na odsutnost virusa ili malu količinu virusa. Uz ovaj pokazatelj treba uzeti u obzir činjenicu da je analitička osjetljivost dijagnostičkih sustava različita, a RNA hepatitis C još uvijek može biti u krvi, ali se ne očituje u analizi.

Posebno osjetljiva metoda PCR ultra-hepatitisa C otkriva čak iu manjoj količini. Koristi se hibridizacijsko-fluorescentna studija koja je mnogo puta veća od standardnih PCR sustava. Metoda se koristi u nekoliko slučajeva:

• sumnja na skrivene oblike hepatitisa C;
• Pacijent nije potvrdio dijagnozu PCR, ali postoje antitijela;
• u slučaju oporavka;
• identificirati ranu fazu infekcije.

Povratak na sadržaj

Objašnjenje analize

Konačnu odluku u dijagnozi utječe PCR dekodiranje HCV-a, posebice, s ultrametodom. Glavni nedostatak ovog istraživanja je strog pridržavanje sterilnih uvjeta za uzorak i materijale. Malo odstupanje ponekad pokazuje netočne zaključke analitičara, komplicira dijagnozu i naknadnu terapiju. Analiza PCR-a za određivanje RNA virusa hepatitisa ne pokazuje uvijek sliku bolesti s povjerenjem, a ponekad se priznaju netočnosti, oba načina.

Dijagnosticiranje virusa hepatitisa preporuča se primjenjivanje sveobuhvatnog pregleda.

Norma indikatora

Odsutnost JgM antitijela na RNA u virusnom hepatitisu C smatra se normom u analizi lančane reakcije polimeraze. Istodobno, nalaz serološke analize ukazuje na prisutnost antitijela na virus C i to je također unutar granica norme. Kvalitativna definicija ne pokazuje intenzitet bolesti, samo otkriva uzročnik hepatitisa C u RNA. Takva analiza se ponavlja nakon tretmana kako bi se potvrdio stvarni oporavak.

odstupanja

Ako su JgM antitijela na HCV RNA prisutna, to ukazuje na razvoj infekcije. Bolest je akutna ili kronična, manifestira se u različitim fazama. Ako se bilježi smanjenje broja antitijela, analiza će pokazati postizanje rezultata liječenja tijekom oporavka. Postoje vrlo rijetki slučajevi lažnih pozitivnih nalaza u dijagnozi. Nalaze se kod žena tijekom trudnoće i kod osoba s drugim zaraznim bolestima.

Dijagnoza hepatitisa C PCR-om

Polimerazna lančana reakcija (PCR) sve se više koristi u kliničkoj praksi kako bi se odredili uzroci različitih virusnih bolesti, uključujući dijagnozu virusnog hepatitisa C.

Savjeti od hepatologa

U 2012. godini došlo je do otkrića u liječenju hepatitisa C. Razvijeni su novi antivirusni lijekovi s izravnim djelovanjem, koji s vjerojatnošću od 97% potpuno oslobađaju tu bolest. Od tada, hepatitis C službeno se smatra potpuno izlječivom bolesti u medicinskoj zajednici. U Ruskoj Federaciji i zemljama ZND-a lijekovi su zastupljeni markama cofosbuvir, daklataswir i lepidasvir. Trenutno se na tržištu pojavljuju mnoge lažne krivotvorine. Lijekovi odgovarajuće kvalitete mogu se kupiti samo od tvrtki koje imaju licence i relevantnu dokumentaciju.
Idite na službenu stranicu dobavljača >>

Za njegovu dijagnozu, PCR se široko koristi u svojim različitim modifikacijama. Uz pomoć PCR-a za hepatitis C, moguće je utvrditi prisutnost virusa hepatitisa C u pacijentovoj krvi i točno ga dijagnosticirati.

Varijacije analize

PCR tehnika postala je dostupna liječnicima prije nekoliko desetljeća. Temelji se na višestrukom kopiranju specifičnog fragmenta virusne ili bakterijske RNA ili DNA, nakon čega slijedi detekcija (prepoznavanje danog fragmenta) u pacijentovom krvnom serumu.

U ovom slučaju, postoje dvije temeljno različite metode PCR studija: kvantitativne i kvalitativne.

Kvalitativna metoda omogućuje samo odgovor na pitanje: postoji li genetički materijal specifičnog virusa u biološkom materijalu (krvni serum, slina, sjemena tekućina, itd.)?

Kvantitativna metoda, zauzvrat, omogućuje određivanje količine ovog genetskog materijala, koji je u nekim slučajevima neophodan za određivanje stupnja bolesti ili procjenu učinkovitosti terapije.

Kvalitativna varijanta PCR u slučaju bolesti

Pomoću kvalitativne analize varijante na PCR ove bolesti može otkriti činjenicu prisutnosti hepatitis C virusne RNA u biološkim tekućinama (serum, slina i slično. D.) pacijenta. Tako rezultat analize može biti samo dvije vrste: pozitivan ili negativan. Vrlo je važno u ovom slučaju ispravno dekodiranje.

• pozitivan rezultat u utvrđivanju RNA virusnog hepatitisa C liječnici kažu da je u istraživanju biološke tekućine je RNK virusa. Prema tome, pacijent zaražen s njom, i stoga je moguće dijagnoza hepatitisa C. Međutim, uvijek zapamtiti o mogućnosti lažno pozitivnih rezultata analize;
• Negativna PCR analiza pokazuje odsutnost HCV RNA u ispitivanju biološke tekućine ili sadržaj RNA molekula u tekućini uzorka bila preniska i ispod osjetljivosti metode PCR granice. Negativni rezultat testa ne mora uvijek ukazivati ​​na odsutnost virusa u krvi. Uvijek treba uzeti u obzir mogućnost lažnih negativnih rezultata analize.

S razvojem akutnog oblika hepatitisa C, provođenje visoko kvalitetnog PCR testa omogućuje da se utvrdi činjenica bolesti u roku od 1-3 tjedna nakon što virus uđe u ljudsko tijelo.

Lažni negativni rezultati mogu biti rezultat:

• ući u biološki materijal (krv) zagađujućih tvari;
• Upotreba heparina radi sprječavanja zgrušavanja krvi u epruveti ili njegove uporabe od strane pacijenta;
• prodor u materijal koji se ispituje tvari iz okoline, blokiranje enzima koji se koriste u PCR-u.

Bolesnik ne bi trebao slijediti posebne preporuke prije provođenja kvalitativne dijagnostičke metode PCR-a. Za to je potrebno samo uzeti krv iz pacijenta vena za analizu.

Kvantitativna varijanta PCR-a

Korištenje kvantitativne PCR analize omogućuje nam da odredimo ne samo činjenicu prisutnosti virusa u krvi, već i broj virusnih čestica u bilo kojoj biološkoj tekućini (takozvani virusni opterećenje). Uz pomoć ove vrste PCR-a, moguće je odrediti broj kopija HCV RNA koji cirkuliraju u određenom volumenu.

Rezultat ove vrste PCR-a izražava se numeričkim vrijednostima, gdje je mjerna jedinica međunarodne jedinice po mililitru - ME / ml.

Izvođenje slične vrste PCR dijagnostike se koristi na određeni dan liječenja virusnog hepatitisa C. Prva definicija virusnog opterećenja javlja se kada boluje osoba koja ulazi u bolnicu. Daljnja analiza se provodi 1., 4., 12. i 24. tjedna od početka uporabe lijekova. Već u 12. tjednu možete reći je li terapija učinkovita ili ne.

Nedavno sam pročitao članak koji opisuje upotrebu kompleksa lijekova "SOFOSBUWIR DAKLATASVIR "za liječenje hepatitisa C. S ovim kompleksom se zauvijek može riješiti HEPATITIS C.

Nisam navikao povjeravati bilo kakve informacije, ali sam odlučio provjeriti i narediti. Lijekovi nisu jeftini, ali život je skup! Nisam osjetio nuspojave iz postupka, već sam mislio da je sve uzaludno, ali mjesec dana kasnije prošao sam testove i PCR nije otkriven, ali nije pronađen nakon mjesec dana liječenja. Cardinally poboljšano raspoloženje, opet je postojala želja za životom i uživanje u životu! Uzeo sam lijek za 3 mjeseca i kao rezultat, virus je otišao. Pokušajte i vi, a ako ste zainteresirani, veza u nastavku je članak.

Posebno pripremite pacijenta da studija nije potrebna. Preporuča se ne pušiti na dan ispitivanja. Kao testni materijal koristi se krv iz vena.

Nakon provedenog kvantitativnog PCR, potrebno je dešifrirati dobivene rezultate. Pojam "norme" u takvim slučajevima ne postoji. Za dekodiranje se koristi posebno razvijena gradacija pokazatelja:

• Rezultati: nije detektirana - RNA hepatitisa C u pacijenta venske krvi nije identificiran (negativan rezultat) ili sadrži vrlo malu količinu ne dopušta postupak njegovog identificiranja (5 IU / ml - pozitivan test kao virusnog opterećenja znatno. To je pokazatelj učinkovitosti terapije i uspješnog tijeka bolesti;
• rezultat studije:> 8 * 10 5 ME / ml - pozitivan rezultat ispitivanja. Razina opterećenja je vrlo visoka. Loša prognoza tijeka bolesti i potreba ispravljanja ili zamjene korištene droge.

Važno je zapamtiti da primljena razina viralnog opterećenja ne odražava težinu tijeka patologije i stupanj uništenja jetre. Zbog toga postoje i drugi načini biokemijskog istraživanja. Za pravilan odabir metoda liječenja potrebno je poznavati genotip virusa hepatitisa C.

Što pokazuje virusni opterećenje?

1. Visoka razina koncentracije virusnih čestica u biološkim tekućinama, a naročito u krvi povezana je s visokim rizikom prijenosa virusa tijekom spolnog odnosa ili tijekom trudnoće od majke do fetusa.
2. Broj virusnih čestica odraz je učinkovitosti korištenih lijekova i omogućuje racionalni odabir korištenih lijekova i doza.

Ultrazvučna dijagnostička metoda PCR-a

Danas možemo proći tzv ultra-PCR za određivanje hepatitis C virus u potpunosti, ova metoda se zove PCR, hibridizacija-fluorescentna studija u realnom vremenu.

Kada se prikazuje ultra-PCR:

1. U slučajevima sumnje na virusni hepatitis C u bolesnika s latentnim oblicima bolesti.
2. U slučajevima kada pacijent ima antitijela na hepatitis C virus, ali nije potvrđena PCR dijagnostikom.
3. Utvrditi učinkovitost liječenja i potvrditi činjenicu oporavka.
4. Kao tehnika screeninga za rano otkrivanje bolesti kod ljudi u populaciji.

U pravilu se za istraživanje koristi venska krv pacijenta. Osjetljivost ultra-metode je manja od 10 IU / l, što je nekoliko puta veće od standardnih kvantitativnih i kvalitativnih varijanti PCR dijagnostike. Imenovanje ultra PCR-a obavlja liječnik infektivne bolesti ili hepatolog.

Odlučujuća faza u dijagnozi i procjeni liječenja je ispravna interpretacija rezultata dobivenih pomoću ultra PCR metode. Uvijek je vrijedno sjećati se da postoji malo šanse primiti lažne negativne i lažne pozitivne rezultate.

Kako bi se uklonile takve situacije, potrebno je isključiti kontaminiranje uzoraka krvi i laboratorijskih materijala. Uz korištenje ultra PCR-a moguće je izbjeći situacije koje dovode do lažnih negativnih rezultata i time kompliciraju dijagnozu.

Kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C

Postoji mnogo podtipova HCV-a, zbog čega nije uvijek moguće odabrati učinkovite antivirusne lijekove i postići željene rezultate u liječenju. Raznolikost patogena je zbog njihove sposobnosti da mijenjaju njihovu strukturu, tj. Mutuju. Kao rezultat toga, imunitet nema vremena da stvori snažan odgovor protiv patogenog agensa, a lijekovi su nedjelotvorni.

Često, hepatitis se dijagnosticira u fazi ciroze, što predisponira kasnije otkrivanje bolesti zbog nedostatka kliničkih znakova. Samo tijekom laboratorijskog ispitivanja može se otkriti HCV u razdoblju inkubacije.

Kvantitativna analiza za hepatitis C omogućuje ne samo utvrđivanje prisutnosti patogena u krvi, već i izračunavanje njegove koncentracije.

Preporuke za pripremu za analizu

Posebna priprema za laboratorijsku dijagnozu nije potrebna. Dovoljno je pridržavati se sljedećih preporuka:

1. kvantitativna analiza se provodi na prazan želudac, uz zadnji obrok - 8 sati prije uzorka krvi;
2. za dva dana treba napustiti alkohol i "teška" jela;
3. Posebno su važni lijekovi koje pacijent uzima. Mogu utjecati na rezultat studije, pa bi liječnik trebao znati o njima.

Također, teški fizički napori i fizioterapeutski postupci uoči prikupljanja krvi nisu poželjni. Kako bi se dešifrirala kvantitativna analiza za hepatitis C pokazala se pouzdanom, ne zanemarite gore navedene preporuke.

Često pacijent dobiva rezultat analize u jednom danu. Cijena testiranja za određivanje koncentracije patogena u krvi ovisi o laboratoriju i kvaliteti reagensa i može doseći 4.000 rubalja.

Laboratorijska dijagnoza hepatitisa C

Među primarnim dijagnostičkim metodama su ELISA, ili na neki drugi način enzimski povezani imunosorbentni test. Dodjeljuje se za otkrivanje specifičnih protutijela na HCV. Njegova učinkovitost doseže 95%. Ako transkript ove studije daje pozitivan rezultat, valja sumnjati u prisutnost nekog agensa u krvi.

Treba napomenuti da polovica ispitanika testiranih u "+" testu tijekom daljnje dijagnostike ne otkriva virusni agens u krvi. ELISA u ovom slučaju ukazuje na prethodni kontakt s HCV u prošlosti, što potvrđuje cirkulirajuća antitijela.

Točnije studije su lančana reakcija polimeraze, inače PCR. Omogućuje određivanje koncentracije RNA patogena u krvi. Nakon otkrivanja genetskog skupa virusa u biološkom materijalu, liječnik potvrđuje hepatitis C.

PCR se dodjeljuje pacijentu radi provjere dijagnoze. To omogućuje identificiranje RNA u fazi gdje antitijela još nisu dostupna. Postoji nekoliko vrsta genetičkih studija:

1. kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C, koja ne samo da uspostavlja prisutnost patogena u krvi, nego također daje informacije o njegovoj koncentraciji;
2. kvaliteta - potvrđuje zarazu;
3. genotipizacija - omogućuje određivanje genotipa patogenog agensa i odabir najučinkovitijih lijekova protiv njega.

Lančana reakcija polimeraze

Kao što je već spomenuto, postoji nekoliko vrsta laboratorijskih istraživanja:

• kvalitativna analiza - ukazuje na prisutnost patogenog agensa u krvi. Ova vrsta dijagnoze ima određenu "razinu odgovora", tako da nije uvijek pouzdan. Da bi se ispravno dešifrirali rezultati i dobili realne pokazatelje, preporučljivo je koristiti ispitni sustav s osjetljivošću najmanje 50 IU / ml za studiju. Norma analize je "negativni odgovor" ili "virus nije otkriven". To ukazuje na nedostatak genetskog skupa patogena u ispitnom materijalu. Ako je rezultat bio pozitivan, potrebno je daljnje ispitivanje bolesnika;
• kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C određuje virusni opterećenje, tj. koncentraciju patogenog agensa u krvi. Rezultat istraživanja pokazuje broj RNA jedinica u fiksnom volumenu biološke tekućine;

Virusna opterećenja su broj zarazne RNA u jednom mililitru krvi istraživača. Mjerne jedinice su ME / ml, ali neki laboratoriji određuju "kopije / ml", a istodobno ukazuju na praznu analizu standarda za usporedbu i procjenu rezultata.

• genotipizacija. Zbog sposobnosti patogena da promijeni izbor učinkovitih antivirusnih lijekova za terapiju treba se temeljiti na njegovom genotipu. To ne ovisi samo o rezultatu, već io trajanju liječenja. Dakle, HCV 1 hepatitis zahtijeva lijekove godinu dana, ali samo 60% slučajeva pokazuje pozitivnu dinamiku. Što se tiče drugog i trećeg genotipa, oni su manje otporni na djelovanje antivirusnih sredstava, zbog čega učinkovitost terapije prelazi 85%. Pri dobivanju takvog rezultata istraživanja - "virus se ne upisuje", valja sumnjati u prisutnost agensa koji nije prepoznat standardnim testnim sustavima.

Indikacije za analizu

Tumačenje kvantitativne analize za hepatitis C nužno je za:

1. daljnje ispitivanje pacijenta, kada su ELISA otkrivena antitijela na HCV;
2. potvrda dijagnoze;
3. uspostavljanje virusnog opterećenja u slučaju mješovite infekcije, kada je osoba zaražena s nekoliko vrsta patogena;
4. određivanje taktika liječenja (odabir antivirusnih lijekova, njihova zamjena ili završetak terapije);
5. procijeniti dinamiku progresije bolesti, kao i učinkovitost lijekova;
6. određivanje stupnja patologije (akutni, kronični).

PCR ima sljedeće prednosti:

1. dobra osjetljivost, zahvaljujući kojoj je moguće računati čak i malu količinu virusa;
2. određivanje same patogena (RNA), a ne antigena;
3. specifičnost tehnike - utvrđivanje specifične vrste patogenog agensa;
4. brzinu dobivanja rezultata, jer za analizu nije potrebno uzgoj usjeva na hranjivom mediju. Odgovor je spreman za 5 sati;
5. univerzalnost - omogućuje identificiranje genetskog skupa različitih patogena, oba RNA i DNA koji sadrže (hepatitis B);
6. otkrivanje latentne infekcije.

Laboratorijski test pomaže u potvrđivanju dijagnoze i sastavni je dio sveobuhvatnog pregleda (analiza kliničkih simptoma, rezultati ELISA i biokemije).

Osim toga, PCR se široko koristi u alergologiji, genetici, kao i da se utvrdi činjenica očinstva.

Dekodiranje kvantitativne analize virusa hepatitisa C

Procjenu rezultata laboratorijske dijagnostike obavlja liječnik uspoređujući dobivene podatke s normom.

Kvalitativna i kvantitativna analiza PCR-a za hepatitis C: negativna, pozitivna, dekodiranje

Hepatitis C - virusne bolesti jetre uzrokovane HCV flavivirus, u kojoj je struktura sadrži molekulu od ribonukleinske kiseline (RNA) (od engleskog virusa hepatitisa C,). RNA nosi genetski kod virusa. Njegova prisutnost omogućuje analizu PCR-a za hepatitis C.

HCV je opasnost za ljude i da tzv serološki prozor (vrijeme između infekcije i pojave reakcije imunološkog sustava) može biti dovoljno dugo - od nekoliko tjedana do šest mjeseci.

To ne otkriva infekcije i započinje liječenje na vrijeme.

Ovisno o individualnim karakteristikama tijela domaćina, HCV se može očitovati u akutnom obliku, a može se razviti i kao kronična bolest koja će zahtijevati dugotrajno i skupo liječenje. Kada se detektiraju antitijela na HCV, provode se brojni laboratorijski testovi, uključujući PCR za hepatitis C. Ovaj test se provodi za sve ljude čija je krv pronađena protutijela na HCV.

Što je PCR analiza?

Laboratorijska analiza PCR-a za hepatitis C - studija biološkog materijala za prepoznavanje prisutnosti flavavirusa.

Lančana reakcija polimeraze (kao što je kratica dešifrirana) pokazuje kvantitativnu vrijednost virusne štete organizma, njegove kvalitativne karakteristike, kao i genotip RNA koji sadrži virus.

Na temelju njih, kao i na temelju dodatnih analiza, određuje se metoda i trajanje terapije, kao i epidemiološki čimbenik (rizik od prijenosa na drugog prijevoznika).

Što je RNA analiza za hepatitis C?

PCR hepatitis C također se naziva RNA analiza (HCV RNA), jer nije poznat. Flavavirus sadrži RNA česticu s veličinom viriona od 30-60 nm. Jedna od karakteristika ovog mikroorganizma je velika sklonost mutacijama.

Svaka od podvrsta (genotipova) virusa ima različitu otpornost, što uzrokuje različite metode liječenja i prirodu daljnje prognoze za pacijenta.

Biološki materijal (venska krv) dobiva post i obično testiran u realnom vremenu PCR (visoko osjetljivim realnom vremenu dijagnostika za određivanje donju granicu 15 IU / ml pomoću automatizirani način zatvorenog sustava).

Postoje i drugi testovi, na primjer COBAS AMPLICOR s osjetljivošću od 50-100 IU / ml. Za svaku laboratorijsku studiju, prag osjetljivosti je važan, tj. sposobnost reagenta da detektira minimalnu koncentraciju virusa u biološkom materijalu.

Vrste analize za hepatitis C korištenjem PCR metode

PCR za hepatitis C uključuje tri važne komponente:

• kvalitativna analiza;
• kvantitativna analiza;
• genotipizacija.

Ovi testovi mogu odrediti prirodu virusa, kao i genetske znakove patogena. Ovisno o osjetljivosti dijagnostičkog sustava, test se provodi jednom, a ponekad se provodi i drugi test s osjetljivijim reagensom kako bi se potvrdili ili pročistili rezultati.

Visokokvalitetni hepatitis C PCR

PCR analiza za hepatitis C je još jedno zajedničko ime za lančanu reakciju polimerazne analize. Standardna osjetljivost testa, koja omogućuje otkrivanje prisutnosti virusne lezije, je u rasponu od 10-500 IU / ml.

Negativna analiza PCR-a za hepatitis C pokazuje da je koncentracija virusa u krvi pacijenta ispod prag osjetljivosti dijagnostičkog sustava.

Ako je kvalitativno PCR dao "neotkriven" odgovor, tada je za daljnje liječenje važno znati prag osjetljivosti reagensa.

Proteinske frakcije s flavavirusom pojavljuju se mnogo kasnije.

Kvantitativni hepatitis C PCR

Kvantitativni PCR hepatitis C je pokazatelj virusnog opterećenja koji odražava razinu koncentracije flavavirus RNA u tijelu. Ovo je pokazatelj koji pokazuje koliko ulomaka virusne RNA sadrži po jednom kubičnom centimetru krvi. PCR hepatitis C RNA rezultata kvantitativna ispitivanja u konvencionalnom sustavu navedeni su u međunarodnim jedinicama po mL (IU / ml), i može se snimiti na različite načine, na primjer - 1,7 ppm ili 1,700,000 IU / ml.

Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C je dana pacijentima prije početka antivirusne terapije, a 12. tjedna liječenja kako bi se procijenili rezultati odabrane metode borbe protiv HCV. Virusna opterećenja omogućuju prepoznavanje tri važna pokazatelja bolesti:

• infektivnost, tj. stupanj rizika prijenosa virusa iz jednog nosača u drugu (što je veća koncentracija flavavirus RNA, to je veća vjerojatnost zaraze druge osobe, na primjer, tijekom seksualnog kontakta);
• metoda i učinkovitost liječenja;
• trajanje i prognozu antivirusne terapije (što je veći virusni opseg, to traje dulji tretman).

Kvantitativna PCR dijagnoza hepatitisa C ovisi o vrsti laboratorijskog testa i pragu njegove osjetljivosti. Donja granica norme obično se smatra do 600.000 IU / ml, prosječna vrijednost je u rasponu od 600.000-700.000 IU / ml. Rezultati od 800,000 IU / mL i više smatraju se visokom razinom virusa koji sadrži RNA.

genotipizacija

S obzirom na visoku mutacijsku aktivnost HCV-a u prirodi, važno je odrediti u fazi ispitivanja koja genotip virusa je u pacijentovoj krvi. Ukupno je zabilježeno 11 genotipova virusa hepatitisa C na planeti, koje uključuju mnoge podvrste. Na području Ruske Federacije, uobičajene su 1,2 i 3.

PCR RNA hepatitisa C zajedno s genotipizacijom vrlo je važna komponenta analize, jer omogućuje liječniku određivanje otpora (otpornosti) virusa, odabir prikladnih lijekova i propisivanje tijeka liječenja.

Genotipizacija također omogućuje neizravno određivanje stanja jetre. Na primjer, 3 genotip HCV-a često prati steatosis, u kojem se nakuplja masno tkivo u stanicama tijela.

Test krvi za PCR u hepatitisu C trebao bi dati brojku koja određuje genotip. U laboratorijskim odgovorima može se pisati "nije upisano" - a to znači da u ljudskoj krvi postoji virus koji nije određen testnim sustavom. To može ukazivati ​​da genotip nije karakterističan za određeno zemljopisno područje. U tom slučaju potrebno je ponovno analizirati analizu s većom osjetljivošću dijagnostičkog sustava.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

Test za hepatitis C PCR može se kvantificirati na temelju gore navedenih podataka. Pri primanju rezultata laboratorijskih ispitivanja obično se pišu sljedeći podaci:

• "Pronađeno" / "nije pronađeno" (visoko kvalitetno PCR za hepatitis C);
• količina frakcija koje sadrže RNA, na primjer 831.680 IU / ml (kvantitativno PCR test);
• brojka koja određuje genotip HCV-a, na primjer - 1, 2, 3, 4;
• naziv testa najčešće je u stvarnom vremenu.

Najvažnije za dešifriranje PCR analize za hepatitis C je druga točka, koja pokazuje virusno opterećenje koje određuje prognozu, metodu i trajanje liječenja.

Ako je PCR analiza za hepatitis C negativna i ELISA pozitivna - što to znači?

Za dešifriranje laboratorija važan za kontakt hepatologist ili infekcijskih bolesti, koja objasniti informacije prema vrsti dijagnostičkog sustava i njegove praga osjetljivosti. U medicinskoj praksi postoje mnogi podaci o krvi koji mogu dovesti do zbunjenosti osobe bez medicinskog obrazovanja.

Na primjer, ako je test za HCV PCR negativnog i pozitivnog ELISA, što može značiti da u tom trenutku u pacijentovoj krvi nije HCV, a prije nego što je doživio akutni oblik hepatitisa C. Smatra se da pozitivno imunosorbent testa (ELISA) pokazuje da je u krvi postoje protutijela proizvedena poslije invazije virusa u prošlosti. No, u modernoj medicinskoj praksi ELISA analiza nije dovoljno pouzdana i često daje neobične rezultate, tako da liječnici ga koristiti kao primarni screening. Kada dijagnosticira bolest, stručnjaci su vođeni precizno PCR testovima.

Korisni videozapis

U sljedećem videu vrlo je detaljno i zanimljivo reći što je bit PCR metode, kako se analiza radi:

zaključak

Venska krv je obično uzeta za analizu hepatitis C PCR. Najčešće se radi o dvostrukom uzorku biološkog materijala - za ELISA i izravno za PCR test. Za točne rezultate ispitivanja potrebno je poštivati ​​glavna pravila laboratorijskog uzorkovanja biološkog materijala:

• krv za analizu se daje ujutro na prazan želudac;
• između jedenja i uzimanja krvi trebalo bi trajati najmanje 8 sati;
• Prije nego što uzmete test, također biste trebali isključiti alkohol i prženu hranu;
• Tijekom dana prije davanja krvi, morate izbjegavati visoki fizički napor.

Rezultati testiranja krvi obično su spremni sljedeći dan.

Analiza PCR za hepatitis C

Dijagnoza hepatitisa uključuje čitav kompleks testova koji određuju prisutnost virusa u krvi. Jedan od načina za otkrivanje bolesti je korištenjem metode kao što je PCR za hepatitis C. Što je to, zašto je PCR analiza hepatitisa toliko važno, kako se izvodi i dekodira?

Što je to?

Polimeraza lančana reakcija, ili PCR, koristi se za dijagnosticiranje čira na želucu, kolitis, enteritis. No, njegova je glavna prednost da pomaže otkriti u tijelu sam virus samog hepatitisa C i protutijela koja imaju sposobnost da ne uzrokuju reakciju imunološkog sustava zbog njihove sposobnosti mutacije.

Istraživanje i njegova suština stvaraju određene uvjete pod kojima se odvija hepatitis RNA lančana reakcija. Ako se u usporedbi s nukleotidnom sekvencom virusa hepatitisa C pronađe slučajnost, to ukazuje na postojanje virusnih čestica u krvi i propadanje u jetri. Ako je količina virusa ispod određene razine, napravljena je negativna dijagnoza, ako je veća - pozitivna.

Postoje dvije vrste krvnih testova pomoću PCR metode za hepatitis: kvantitativna analiza i kvalitativna analiza.

Kvantitativno PCR, kao što je gore spomenuto, određuje koncentraciju RNA virusa hepatitisa. Osim toga, on je u stanju pružiti informacije o intenzitetu s kojim se patologija razvija i učinkovitost propisane terapije. Kvantitativna analiza za hepatitis C izuzetno je važna, jer utvrđuje otpornost na djelovanje antivirusnih lijekova i omogućuje prilagodbu terapije.

Nakon što je pacijent prošao tijek liječenja, PCR pomaže u određivanju daljnjeg poretka receptura. U nekim slučajevima potrebna su dodatna istraživanja. Na primjer, ako je razina ALP povećana (ali ne više od 2 puta u pola godine), a analiza ukazuje na virusni opterećenje iznad 105 IU / ml, pacijentu je dodijeljena biopsija. Ako kvantitativna analiza na PCR-u otkriva snažnu upalu i fibrozu, pacijentu se propisuje tijek liječenja antivirusnim lijekovima.

U situacijama u kojima se veliki broj virusnih čestica kombinira s visokim ALT, bolesnik treba odmah liječiti bez dodatnih dijagnostičkih mjera.

Uzmite ovaj test i saznajte imate li problema s jetrom.

Kvalitativno tumačenje pokazatelja kvantitativne analize krvi za hepatitis može biti samo kvalificirani i iskusni stručnjaci, a suvremena tehnologija pomaže pri niskim koncentracijama virusa u krvi.

Kvalitativna PCR analiza ima za cilj utvrđivanje i potvrđivanje stvarne prisutnosti virusa u tijelu. To se provodi otkrivanjem protutijela na hepatitis u krvi. To je kvalitativni test za hepatitis jamči za točnost rezultata za 100% i omogućuje vam da dijagnosticirati u ranim fazama bolesti, što ga čini moguće za borbu protiv hepatitisa B u prvih nekoliko tjedana nakon infekcije i povećava šanse za potpuni oporavak (u slučaju tipa bolesti B).

Prednosti PCR

Kada se istražuje PCR metoda i dešifrira krvni test za hepatitis, također je moguće utvrditi genotip uzročnika bolesti. Postoji 6 genotipova virusa i velik broj podtipa, ali u našoj regiji raspodjela genotipova 1, 2 i 3.

Druge prednosti ove vrste dijagnoze su:

• Visoka točnost primljenih pokazatelja i niska vjerojatnost pogrešaka u njima;
• visoka razina osjetljivosti na virusne čestice u krvi;
• mogućnost otkrivanja nekoliko patogena;
• dijagnostika patogenih intracelularnih mikroorganizama koji posjeduju visoku antigenu varijabilnost;
• rad s dekodiranjem analize na hepatitisu omogućuje otkrivanje latentnih tekućih infekcija.

Kome imenovati

Analiza PCR-a za hepatitis nužno uključuje sljedeće kategorije ljudi:

• trudnice;
• zaposlenici zdravstvenih ustanova;
• potencijalni donatori krvi i organa;
• oni koji imaju karakteristične znakove bolesti;
• HIV zaražene osobe;
• ovisnici o drogama;
• osobe koje vode promiskuitetni seksualni život.

Kako se provodi analiza i zahtijeva se obuka?

Uzorkovanje krvi za PCR izvodi se iz vena. Obično se to javlja ujutro prije nego što je osoba jeli, jer nakon jela mora proći najmanje 8 sati. U ekstremnim slučajevima krv može biti uzeta za ispitivanje danju ili navečer, ali vremenski razmak između analize i unosa hrane treba biti najmanje 5 sati.

Ljudski faktor može kvantitativno utjecati na rezultate: njihova preciznost u nekim slučajevima smanjen sa 100% do 95%, tako da je darivanje krvi potrebno je pripremiti unaprijed. Kvaliteta biomaterijala za analizu bit će primjerena kada pacijent prati slijedeća pravila:

• Prije davanja krvi, možete piti samo čistu vodu;
• dva dana prije nego što studija treba odbiti od unosa pržene i masne hrane, kao i alkoholnih pića;
• dan prije posjeta laboratoriju treba prestati uzimati lijekove. U slučaju da to nije moguće, o tom je apsolutno neophodno upozoriti liječnika laboratorija i liječnika;
• uoči stresnih situacija i fizičkog napora;
• Nemojte proći ultrazvuk, radiologiju i instrumentalne studije nedugo prije darivanja krvi;
• sat vremena prije analize treba se suzdržati od pušenja;
• 20 minuta prije isporuke krvi treba ometati, smiriti se i čak disati.

Ako ispitivanje provodi dječak ispod 5 godina, roditelji bi trebali osigurati da piju kipuću vodu svakih 10 minuta pola sata prije uzimanja uzoraka biomaterijala.

Objašnjenje primljenih podataka

Analiza se može prikazati riječima (u slučaju kvalitativnog istraživanja), na primjer, "nije pronađena" ili "ispod raspona promjena". U prvom slučaju to ukazuje na to da infekcija nije otkrivena. U drugom - da je virus prisutan, ali u maloj količini. Ova situacija zahtijeva ponovno ispitivanje.

Virusna opterećenja određena su količinom infektivne RNA i označena su kao ME / ml ili kopije / ml.

Normalni pokazatelj kvantitativne analize za hepatitis C je u rasponu od 1.8x102 do 2.4x107 IU / ml.

Koncentracija virusa u krvi može biti:

• niska: od 600 IU / ml do 3x104 / ml;
• prosjek: od 3 h10 4 IU / ml do 8 h10 5 IU / ml;
• visoka: više od 8 h10 5 IU / ml.

Kvantitativna i kvalitativna analiza PCR-a za hepatitis omogućuje određivanje prisutnosti virusa u tijelu i njenoj koncentraciji. Lančana reakcija Polirazmernaya moći dijagnosticirati bolesti u ranoj fazi, no potrebno je bolesnika što prije liječiti u zdravstvenim ustanovama za pomoć i strogo poštivati ​​preporuke liječnika.

PCR-studija za hepatitis C: tipovi, indikacije, transkripta

Virusni hepatitis C je ozbiljna bolest koja se javlja kod oštećenja jetre. U osamdeset posto pacijenata prolazi u kronični oblik. Virus se umnožava u jetrenim stanicama - hepatocitima - i uzrokuje njihovu smrt. Mrtvo tkivo je zamijenjeno žarištima vezivnog tkiva, razvija se fibroza.

S razvojem fibroze jetre ne može obavljati svoju funkciju, počinje cirozu, koja je opasna za njene komplikacije: sve veći pritisak u portalnu venu, gastrointestinalnog krvarenja, oslabljen zgrušavanje krvi, mentalne promjene uslijed oštećenja jezgre mozga otrovne proizvode.

Uzrok bolesti je infekcija virusom iz obitelji Flaviviridae, koja je vrsta RNA virusa. To znači da se genetički materijal kojim se sintetiziraju proteini patogena kodira u molekuli ribonukleinske kiseline. Infekcija se javlja kroz krv, seksualno, i od trudnice do fetusa. Nažalost, između infekcije i početka proizvodnje antitijela može proći prilično veliku količinu vremena - od dva tjedna do šest mjeseci. To ne dopušta odrediti infekciju pomoću metode enzimskog imunološkog pregleda i započeti liječenje u ranoj fazi.

Što je PCR analiza?

PCR je metoda molekularne analize koja omogućuje otkrivanje genetskog materijala patogena već u prvom tjednu nakon infekcije koristeći lančanu reakciju polimeraze. Studija ima visoku specifičnost, točnost i omogućuje ne samo određivanje prisutnosti ili odsutnosti virusa, već i njegovu koncentraciju i genotip.

Za studiju, uzmite krv pacijenta u kojoj se RNA virusa može naći. U krvi se dodaju primeri - umjetno sintetizirani dijelovi željenog gena male duljine, a RNA polimeraza je poseban enzim koji množi količinu genetskog materijala patogena. Uz pomoć posebnog aparata provode se nekoliko ciklusa grijanja i hlađenja. Materijal se zatim analizira i uspoređuje s poznatim virusnim genima, na temelju kojih se donosi zaključak o prisutnosti ili odsutnosti infekcije.

Vrste PCR analize za hepatitis C

Postoje tri vrste PCR analize:

1. Kvalitativna PCR analiza. Prva faza studije. Omogućuje identificiranje genetskog materijala virusa u krvi.

Kvantitativna analiza PCR-a. Omogućuje određivanje količine virusa - koncentraciju genetskog materijala patogena u jednom mililitru krvi. Ova studija se provodi prije početka terapije, a potom na prvom, četvrtom, dvanaestom i (ako je tečaj dug) dvadeset četvrtog tjedna liječenja kako bi se procijenila njezina učinkovitost.

genotipizacija. Uzročnik hepatitisa C često i brzo mutira. Na planetu pronađeno je sedam varijanti genotipa tog virusa. U Rusiji su prva, druga i treća vrsta uobičajene. Svaki od genotipova ima različitu otpornost na terapiju, na primjer, učinkovitost liječenja prvog tipa je šezdeset posto, a drugi i treći dosežu osamdeset pet. Stoga, kako bi se odabrali prikladni lijekovi i propisali tijek liječenja dovoljnog trajanja, potrebno je točno utvrditi koja vrsta virusa je zaražena pacijentom.

Indikacije za PCR analizu za hepatitis C

PCR-studija propisana je u sljedećim slučajevima:

• kontakt s bolesnom osobom, što može dovesti do infekcije;
• pozitivno enzimski vezani imunotest;
• znakovi ciroze jetre: promjene veličine jetre, povećana slezena, pojava potkožnog venskog pleksusa na abdomenu;
• pojava simptoma oštećenja jetre: bol u desnom dijelu trbuha, žućkanje kože;
• povećana aktivnost ALT i AST u biokemijskoj analizi krvi;
• prije početka tretmana kako bi se utvrdilo količinu virusa;
• za praćenje učinkovitosti antivirusne terapije;
• nakon završetka liječenja za praćenje recidiva;
• u prisutnosti dijagnoze hepatitisa B, da se isključi mješovita oštećenja jetre.

Dekodiranje PCR studije za hepatitis C

Dekodiranje PCR analize i enzimskog imunološkog testa za hepatitis C treba obratiti stručnjak za hepatologu ili zaraznu bolest. Analizirati rezultate PCR je potrebno u kombinaciji s biokemijskim krvnim testom, biopsijom i ultrazvukom. Samo kvalificirani liječnik će moći analizirati rezultate studija i na temelju njih propisati pravu terapiju.

Dekodiranje kvalitativne analize.

Genetski materijal patogena pronađen je u analiziranom biološkom materijalu. Potvrđena je infekcija.

Nema infekcije, ili je količina RNA patogena ispod granice osjetljivosti.

Dekodiranje kvantitativne analize.

Normalan lik za zdrave ljude. To znači da ne postoji hepatitis C RNA u ispitnom materijalu, ili je njegova koncentracija ispod prag osjetljivosti studije.

Koncentracija RNA je ispod raspona kvantitativnosti. Takvi se rezultati tumače vrlo oprezno, povezuju ih s podacima drugih studija, često provode drugu studiju.

Razina viralnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se niska. Obično smanjenje količine virusa znači da je terapija uspješna.

Više od 8 x 10 ^ 5 IU / ml

Razina virusnog opterećenja pri određenoj koncentraciji smatra se visokom.

Više od 2,4 x 10 ^ 7 IU / ml

Količina RNA je iznad gornje granice raspona kvantifikacije. Zaključivanje o stupnju virusnog opterećenja s ovim rezultatom nije moguće. Obično u takvim slučajevima, test se ponavlja s razrjeđivanjem uzorka krvi.

Dekodiranje genotipizacije.

Otkriveno je RNA specifičnog genotipa

U biomateričnom virusu hepatitisa C detektira se specifični genotip i podtip. Rezultat je kodiran rimskim brojevima i latinskim slovima, na primjer - la, 2b. Postoji sedam genotipova i šezdeset sedam podtipova, ali u Rusiji postoje samo tri prve vrste.

Otkriveno je RNA virus hepatitisa C

U krvi, RNA se nalazi rijedak genotip za Rusiju, koji se ne može pripisati prvom, drugom ili trećem tipu. Potrebno je više istraživanja.

Ovaj rezultat pokazuje da je pacijent zdrav, ili da je razina RNA patogena premalena.

Situacija je moguća kada je PCR analiza za hepatitis C negativna, a enzimski imunosni test detektira protutijela protiv virusa. To znači da je pacijent imao akutni oblik hepatitisa C i izliječio se. Približno dvadesetak slučajeva infekcije rezultira spontanom liječenjem ako tijelo pacijenta ima dovoljno otpornosti na infekciju.

Unatoč činjenici da je PCR vrlo precizna analiza, njegovi rezultati mogu biti iskrivljeni u sljedećim situacijama:

• krv je prevezena u laboratorij pod neadekvatnim uvjetima, temperaturni režim je povrijeđen;
• uzorak biomaterijala je kontaminiran;
• u krvi su ostali tragovi heparina i drugih antikoagulanata;
• U ispitivanoj tvari bili su inhibitori - tvari koje usporavaju ili zaustavljaju lančanu reakciju polimeraze.

Prednosti PCR-a u odnosu na druge metode

1. Dijagnoza u ranim fazama. PCR detektira genetički materijal uzročnika bolesti. Pomoću imunofluorescentne analize moguće je odrediti samo imunoglobuline - tvari koje tijelo proizvodi kao odgovor na infekciju. U slučaju infekcije hepatitisom C, interval između infekcije i nastupa imunološkog odgovora može biti nekoliko tjedana i mjeseci, a tada ELISA neće biti učinkovit. PCR će dati odgovor već u prvom tjednu nakon infekcije.

Niska vjerojatnost pogreške. U istraživanom materijalu određuje se genetički materijal koji je karakterističan samo za jednu vrstu patogena. To vam omogućuje izuzimanje netočnih rezultata. Kod ELISA-e moguće su pogreške jer se istovrsna vrsta protutijela može izdati protiv različitih virusa - takva antitijela nazivaju se križnim reaktivnostima.

Visoka osjetljivost. PCR može otkriti RNA patogena čak iu minimalnim količinama. To omogućuje identificiranje skrivenih infekcija.

Kako se pripremiti za isporuku krvi za PCR istraživanje

Za PCR analizu, venska krv je prikupljena za hepatitis C. Obično se dva dijela krvi odvede iz pacijentove vene istodobno: prvi se šalje za PCR, a drugi za ELISA. To je učinjeno kako bi se preciznije procijenilo koliko je pacijent zaražen virusom i kako imunitet bori protiv njega.

Obično su potrebna sljedeća pravila pacijenta:

• Ispitivanje krvi uzima se ujutro;
• prekid između posljednjeg obroka i isporuke krvi trebao bi biti osam do deset sati;
• dva ili tri dana prije analize morate odustati od pržene i masne hrane i alkohola;
• za dvadesetčetiri sata prije analize, pacijent treba izbjegavati tjelesno naprezanje: nemojte nositi težine, ne dolazite u teretanu ili bazen.